Procedimientos de predicción de diabetes Tipo II.

Un procedimiento para diagnosticar una predisposición a la diabetes tipo 2 que comprende:

(a) la determinación de al menos un metabolito que es el ácido gondoico en una muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto del que se sospecha que tiene una predisposición a la diabetes tipo 2; y

(b) la comparación de los resultados del ensayo de la determinación de la etapa (a) con una referencia, por lo que se diagnosticará una predisposición a la diabetes tipo 2 si dicha muestra de sangre, suero o plasma comprende una cantidad incrementada de ácido gondoico en comparación con una referencia derivada de un sujeto o un grupo conocido por no tener predisposición a la diabetes tipo 2.

Procedimientos de predicción de diabetes Tipo II

La presente memoria divulga un procedimiento para diagnosticar una predisposición a la diabetes que comprende determinar al menos un metabolito en una muestra de ensayo de un sujeto del que se sospecha que tiene una predisposición a la diabetes y comparar dicho al menos un metabolito con una referencia, mediante lo cual se diagnosticará una predisposición a la diabetes. Asimismo, la presente memoria divulga un conjunto de metabolitos, una recopilación de datos que comprende valores característicos de los metabolitos y un medio de almacenamiento que comprende dicha recopilación de datos. Además, la presente memoria divulga también un sistema que comprende medios para comparar valores característicos de los metabolitos de una muestra operativamente enlazados a un medio de almacenamiento de datos. La presente memoria divulga igualmente medios de diagnóstico que comprenden al menos un metabolito y el uso de dicho al menos un metabolito para la fabricación de medios de diagnóstico para diagnosticar una predisposición a la diabetes. Por último, la presente memoria divulga un procedimiento para la identificación de metabolitos relacionados con la diabetes.

La prevalencia de la diabetes mellitus ha llegado a aproximadamente el 6 % en el mundo industrializado y aumentará hasta 366 millones de personas afectadas en 2030 a nivel mundial. La razón más frecuente (tipo), (aproximadamente el 90 %) de la diabetes en el mundo representa la diabetes tipo 2, que tiene una patogenia multifactorial. La secuencia patológica para la diabetes tipo 2 implica muchos elementos. Se considera obligatorio tener una predisposición genética que actualmente apenas es comprendida.

Si se produce el fenotipo de la diabetes, está influido entonces por muchos factores medioambientales que comparten la capacidad de estresar el sistema de homeostasis de la glucosa, ya sea al originar o empeorar la resistencia a la insulina o ya sea al afectara la secreción de insulina. Muchas hormonas, por supuesto, intervienen en la regulación del metabolismo de la glucosa, pero la hormona clave es la insulina. La normoglucemla se mantiene por la Interacción equilibrada entre la acción de la Insulina y la secreción de insulina. La Insulina es producida por las células (3 pancreáticas que son capaces de regularse muy rápidamente a diferentes demandas de glucosa. La razón principal para la diabetes tipo 2 es un aumento de la resistencia a la insulina. Por tanto, la acción de la insulina disminuye normalmente pero ¡nlclalmente el sistema es capaz de compensar esto mediante el aumento de la función de las células p. En este momento quizás se podría medir solamente una glucemia basal alterada o una tolerancia a la glucosa alterada en la OGTT (prueba de tolerancia a la glucosa oral). Pero a lo largo del tiempo las células p se sobre-estresarán por el aumento de la resistencia a la insulina y la toxicidad de la glucosa y podría diagnosticarse una diabetes tipo 2.

Aparte de los problemas médicos directos por el alto o bajo azúcar en sangre, la principal carga médica y socioeconómica de la enfermedad es causada por las complicaciones asociadas. Las complicaciones devastadoras de la diabetes mellitus son en su mayoría enfermedades macrovasculares y mlcrovasculares como la insuficiencia renal crónica, la retinopatía, la neuropatía periférica y autónoma o el Infarto de miocardio. Por tanto, la morbilidad cardiovascular en pacientes con diabetes tipo 2 es de dos a cuatro veces mayor que la de las personas no diabéticas (Stumvoll y col., Type 2 diabetes: principies of pathogenesis and therapy, Lancet 2005).

A la luz de este mecanismo, la terapia de la diabetes se basa actualmente en la supervisión de los niveles de azúcar en sangre y la reducción de un nivel elevado de azúcar en sangre a un nivel normal mediante la administración de insulina exógena. Para este fin, se Inyecta insulina exógena en la sangre. De modo alternativo, los niveles de glucosa en la sangre pueden ser regulados mediante dietas nutrlclonales y la exclusión de los factores de riesgo del estilo de vida, tales como fumar, falta de ejercicio, altos niveles de colesterol, y un peso corporal inestable.

