MEDIOS Y MÉTODO PARA PREDECIR DIABETES TIPO II.

Un método para diagnosticar una predisposición a la diabetes tipo 2 que comprende:

(a) determinar metabolitos en una muestra de plasma, suero o sangre de prueba de un sujeto que se sospecha tiene una predisposición a la diabetes tipo 2, dichos metabolitos son criptoxantina, ácido 2-hidroxi-palmítico, triacilglicérido (C16: 0,C18:1,C18:2), ácido gondoico, ácido tricosanoico y 5-Oxoprolina; y (b) comparar los resultados de prueba de la determinación en la etapa (a) con una referencia, por lo cual se diagnostica una predisposición a la diabetes tipo 2, en donde i) dicha referencia se deriva de un sujeto que se sabe tiene una predisposición a la diabetes tipo 2 y en donde los resultados idénticos para la muestra de prueba y la referencia son indicadores de una predisposición a la diabetes tipo 2, o ii) dicha referencia se deriva de un sujeto que se sabe no tiene predisposición para la diabetes tipo 2 o es una referencia calculada para los dichos metabolitos en una población de sujetos, y en donde las diferencias en las cantidades respectivas de cada uno de todos los seis metabolitos en la muestra de prueba en comparación con la muestra de referencia son indicadores de una predisposición a la diabetes tipo

La presente invención se relaciona con un método para diagnosticar una predisposición a la diabetes tipo 2 que comprende determinar criptoxantina, ácido 2-hidroxi-palmítico, triacilglicérido (C16:0, C18:1, C18:2), ácido gondoico, ácido tricosanoico, 5-oxoprolina en una muestra de plasma, suero o sangre de prueba de un sujeto que se sospecha tiene una predisposición a la diabetes tipo 2 y comparar dichos metabolitos con una referencia, por lo cual se diagnostica una predisposición a la diabetes tipo 2.

La prevalencia de la diabetes mellitus ha alcanzado aproximadamente 6% en el mundo industrializado y aumentará hasta 366 millones de personas afectadas en 2030 a nivel mundial. La razón más frecuente (tipo), 10 (aproximadamente 90 %) para diabetes en el mundo se explica por la diabetes tipo 2, que tiene una patogenia multifactorial. La secuencia patológica para la diabetes tipo 2 implica muchos elementos. Se considera que es obligatorio tener una predisposición genética que es en la actualidad poco entendida. Si luego ocurre el fenotipo de la diabetes se influencia por muchos factores ambientales que comparten una capacidad de estresar el sistema de homeostasis de la glucosa, ya sea al originar o empeorar la resistencia a la insulina o alterar la secreción de insulina. 15 Por supuesto muchas hormonas participan en la regulación de metabolismo de glucosa, pero la hormona clave es la insulina. Se mantiene la normoglicemia por la interacción equilibrada entre la acción de insulina y la secreción de insulina. Se produce la insulina por la célula β pancreática que es capaz de regular muy rápido a diferentes demandas de glucosa. La principal razón para la diabetes tipo 2 es una resistencia al aumento de insulina. Por lo tanto, la acción de la insulina normalmente disminuye pero inicialmente el sistema es capaz de compensar esto al incrementar la función de la célula β. En este momento solo tal vez se puede medir una tolerancia a la glucosa deteriorada o alteración de la glucosa en ayuno en el OGTT. Pero durante el tiempo la célula β se sobreestresará por la resistencia al aumento de insulina y se puede diagnosticar toxicidad de glucosa y una diabetes tipo 2.

Además de los problemas médicos directos por el alto o bajo azúcar en la sangre la principal carga médica y socioeconómica de la enfermedad se origina por las complicaciones asociadas. Las complicaciones devastadoras de la diabetes mellitus son en su mayoría enfermedades macrovasculares y microvasculares como falla renal crónica, retinopatía, neuropatía periférica y autonómica o infarto del miocardio. Por lo tanto, la morbilidad cardiovascular en pacientes con diabetes tipo 2 es dos a cuatro veces mayor que aquella de las personas no diabéticas (Stumvoll et al., Tipo 2 diabetes: principles of pathogenia y therapy, Lancet 2005).

A la luz de este mecanismo, la terapia de la diabetes se basa actualmente en el monitoreo de los niveles de azúcar en la sangre y en la reducción de un nivel elevado de azúcar en la sangre en un nivel normal mediante la administración de insulina exógena. Para este fin, se inyecta insulina exógena en la sangre. Alternativamente, se pueden regular los niveles de glucosa en la sangre mediante dietas nutricionales y la exclusión de los factores de riesgo del estilo de vida, tales como fumar, falta de ejercicio, altos niveles de colesterol, y un peso corporal inestable.

