PEPTIDOS ANTIGENICOS DERIVADOS DE LA TELOMERASA.

Un péptido de la telomerasa, que consiste en entre 9 y 25 aminoácidos en el que el péptido de la telomerasa comprende la secuencia de SEQ ID NO:

2, 3, 4, 9, 10 ó 12 a 19, o un fragmento de SEQ ID NO: 2, 3, 4, 9, 10 ó 12 a 19, de al menos 8 aminoácidos de longitud, siendo capaz el fragmento de inducir una respuesta de las células T

Péptidos antigénicos derivados de la telomerasa.

Esta invención se refiere a péptidos que producen inmunidad mediada por células T, y a vacunas contra el cáncer y a composiciones para el tratamiento contra el cáncer que comprenden dichos fragmentos de péptidos. Esta invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden los péptidos y a métodos para generar linfocitos T capaces de reconocer y destruir células tumorales en un mamífero.

El cáncer se desarrolla a través de un proceso de etapas múltiples que implica varios sucesos mutacionales. Estas mutaciones dan como resultado una expresión/funcionamiento alterado de los genes que pertenecen a dos categorías: oncogenes y genes supresores de tumores. Los oncogenes surgen en la naturaleza a partir de proto-oncogenes a través de mutaciones puntuales o translocaciones, dando con ello como resultado un estado transformado de la célula que alberga la mutación. Todos los oncogenes codifican y actúan a través de una proteína. Los proto-oncogenes son genes normales de la célula que tienen el potencial de convertirse en oncogenes. En la mayoría de los casos, se ha observado que los proto-oncogenes son componentes de vías de transducción de señales. Los oncogenes actúan de un modo dominante. Por otro lado, los genes supresores de tumores actúan de forma recesiva, es decir, mediante la pérdida de la función y contribuyen a la oncogénesis cuando ambos alelos que codifican la proteína funcional se han alterado para producir productos génicos no funcionales.

La acción concertada de una combinación de oncogenes alterados y genes supresores de tumores da como resultado la transformación celular y el desarrollo de un fenotipo maligno.

Tales células están sin embargo inclinadas a la senescencia y tienen una vida de duración limitada. En la mayoría de los cánceres, la inmortalización de las células tumorales requiere la activación de un complejo enzimático denominado telomerasa. En las células somáticas, la subunidad catalítica de esta enzima no está expresada generalmente. Sucesos adicionales, tales como la acción de proteínas codificadas por un virus tumoral o la desmetilación de sitios de promotor silenciados, pueden dar como resultado la expresión de un complejo de telomerasa funcional en células tumorales.

En el campo de la inmunología humana del cáncer, se han observado en las dos últimas décadas esfuerzos intensos para caracterizar antígenos genuinos específicos del cáncer. En particular, se han hecho esfuerzos para analizar anticuerpos de antígenos tumorales humanos. La técnica anterior sugiere que tales anticuerpos podrían utilizarse tanto para fines diagnósticos como terapéuticos, por ejemplo en relación con un agente anti-cancerígeno. Sin embargo, los anticuerpos sólo se pueden unir a antígenos tumorales que están expuestos en la superficie de células tumorales. Por esta razón, los esfuerzos para producir un tratamiento del cáncer basado en el sistema inmune del cuerpo, han tenido menos éxito del esperado.

Una característica fundamental del sistema inmune es que puede distinguir entre propio y no propio y normalmente no reacciona contra moléculas propias. Se ha observado que el rechazo de tejidos u órganos trasplantados, procedentes de otros individuos es una respuesta inmune a los antígenos extraños en la superficie de las células trasplantadas. La respuesta inmune consiste en general en una respuesta humoral, mediada por anticuerpos, y en una respuesta celular. Los anticuerpos son producidos y secretados por linfocitos B y reconocen típicamente antígenos libres en conformación nativa. Por ello, también pueden reconocer potencialmente casi cualquier sitio expuesto sobre la superficie del antígeno. En contraposición con los anticuerpos, los linfocitos T, que median en el brazo celular de la respuesta inmune, reconocen antígenos sólo en el contexto de moléculas del MHC, y sólo después de un procesamiento apropiado del antígeno. Este procesamiento del antígeno consiste habitualmente en una fragmentación proteolítica de la proteína, dando como resultado péptidos que encajan en la muesca de las moléculas del MHC. Esto permite que las células T también reconozcan péptidos procedentes de antígenos intracelulares.

Las células T pueden reconocer péptidos aberrantes procedentes de cualquier lugar en la célula tumoral, en el contexto de moléculas del MHC sobre la superficie de la célula tumoral. Las células T subsiguientemente, pueden ser activadas para eliminar la célula tumoral que alberga el péptido aberrante. En modelos experimentales que implican tumores de múridos, se ha observado que mutaciones puntuales en proteínas "propias" intracelulares pueden producir antígenos de rechazo tumoral, que constan de péptidos que difieren en un solo aminoácido del péptido normal. Las células T que reconocen estos péptidos en el contexto de moléculas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC), en la superficie de las células tumorales, son capaces de destruir las células tumorales y, por tanto, expulsar el tumor del hospedador (Boon et al., 1989, Cell 58, 293-303).