El Comité Experto de la ADA (Asociación Americana de Diabetes) reconocía un grupo intermedio de sujetos cuyos niveles de glucosa, si bien no cumplían los criterios de la diabetes, eran, sin embargo, demasiado elevados como para ser considerados normales. Este grupo se define como el que tiene niveles de glucemia en ayunas en plasma (FPG) > 100 mg/dl (5,6 mmol/l) pero < 126 mg/dl (7,0 mmol/l) o valores 2-h en la prueba de tolerancia a la glucosa oral (OGTT) de > 140 mg/dl (7,8 mmol/l) pero < 200 mg/dl (11,1 mmol/l). Por tanto, las categorías de los valores de FPG son como siguen:

- FPG <100 mg/dl (5,6 mmol/l) = glucemia basal normal;

- FPG 100-125 mg/dl (5,6-6,9 mmol/l) = IFG (glucemia basal alterada);

- FPG > 126 mg/dl (7,0 mmol/l) = diagnóstico provisional de diabetes (el diagnóstico debe ser confirmado, tal y

como se describe más abajo).

Las categorías correspondientes cuando se usa la OGTT son las siguientes:

-2 horas después de la carga de glucosa < 140 mg/dl (7,8 mmol/l) = tolerancia a la glucosa normal

-2 horas después de la carga de glucosa 140-199 mg/dl (7,8-11,1 mmol/l) = IGT (tolerancia a la glucosa alterada)

-2 horas después de la carga de glucosa > 200 mg/dl (11,1 mmol/l) = diagnóstico provisional de diabetes (el diagnóstico debe ser confirmado, tal y como se describe más abajo).

El diagnóstico de la diabetes mellitus tipo 2:

1. Los síntomas de la diabetes más una concentración de glucosa en plasma casual > 200 mg/dl (11,1 mmol/l). Casual se define como a cualquier hora del día sin tener en cuenta el tiempo desde la última comida. Los síntomas clásicos de la diabetes Incluyen poliuria, polidipsia, y pérdida de peso sin razón aparente. De modo alternativo: 2. FPG > 126 mg/dl (7,0 mmol/l). En ayunas se define como una ingesta no calórica durante al menos 8 h. De modo alternativo: 3. 2 horas después de la carga de glucosa > 200 mg/dl (11,1 mmol/l) durante una OGTT. La prueba debe llevarse a cabo tal y como describe la OMS, usando una carga de glucosa que contiene el equivalente de 75 g de glucosa anhidra disuelta en agua.

En ausencia de hlperglucemia inequívoca, estos criterios deben ser confirmados mediante pruebas repetidas en un día diferente. La tercera medición (OGTT) no se recomienda para uso clínico rutinario.

(American Diabetes Association, Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus, Diabetes Care 2006) Sin embargo, un aumento de los niveles de azúcar en sangre o una disminución de la insulina disponible son los acontecimientos más posteriores en el desarrollo y progresión de la diabetes. Aún no están disponibles mediciones diagnósticas alternativas o mediciones diagnósticas que pudieran incluso identificar individuos en riesgo antes de la aparición temprana de la enfermedad o al menos en un estado temprano de la enfermedad.

Thomas y col. (2005; Prostaglandins Leuotrienes and essential Fatty Acids 72(5): 335) investigaron ácidos grasos en plasma de neonatos nacidos de madres con y sin diabetes gestacional, y encontraron una reducción de ácido gondolco en trlgllcérldos plasmáticos y ásteres de colesterol plasmáticos de neonatos nacidos de mujeres con diabetes gestacional. Asimismo, Thomas y col. (2004, Eur J Clin Nutr 58:1492) informaron de que mujeres con diabetes gestacional tenían niveles reducidos de ácido gondoico en los triglicéridos plasmáticos, los ásteres de colesterol plasmáticos, y los fosfoglicéridos de colina en plasma. Thorand y col. (2007, Diabetes care 30(4):878) divulgaron que los niveles en plasma de E-selectina soluble y moléculas de adhesión intercelular solubles son predlctores de la diabetes tipo 2.

De acuerdo con lo anterior, el problema técnico que subyace a la presente invención debe verse como la provisión de medios y procedimientos para diagnosticar de un modo eficaz y fiable una predisposición a la diabetes. El problema técnico se resuelve mediante las realizaciones caracterizadas en las reivindicaciones y descritas en el presente documento a continuación.

