Procedimiento para predecir la diabetes de tipo II.

Un procedimiento de diagnostico de una predisposición para la diabetes de tipo 2 que comprende:

(a) determinar al menos un metabolito en una muestra de sangre, de suero o de plasma de un sujeto sospechosode tener una predisposición para la diabetes de tipo 2, siendo dicho al menos un metabolito el ácido tricosanoico; y

(b) comparar los resultados de ensayo de la determinación de la etapa (a) con una referencia, de tal manera que se diagnostique una predisposición para la diabetes de tipo 2,

(i) en el que dicha referencia procede de un sujeto o de un grupo que se sabe que tiene una predisposición para la diabetes de tipo 2 y por lo que resultados idénticos para la muestra de sangre, de suero o de plasma y la referencia son indicativos de una predisposición para la diabetes de tipo 2, o

(ii) en el que dicha referencia procede de un sujeto o de un grupo que se sabe que no tiene predisposición para la diabetes de tipo 2 y por lo que la ausencia de dicho al menos un metabolito o de una cantidad de este que difiere en la muestra de sangre, de suero o de plasma en comparación con la muestra de referencia es indicativa de una predisposición para la diabetes de tipo 2, o,

(iii) en el que dicha referencia es una referencia calculada para dicho al menos un metabolito en una población de sujetos y por lo que la ausencia de dicho al menos un metabolito o una cantidad de este que difiere en la muestra de sangre, de suero o de plasma en comparación con la muestra de referencia es indicativa de una predisposición para la diabetes de tipo 2.

Procedimiento para predecir la diabetes de tipo II

La presente invención se refiere a un procedimiento para diagnosticar una predisposición para la diabetes que comprende determinar al menos un metabolito en una muestra de ensayo de un sujeto que se sospecha que tiene una predisposición para la diabetes y comparar dicho al menos un metabolito con una referencia, de modo que se diagnosticará una predisposición para la diabetes. Además, la presente memoria descriptiva desvela un conjunto de metabolitos, un conjunto de datos que comprenden los valores característicos de los metabolitos y un medio de almacenamiento que comprende dicha conjunto de datos. Además, la presente memoria descriptiva también desvela un sistema que comprende medios para comparar los valores característicos de los metabolitos de una muestra ligados operativamente a un medio de almacenamiento de datos. Además, la presente memoria descriptiva desvela medios diagnósticos que comprenden al menos un metabolito y el uso de dicho al menos un metabolito para la fabricación de medios para diagnosticar una predisposición para la diabetes. Finalmente, la presente memoria descriptiva pertenece a un procedimiento para identificar metabolitos relacionados con la diabetes.

La prevalencia de la diabetes mellitus ha alcanzado aproximadamente el 6 % en el mundo industrializado y en el 2030 se incrementará hasta 366 millones de personas afectadas en todo el mundo. La razón más frecuente (tipo), (aproximadamente el 90 %) de la diabetes en el mundo está representado por la diabetes de tipo 2, que tiene una patogénesis multifactorial. La secuencia patológica de la diabetes de tipo 2 entraña numerosos elementos. Se cree que es preceptivo tener una predisposición genética que actualmente es poco conocida. Si el fenotipo diabético ocurre después, está influenciado por numerosos factores ambientales que comparten una habilidad para estresar el sistema de la homeostasis de la glucosa, bien causando o bien empeorando la resistencia a la insulina o alterando la secreción de la insulina. Por supuesto, numerosas hormonas participan en la regulación del metabolismo de la glucosa, pero la hormona clave es la insulina. La normoglucemia se mantiene por la interacción equilibrada entre la acción de la insulina y la secreción de la insulina. La insulina que se produce en las células p-pancreáticas es capaz de regular muy rápido a las distintas demandas de glucosa. El motivo principal de la diabetes de tipo 2 es un incremento de la resistencia a la insulina. Por lo tanto, la acción de la insulina normalmente disminuye, pero inicialmente el sistema es capaz de compensar esto por medio de un incremento de la función de las células-p. En este instante quizá se pueda medir solamente una alteración de la glucosa en ayunas o una alteración de la tolerancia a la glucosa en la PTGO (prueba de la tolerancia a la glucosa oral). Pero a lo largo del tiempo la célula se sobre estresará por el incremento de la resistencia a insulina y la toxicidad de la glucosa y se podría diagnosticar una diabetes de tipo 2.

Además de los problemas médicos directos por los niveles altos o bajos de glucosa en sangre, la principal carga médica y socioeconómica de la enfermedad está causada por las complicaciones asociadas. Las devastadoras complicaciones de la diabetes mellitus son en su mayoría enfermedades macrovasculares y microvasculares como la insuficiencia renal crónica, retinopatía, neuropatía periférica y autónoma, o infarto de miocardio. Por lo tanto, la morbilidad cardiovascular en pacientes con diabetes de tipo 2 es de dos a cuatro veces mayor que en personas no diabéticas (Stumvoll y col., Type 2 diabetes: principies of pathogenesis and therapy, Lancet 2005).