Las moléculas del MHC en seres humanos se denominan generalmente moléculas del HLA (antígeno asociado a leucocito humano). Hay dos clases principales de moléculas del HLA, la clase I y la clase II. Las moléculas del HLA de clase I están codificadas por los subloci HLA A, B y C y activan principalmente células T citotóxicas CD8+. Las moléculas del HLA de clase II, por otro lado, activan principalmente células T CD4+ y están codificadas por los subloci DR, DP y DQ. Cada individuo tiene normalmente seis moléculas diferentes del HLA de clase I, habitualmente dos alelos de cada uno de los tres subgrupos A, B y C, aunque en algunos casos el número de moléculas diferentes del HLA de clase I está reducido, debido a la presencia repetida del mismo alelo del HLA.

Los productos génicos del HLA son altamente polimórficos. Individuos distintos expresan diferentes moléculas del HLA que difieren de las encontradas en otros individuos. Esto explica la dificultad en encontrar donantes de órganos con HLA compatibles en trasplantes. La importancia de la variación genética de las moléculas del HLA en la inmunobiología se refleja por su papel como genes de la respuesta inmune. A través de su capacidad de unión a los péptidos, la presencia o ausencia de determinadas moléculas del HLA, gobierna la capacidad de un individuo para responder a epítopos de péptidos específicos. Como consecuencia, las moléculas del HLA determinan la resistencia o la susceptibilidad a la enfermedad.

Las células T pueden inhibir el desarrollo y el crecimiento del cáncer, mediante una diversidad de mecanismos. Las células T citotóxicas, tanto CD8+ restringidos al HLA de clase I y CD4+ restringidos al HLA de clase II, pueden destruir directamente células tumorales que presentan los antígenos tumorales apropiados. Generalmente, las células T CD4+ auxiliares son necesarias para las respuestas de células T CD8+ citotóxicas, pero si el antígeno peptídico está presentado por una APC adecuada, las células T CD8+ citotóxicas se pueden activar directamente, dando como resultado una respuesta más veloz, fuerte y eficaz.

Aunque los péptidos que son presentados por las moléculas del HLA de clase II tienen longitudes distintas (12-25 aminoácidos), los péptidos presentados por las moléculas del HLA de clase I normalmente deben tener exactamente una longitud de nueve restos de aminoácidos, para encajar en la muesca de unión del HLA de clase I. Un péptido más largo daría como resultado la falta de unión, si no se puede procesar internamente por una APC o una célula diana, tal y como una célula cancerígena antes de presentarlo a la muesca del HLA de clase I. Sólo se ha descrito un número limitado de desviaciones de este requerimiento de nueve aminoácidos, y en esos casos, la longitud del péptido presentado era ocho o diez restos de aminoácidos.

Revisiones de cómo se unen los péptidos al MHC se pueden encontrar en Hans-Georg Rammensee, Thomas Friede y Stefan Stevanovic (1995, Immunogenetics 41, 178-228) y en Barinaga (1992, Science 257, 880-881). Male et al., (1987, Advanced Immunology, J.B. Lippincott Company, Filadelfia) ofrecen una explicación más extensa de los antecedentes técnicos de esta invención. En nuestra solicitud de patente internacional PCT/NO92/00032 (publicada como WO92/14756), describimos péptidos sintéticos y fragmentos de productos proteicos de oncogenes que tienen una mutación puntual o translocaciones, comparados...

1. Un péptido de la telomerasa, que consiste en entre 9 y 25 aminoácidos en el que el péptido de la telomerasa comprende la secuencia de SEQ ID NO: 2, 3, 4, 9, 10 ó 12 a 19, o un fragmento de SEQ ID NO: 2, 3, 4, 9, 10 ó 12 a 19, de al menos 8 aminoácidos de longitud, siendo capaz el fragmento de inducir una respuesta de las células T.

2. Un péptido de la telomerasa según la reivindicación 1, que consiste en la secuencia de SEQ ID NO: 2, 3, 4, 9, 10 ó 12 a 19.

3. Un péptido de la telomerasa según las reivindicaciones 1 ó 2 para uso en un método de tratamiento o profilaxis del cáncer.

4. Un péptido de la telomerasa según se reivindica en la reivindicación 3 para un uso como se especifica en ella, siendo capaz el péptido de la telomerasa de generar una respuesta de células T dirigida contra la proteína de la telomerasa.

5. Un péptido de la telomerasa según se reivindica en las reivindicaciones 3 ó 4 para un uso como se especifica en ellas, en el que el método comprende administrar a un mamífero que padece o que es probable que padezca cáncer, una cantidad terapéuticamente eficaz del péptido de la telomerasa de forma que se induce una respuesta de las células T dirigida contra la telomerasa en el mamífero.

6. Un péptido de la telomerasa según se reivindica en las reivindicaciones 4 ó 5 para un uso como se especifica en ellas, en el que la respuesta en las células T es una respuesta de células T citotóxicas.