De acuerdo con esto, la presente invención se refiere a un procedimiento para diagnosticar una predisposición a la diabetes tipo 2 que comprende:

(a) la determinación de al menos un metabolito en una muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto del que se sospecha que tiene una predisposición a la diabetes tipo 2, siendo dicho al menos un metabolito ácido gondoico; y

(b) la comparación de los resultados de la determinación de la etapa (a)... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para diagnosticar una predisposición a la diabetes tipo 2 que comprende:

(a) la determinación de al menos un metabolito que es el ácido gondoico en una muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto del que se sospecha que tiene una predisposición a la diabetes tipo 2; y

(b) la comparación de los resultados del ensayo de la determinación de la etapa (a) con una referencia, por lo que se diagnosticará una predisposición a la diabetes tipo 2 si dicha muestra de sangre, suero o plasma comprende una cantidad incrementada de ácido gondoico en comparación con una referencia derivada de un sujeto o un grupo conocido por no tener predisposición a la diabetes tipo 2.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la etapa b) es: comparación de los resultados del ensayo de la determinación de la etapa (a) con una referencia, por lo que se diagnosticará una predisposición a la diabetes tipo 2, en el que dicha referencia se deriva de un sujeto o un grupo conocido por no tener predisposición a la diabetes tipo 2; y por lo que un aumento en la muestra de sangre, suero o plasma en comparación con la muestra de referencia es indicativo de predisposición a diabetes tipo 2.

3. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que dicha determinación de dicho al menos un metabolito comprende espectrometría de masas (MS).

4. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicha espectrometría de masas es cromatografía líquida (LC) MS y/o cromatografía de gases (GC) MS.

5. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho sujeto es un ser humano.

6. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que se determina al menos un metabolito adicional seleccionado de entre el grupo que consiste en:

(i) un ácido graso saturado de cadena larga, preferiblemente, ácido Llgnocérlco (C24:0), ácido Melíslco (30:0), o ácido Tricosanoico (C23:0),

(¡i) un ácido graso poliinsaturado, preferiblemente, ácido Docosahexaenoico (C22:cis[4,7,10,13,16,19]6), ácido Eicosapentaenoico (C20:cis[5,8,11,14,17]5), ácido Araquldónlco (C20:cis-[5,8,11,14]4), ácido Linoleico (C18:cis[9,12]2), o ácido Linolénico (CI8:cis[9,12,15]3),

(i¡¡) un aminoácido, preferiblemente, Usina, Alanlna, Treonlna, Triptófano, Valina, Isoleucina, Leucina, Cisterna, Metionina, Tirosina, Fenilalanina, Glicina, Prollna, o Glutamina,

(iv) un antioxidante, preferiblemente, Ácido ascórbico, Coenzima Q10, o alfa-Tocoferol,

(v) un metabolito del Ciclo del Ácido Cítrico, preferiblemente, Plruvato, Citrato, o Malato,

(vi) un metabolito del Ciclo de la Urea, preferiblemente, Urea, Citrulina, Succinato, u Ornitina,

(vii) Mañosa, ácido alfa-Cetoisocaproico, Glicerol, fracción llpídlca, o ácido 3-Hidroxibutírico, y

(viii) glucosa,

en el que el sujeto es un sujeto masculino en caso de que el al menos un metabolito sea ácido Lignocérico (C24:0), ácido Linoleico (C18:cis[9,12]2), Leucina, Tirosina, o Succinato.

7. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que se determina al menos un metabolito adicional seleccionado de entre el grupo que consiste en: ácido 3-hldroxlbutírlco, alanina, ácido alfa-cetoisocaproico, alfa-tocoferol, arginina, ácido ascórbico, asparagina, beta-caroteno, colestenol, citrato, citrulina, creatinina, ácido eicosapentaenoico (C20:cis[5,8,11,14,17]5), folato, glucosa, glucosa-1-fosfato, glutamato, glutamina, ácido glicérico, glicerol-3-fosfato, glicina, isoleucina, lactato, leucina, malato, mañosa, metionina, mio-inositol, ornitina, ácido palmítico, fosfolípidos, sulfato de pregnenolona, ácido esteárico, succinato, ácido treónico, treonina, triacilglicéridos, triptófano, ácido úrico, y valina.

8. Uso de una composición de diagnóstico que comprende ácido gondoico para diagnosticar una predisposición a la diabetes tipo 2 mediante la determinación del ácido gondoico como blomarcador en una muestra de sangre, suero o plasma de un sujeto, en el que se diagnostica una predisposición a la diabetes tipo 2 si dicha muestra de sangre, suero o plasma comprende una cantidad incrementada de ácido gondoico en comparación con una referencia derivada de un sujeto o un grupo conocido por no tener predisposición a la diabetes tipo 2.

9. Uso del ácido gondoico medido en una muestra de sangre, suero o plasma como biomarcador para diagnosticar una predisposición a la diabetes tipo 2, por lo que se diagnostica una predisposición a la diabetes tipo 2 si dicha muestra de sangre, suero o plasma comprende una cantidad incrementada de ácido gondoico en comparación con una referencia derivada de un sujeto o un grupo conocido por no tener predisposición a la diabetes tipo 2.