A la luz de este mecanismo, la terapia de la diabetes está basada actualmente en controlar los niveles de glucosa en sangre y reducir un nivel elevado de glucosa en sangre a un nivel normal por medio de la administración de insulina exógena. Para este fin, la insulina exógena se inyecta en la sangre. Como alternativa, los niveles de glucosa en la sangre pueden regularse con dietas nutricionales y con la exclusión de factores de riesgo en el estilo de vida, tales como tabaquismo, falta de ejercicio, niveles elevados de colesterol, y peso corporal inestable.

El comité de expertos de la ADA (American Diabetes Association) reconoció un grupo intermedio de sujetos cuyos niveles de glucosa, a pesar de no cumplir con los criterios para la diabetes, son no obstante demasiado altos para considerarlos normales. Este grupo se define por tener niveles de glucosa en plasma en ayunas (GPA) >100mg/dl (5,6 mmol/l), pero <126 mg/dl (7,0 mmol/l) o valores a las 2 h de la prueba de tolerancia a la glucosa oral (PTGO) de >140 mg/dl (7,8 mmol/l), pero <200 mg/dl (11,1 mmol/l). Por lo tanto las categorías de los valores de GPA son las siguientes:

- GPA <100 mg/dl (5,6 mmol/l) = glucosa normal en ayunas;

- GPA 100-125 mg/dl (5,6-6,9 mmol/l) = GAA (glucosa alterada en ayunas);

- GPA >126 mg/dl (7,0 mmol/l) = diagnóstico provisional de diabetes (el diagnóstico se debe confirmar, tal como se describe a continuación).

Las correspondientes categorías cuando se usa la PTGO son las siguientes:

- 2-h después de la carga de glucosa <140 mg/dl (7,8 mmol/l) = tolerancia a la glucosa normal.

- 2-h después de la carga de glucosa 140-199 mg/dl (7,8 -11,1 mmol/l) = TGA (tolerancia a glucosa alterada)

- 2-h después de la carga de glucosa >200 mg/dl (11,1 mmol/l) = diagnóstico provisional de diabetes (el diagnóstico se

debe confirmar, tal como se describe a continuación).

Diagnóstico de la Diabetes mellitus de tipo 2:

1. Síntomas de diabetes más concentración casual de glucosa en plasma >200 mg/dl (11,1 mmol/l). Casual se define como cualquier hora del día independientemente del tiempo transcurrido desde la última comida. Los síntomas clásicos de la diabetes incluyen poliuria, polidipsia, y pérdida de peso inexplicable. Como alternativa: 2. GPA >126 mg/dl (7,0 mmol/l). En ayunas se define como sin ingesta calórica durante al menos 8 h. Como alternativa: 3. 2- h después de la carga de glucosa >200 mg/dl (11,1 mmol/l) durante una PTGO. El ensayo se debería realizar tal como describe la OMS, usando una carga de glucosa que contiene el equivalente de 75 g de glucosa anhidra disuelta en agua.

En ausencia de hiperglucemia inequívoca, estos criterios deberían confirmarse repitiendo el ensayo en un día distinto. La tercera medida (PTGO) no se recomienda para el uso rutinario clínico (American Diabetes Association, Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus, Diabetes Care 2006). Sin embargo, un incremento en los niveles de azúcar en sangre o una disminución de la insulina disponible son más bien desarrollos corriente abajo en el desarrollo y la progresión de la diabetes No se dispone aún de medidas diagnósticas alternativas o medidas diagnósticas que podrían incluso identificar individuos de riesgo antes de la aparición temprana de la enfermedad o al menos en el estado temprano de la enfermedad.

Taylor y col. (Ann Clin Biochem 24(3):293 (1987)) desvelan la determinación de los ácidos grasos en los eritrocitos de pacientes normales frente a los de diabetes mellitus por medio de cromatografía de gases-líquida. Rodríguez y col. (Prostaglandins Leukotrienes and essential Fatty Acids 71(5): 303 (2004)) analizaron el efecto de la diabetes mellitus de tipo 2 en la composición de los ácidos grasos de los fosfolípidos en plasma por medio de cromatografía de gases. Jellum y col. (Clin Chem 18(8): 800 (1972)) desvelan un sistema para el análisis de los múltiples componentes de los materiales biológicos que incluye la cromatografía líquida de gases, proponiendo a la glucosa, al ácido beta-hidroxobutírico y ácido acetoacético como marcadores para la diabetes mellitus. Thorand y col. (Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 26(2):398 (2006) desvelan que los niveles en plasma de la E-selectina soluble y de la molécula 1 de adhesión intercelular soluble son indicadores de diabetes mellitus de tipo 2.

Por consiguiente, el problema técnico subyacente en la presente invención puede verse como la provisión de medios y procedimientos para diagnosticar eficaz y fiablemente la diabetes de tipo 2. El problema técnico se resuelve por medio de las realizaciones caracterizadas en las reivindicaciones y que se describen en el presente documento a continuación.