7. Un ácido nucleico capaz de codificar un péptido de la telomerasa según las reivindicaciones 1 ó 2.

8. Un ácido nucleico según la reivindicación 7 para uso en un método de tratamiento o profilaxis del cáncer.

9. Una composición farmacéutica que comprende al menos un péptido de la telomerasa según se reivindica en las reivindicaciones 1 ó 2, o al menos un ácido nucleico según se reivindica en la reivindicación 7, junto con diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. Una composición farmacéutica que comprende una combinación de al menos un péptido de la telomerasa según se reivindica en las reivindicaciones 1 ó 2 y al menos un péptido capaz de inducir una respuesta de células T contra una proteína o un péptido de un oncogen o de un supresor tumoral mutante, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

11. Una composición farmacéutica según se reivindica en las reivindicaciones 9 ó 10 para uso en el tratamiento o profilaxis de cualquiera de los siguientes cánceres: cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer pancreático, cáncer colo-rectal, cáncer de pulmón, melanoma maligno, leucemias, linfomas, cáncer de ovario, cáncer cervical y carcinomas del conducto biliar.

12. Un método para la preparación de una composición farmacéutica según se reivindica en la reivindicación 9 en el que el método comprende mezclar al menos un péptido de la telomerasa según se reivindica en la reivindicación 1 ó 2, o al menos un ácido nucleico según se reivindica en la reivindicación 7, con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

13. Un método para la preparación de una composición farmacéutica según se reivindica en la reivindicación 10 en el que el método comprende mezclar al menos un péptido de la telomerasa según se reivindica en la reivindicación 1 ó 2, con al menos un péptido capaz de inducir una respuesta de células T contra una proteína o un péptido de un oncogen o de un supresor tumoral mutante, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

14. Una composición farmacéutica según se reivindica en la reivindicación 10 o un método de obtención de una composición farmacéutica según se reivindica en la reivindicación 13, en el que la proteína o péptido de un oncogen es una proteína o péptido p21-ras mutante.

15. Una composición farmacéutica según se reivindica en la reivindicación 10 o un método de obtención de una composición farmacéutica según se reivindica en la reivindicación 13, en el que el péptido o proteína de supresores de tumores es un retinoblastoma o péptido o proteína p53.

16. El uso de un péptido para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis del cáncer, consistiendo el péptido en la secuencia de uno cualquiera de SEQ ID NO: 12 a 19, comprendiendo el tratamiento o profilaxis generar una respuesta de células T, siendo la respuesta contra un péptido que consiste en la secuencia de uno de SEQ ID NO: 12 a 19, respectivamente, o un fragmento de los mismos, de al menos 8 aminoácidos de longitud, producible después del procesamiento por una célula presentadora de antígenos.

17. El uso de un ácido nucleico para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis del cáncer, en el que el ácido nucleico es capaz de codificar un péptido que consiste en la secuencia de uno cualquiera de SEQ ID NO: 12 a 19, comprendiendo el tratamiento o profilaxis generar una respuesta de células T, siendo la respuesta contra un péptido que consiste en la secuencia de uno de SEQ ID NO: 12 a 19, respectivamente, o un fragmento de los mismos, de al menos 8 aminoácidos de longitud, producible después del procesamiento por una célula presentadora de antígenos.

18. Uso según las reivindicaciones 16 ó 17, en el que el tratamiento o profilaxis comprende administrar a un mamífero que padece o que es probable que padezca cáncer una cantidad terapéuticamente o profilácticamente efectiva del péptido de forma que induce una respuesta de células T dirigida contra la telomerasa en el mamífero.

19. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18 en el que la respuesta e células T inducida es una respuesta de células T citotóxicas.

20. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 19 en el que el medicamento es una composición farmacéutica que comprende el péptido o ácido nucleico, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

21. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 16 o 18 a 20 en el que el medicamento comprende un péptido que consiste en la secuencia de una cualquiera de SEQ ID NOS: 12 a 19 y al menos un péptido capaz de inducir una respuesta de células T dirigida contra una proteína o un péptido de un oncogen o de un supresor tumoral mutante, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

22. Uso según la reivindicación 21 en el que la proteína o péptido de un oncogen es un péptido o proteína p21-ras mutante, o en el que el péptido o proteína de un supresor tumoral es un péptido o proteína p53.

23. Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 22, en el que el cáncer se selecciona entre: cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer pancreático, cáncer colo-rectal, cáncer de pulmón, melanoma maligno, leucemias, linfomas, cáncer de ovario, cáncer cervical y carcinomas del conducto biliar.

24. Un método para generar linfocitos T capaz de reconocer y destruir células tumorales en un mamífero, en el que el método comprende cultivar una muestra de linfocitos T tomad de un mamífero en presencia de un péptido en una cantidad suficiente para generar linfocitos T específicos de la telomerasa, en el que el péptido consiste en la secuencia de uno cualquiera de SEQ ID NO: 12 a 19, en el que los linfocitos T específicos de la telomerasa generan una respuesta contra un péptido que consiste en la secuencia de uno de SEQ ID NOS: 12 a 19, o un fragmento de los mismos, de al menos 8 aminoácidos de longitud, producible después del procesamiento por una célula presentadora de antígenos.

25. Un linfocito T específico de la telomerasa generado por un método según la reivindicación 24.