El Comité Experto de la ADA (Asociación Americana de Diabetes) reconoce un grupo intermedio de sujetos cuyos niveles de glucosa, aunque no cumplan los criterios diabetes, sin embargo, son demasiado altos para ser considerados normales. Este grupo se define como el que tiene niveles de glucosa en plasma en ayunas (FPG) >100 mg/dl (5.6 mmol/l) pero <126 mg/dl (7.0 mmol/l) o valores 2-h en la prueba de tolerancia a glucosa oral (OGTT) de >140 mg/dl (7.8 mmol/l) pero <200 mg/dl (11.1 mmol/l). Así, las categorías de los valores FPG son como sigue:

- FPG <100 mg/dl (5.6 mmol/l) = glucosa en ayunas normal;

40 -FPG 100-125 mg/dl (5.6-6.9 mmol/l) = IFG (glucosa en ayunas deteriorada);

- FPG >126 mg/dl (7.0 mmol/l) = diagnóstico provisional de la diabetes (se debe confirmar el diagnóstico, como se describe adelante). Las categorías correspondientes cuando se utiliza el OGTT son las siguientes:

- glucosa postcarga 2 h <140 mg/dl (7.8 mmol/l) = tolerancia a glucosa normal

- glucosa postcarga 2 h 140-199 mg/dl (7.8 -11.1 mmol/l) = IGT (tolerancia deteriorada de la glucosa)

45 -glucosa postcarga 2 h >200 mg/dl (11.1 mmol/l) = diagnóstico provisional de la diabetes (se debe confirmar el diagnóstico, como se describe adelante).

Diagnóstico de la diabetes mellitus tipo 2:

1. Síntomas de la diabetes más concentración de glucosa en plasma ocasional >200 mg/dl (11.1 mmol/l). Ocasional

se define como cualquier hora del día sin tener en cuenta el tiempo transcurrido desde la última comida. Los 50 síntomas clásicos de la diabetes incluyen poliuria, polidipsia, y pérdida de peso inexplicada. Alternativamente: 2.

FPG >126 mg/dl (7.0 mmol/l). Ayuno se define como la no absorción calórica durante por lo menos 8 h. Alternativamente: 3. glucosa postcarga 2 h >200 mg/dl (11.1 mmol/l) durante un OGTT. Se debe desarrollar la prueba como se describe por WHO, utilizando una carga de glucosa que contiene el equivalente de 75 g de glucosa anhidra disuelta en agua.

En la ausencia de hiperglucemia inequívoca, estos criterios se deben confirmar al repetir la prueba en un día diferente. La tercera medición (OGTT) no se recomienda para el uso clínico de rutina. (Asociación Americana de Diabetes, Diagnóstico y Clasificación de Diabetes Mellitus, Diabetes Care 2006) Sin embargo, un aumento en los niveles de azúcar en la sangre o una disminución en la insulina disponible son los acontecimientos más bajos en el desarrollo y progreso de la diabetes. No están todavía disponibles las mediciones diagnósticas alternativas o mediciones diagnósticas que podrían aún identificar los individuos en riesgo antes de la aparición temprana de la enfermedad o por lo menos en un estado temprano de la enfermedad.

De acuerdo con lo anterior, se debe observar el problema técnico subyacente de la presente invención como la provisión de medios y métodos para diagnosticar fiable y eficientemente una predisposición a la diabetes. El problema técnico se resuelve mediante las realizaciones caracterizadas en las reivindicaciones y descritas aquí adelante.

De acuerdo con lo anterior, la presente invención se relaciona con un método para diagnosticar una predisposición a la diabetes tipo 2 como se especifica en la reivindicación 1.

La expresión “método para diagnosticar” como se refiere de acuerdo con la presente invención significa que el método puede consistir esencialmente de las etapas anteriormente mencionadas o puede incluir etapas adicionales. Sin embargo, se debe entender que el método es un método llevado a cabo in vitro, es decir no practicado en el cuerpo humano o del animal. Diagnosticar como se utiliza aquí se refiere a evaluar la probabilidad de acuerdo con la cual un sujeto tendrá una predisposición para las enfermedades referidas aquí, es decir diabetes. El diagnóstico de una predisposición a veces se puede denominar como pronóstico o predicción de la probabilidad de que un sujeto desarrollará la enfermedad. Como lo entenderán aquellos expertos en la técnica, tal una evaluación, aunque se prefiere, usualmente puede no ser correcta para el 100% de los sujetos a ser diagnosticados. El término, sin embargo, requiere que una porción estadísticamente significativa de sujetos se puedan identificar por tener una predisposición para las enfermedades referidas aquí. Si una porción es estadísticamente significativa se puede determinar sin más trámite por la persona experta en la técnica utilizando varias herramientas de evaluación estadística bien conocidas, por ejemplo, determinación de intervalos de confianza, determinación del valor p, prueba t de Student, prueba Mann-Whitney, etc. Se encuentran detalles en Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983. Los intervalos de confianza preferidos son por lo menos 50%, por lo menos 60%, por lo menos 70%, por lo menos 80%, por lo menos 90%, por lo menos 95%. Los valores p son, preferiblemente, 0.2, 0.1, 0.05.