Por consiguiente, la presente invención se refiere a un procedimiento para diagnosticar una predisposición para la diabetes que comprende:

(a) determinar al menos un metabolito en una muestra de ensayo de un sujeto que se sospecha que padece diabetes... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de diagnostico de una predisposición para la diabetes de tipo 2 que comprende:

(a) determinar al menos un metabolito en una muestra de sangre, de suero o de plasma de un sujeto sospechosode tener una predisposición para la diabetes de tipo 2, siendo dicho al menos un metabolito el ácido tricosanoico; y

(b) comparar los resultados de ensayo de la determinación de la etapa (a) con una referencia, de tal manera que se diagnostique una predisposición para la diabetes de tipo 2,

(i) en el que dicha referencia procede de un sujeto o de un grupo que se sabe que tiene una predisposición para la diabetes de tipo 2 y por lo que resultados idénticos para la muestra de sangre, de suero o de plasma y la referencia son indicativos de una predisposición para la diabetes de tipo 2, o

(¡i) en el que dicha referencia procede de un sujeto o de un grupo que se sabe que no tiene predisposición para la diabetes de tipo 2 y por lo que la ausencia de dicho al menos un metabolito o de una cantidad de este que difiere en la muestra de sangre, de suero o de plasma en comparación con la muestra de referencia es indicativa de una predisposición para la diabetes de tipo 2, o,

(i¡¡) en el que dicha referencia es una referencia calculada para dicho al menos un metabolito en una población de sujetos y por lo que la ausencia de dicho al menos un metabolito o una cantidad de este que difiere en la muestra de sangre, de suero o de plasma en comparación con la muestra de referencia es indicativa de una predisposición para la diabetes de tipo 2.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicha determinación de dicho al menos un metabolito comprende espectrometría de masas (EM).

3. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que dicha espectrometría de masas es EM acoplada a cromatografía líquida (CL) y/o EM acoplada a cromatografía de gases (CG).

4. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho sujeto es un ser humano.

5. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que se determina al menos un metabolito adicional seleccionado del grupo que consiste en:

(i) un ácido graso saturado de cadena larga, preferentemente, Ácido lignocérico (C24:0), Ácido melísico (C30:0),

(¡i) un ácido graso poliinsaturado, preferentemente, Ácido docohexanóico (C22:cis[4,7,10,13,16,19)6), Ácido eicosapentanóico (C20:cis[5,8,11,14,17)5), Ácido araquidónico (C20:c¡s-[5,8,11,14)4), Ácido linoleico (C18:cis[9,12]2), o Ácido linolénico(C18:cis[9,12,15)3),

(iii) un aminoácido, preferentemente, Usina, Alanina, Treonina, Triptófano, Valina, Isoleucina, Leucina, Cisteína, Metionina, Tirosina, Fenilalanina, Glicina, Prolina, o Glutamina,

(iv) un antioxidante, preferentemente, Ácido ascórbico, Coenzima Q10, o Alfa-tocoferol,

(v) un metabolito del ciclo del ácido cítrico, preferentemente, Piruvato, Citrato, o Malato,

(vi) un metabolito del ciclo de la urea, preferentemente, Urea, Citrulina, Succinato, u Ornitina,

(vii) Mañosa, Ácido alfa-cetoisocapróico, Glicerol, fracción lipídica, o ácido 3-hidroxibutírico, y

(viii) glucosa.

6. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que se determina al menos un metabolito adicional seleccionado del grupo que consiste en: ácido 3-hidroxibutírico, alanina, ácido alfa-cetoisocapróico, alfa- tocoferol, arginina, ácido ascórbico, aspargina, beta-caroteno, colestenol, citrato, citrulina, creatinina, ácido eicosapentaenóico (C20:cis[5,8,11,14,17)5), folato, glucosa, glucosa-1-fosfato, glutamato, glutamina, ácido glicérico, glicerol-3-fosfato, glicina, isoleucina, lactato, leucina, malato, mañosa, metionina, mioinositol, ornitina, ácido palmítico, fosfolípidos, sulfato de pregnolona, ácido esteárico, sucinato, ácido terónico, treonina, triacilglicéridos, triptófano, ácido úrico y valina.

7. El uso de un medio diagnóstico que comprende medios para la determinación específica del ácido tricosanóico para diagnosticar una predisposición para la diabetes de tipo 2 mediante la determinación del ácido tricosanóico como un biomarcador en una muestra de sangre, de suero o de plasma de un sujeto.

8. El uso de una composición diagnóstica que comprende ácido tricosanóico para diagnosticar una predisposición para la diabetes de tipo 2 mediante la determinación del ácido tricosanóico como un biomarcador en una muestra de sangre, de suero o de plasma de un sujeto.

9. El uso de la reivindicación 8, en el que dicha composición diagnóstica comprende adicionalmente medios para la detección específica del Ácido tricosanóico.

10. El uso del ácido tricosanóico como biomarcador en una muestra de sangre, de suero o de plasma para diagnosticar una predisposición para la diabetes de tipo 2 en un sujeto.