Diagnosticar de acuerdo con la presente invención incluye el monitoreo, confirmación, y clasificación de la predisposición para la... [Seguir leyendo]

1. Un método para diagnosticar una predisposición a la diabetes tipo 2 que comprende:

(a) determinar metabolitos en una muestra de plasma, suero o sangre de prueba de un sujeto que se sospecha tiene una predisposición a la diabetes tipo 2, dichos metabolitos son criptoxantina, ácido 2-hidroxi-palmítico, triacilglicérido (C16: 0,C18:1,C18:2), ácido gondoico, ácido tricosanoico y 5-Oxoprolina; y

(b) comparar los resultados de prueba de la determinación en la etapa (a) con una referencia, por lo cual se diagnostica una predisposición a la diabetes tipo 2, en donde

i) dicha referencia se deriva de un sujeto que se sabe tiene una predisposición a la diabetes tipo 2 y en donde los resultados idénticos para la muestra de prueba y la referencia son indicadores de una predisposición a la diabetes tipo 2, o

ii) dicha referencia se deriva de un sujeto que se sabe no tiene predisposición para la diabetes tipo 2 o es una referencia calculada para los dichos metabolitos en una población de sujetos, y en donde las diferencias en las cantidades respectivas de cada uno de todos los seis metabolitos en la muestra de prueba en comparación con la muestra de referencia son indicadores de una predisposición a la diabetes tipo 2.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho sujeto es un macho.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde dicha determinación comprende espectrometría de masa (MS).

4. El método de acuerdo con la reivindicación 3, en donde dicha espectrometría de masa es MS-cromatografía líquida (LC) y/o MS- cromatografía de gas (GC).

5. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde dicho sujeto es un humano.

6. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde por lo menos se determina un metabolito adicional seleccionado del grupo que consiste de:

(i) un ácido graso saturado de cadena larga, preferiblemente, ácido Lignocérico (C24:0), ácido Melísico (C30:0), o ácido tricosanoico (C23:0),

(ii) un ácido graso poli- insaturado, preferiblemente, ácido Docosahexaenoico (C22:cis[4,7,10,13,16,19]6), ácido Eicosapentaenoico (C20:cis[5,8,11,14,17]5), ácido Araquidónico (C20:cis-[5,8,11,14]4), ácido Linoleico (C18:cis[9,12]2), o ácido Linolénico (C18:cis[9,12,15]3),

(iii) un aminoácido, preferiblemente, Lisina, Alanina, Treonina, Triptofano, Valina, Isoleucina, Leucina, Cisteína, Metionina, Tirosina, Fenilalanina, Glicina, Prolina, o Glutamina,

(iv) un antioxidante, preferiblemente, ácido Ascórbico, Coenzima Q10, o alfa-Tocoferol,

(v) un metabolito del Ciclo de Ácido Cítrico, preferiblemente, Piruvato, Citrato, o Malato,

(vi) un metabolito del Ciclo de Urea, preferiblemente, Urea, Citrulina, Succinato, u Ornitina,

(vii) Manosa, ácido alfa-Cetoisocaproico, Glicerol, fracción de lípido, o ácido 3-Hidroxibutírico, y

(viii) glucosa.

7. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde por lo menos se determina un metabolito adicional seleccionado del grupo que consiste de: ácido 3-hidroxibutírico, alanina, ácido alfacetoisocaproico, alfa- tocoferol, arginina, ácido ascórbico, aspargina, beta-caroteno, colestenol, citrato, citrulina, creatinina, ácido eicosapentaenoico (C20:cis [5,8,11,14,17]5), folato, glucosa, glucosa-1-fosfato, glutamato, glutamina, ácido glicérico, glicerol-3-fosfato, glicina, isoleucina, lactato, leucina, malato, manosa, metionina, mioinositol, ornitina, ácido palmítico, fosfolípidos, sulfato de pregnenolona, ácido esteárico, succinato, ácido treónico, treonina, triacilglicéridos, triptofano, ácido úrico, y valina.

8. Una composición de diagnóstico que consiste de criptoxantina, ácido 2-hidroxi-palmítico, triacilglicérido (C16:0,C18:1,C18: 2), ácido gondoico, ácido tricosanoico y 5-Oxoprolina.

9. Uso de criptoxantina, ácido 2-hidroxi-palmítico, triacilglicérido (C16:0,C18:1,C18:2), ácido gondoico, ácido tricosanoico y 5-Oxoprolina medido en una muestra de sangre, plasma o suero para diagnosticar diabetes tipo 2 en un sujeto.