DETECCIÓN DE UN ANTICUERPO TERAPÉUTICO EN UN ANIMAL DE EXPERIMENTACIÓN.

Método de detección de un anticuerpo terapéutico destinado al uso en un humano en una muestra obtenida de un animal de experimentación que comprende las etapas de a) proporcionar la muestra a analizar,

b) incubar dicha muestra con un anticuerpo que se une a dicho anticuerpo terapéutico y no se une a las inmunoglobulinas de dicho animal de experimentación, c) opcionalmente, incubar dicha muestra con un reactivo adecuado para la detección selectiva del anticuerpo terapéutico total, activo o unido al antígeno, y d) correlacionar el complejo formado en (b) o (c) con la concentración de dicho anticuerpo terapéutico

La presente invención se refiere al campo de los anticuerpos terapéuticos. Se refiere especialmente al estudio de anticuerpos terapéuticos en un animal de experimentación. La presente invención da a conocer un método para detectar un anticuerpo terapéutico en una muestra obtenida de un animal de experimentación que comprende las etapas de a) proporcionar la muestra a analizar, b) incubar dicha muestra con un anticuerpo que se une a un anticuerpo terapéutico y que no se une a las inmunoglobulinas de dicho animal de experimentación, c) opcionalmente incubar dicha muestra con un reactivo adecuado para la detección selectiva del anticuerpo total, activo o unido al antígeno y d) correlacionar el complejo formado en (b) o (c) con la concentración de dicho anticuerpo terapéutico. También hace referencia a la utilización de un anticuerpo que se une a un anticuerpo terapéutico y no se une a las inmunoglobulinas de un animal de experimentación para determinar la concentración de anticuerpo terapéutico total, activo o unido al antígeno en una muestra obtenida de un animal de experimentación.

Desde el desarrollo de los primeros anticuerpos monoclonales por Koehler y Milstein en 1974 se han dedicado grandes esfuerzos al desarrollo de anticuerpos adecuados para la terapéutica en humanos. Los primeros anticuerpos monoclonales que estuvieron disponibles se habían desarrollado en ratones y ratas. Estos anticuerpos al ser utilizados para el tratamiento de humanos provocaban efectos secundarios no deseados debido al desarrollo de anticuerpos anti-roedor. Se han dedicado muchos esfuerzos a la reducción e incluso la eliminación de dichos efectos secundarios no deseados.

En los últimos diez años se ha comercializado un número cada vez mayor de anticuerpos monoclonales humanos o anticuerpos monoclonales humanizados. Como ejemplos bien conocidos podemos incluir, por ejemplo, Herceptin y MabThera de Hoffmann-La Roche, Basilea.

Un número bastante significativo de anticuerpos monoclonales humanos o humanizados se encuentra en investigación y necesita ser estudiado en animales de experimentación, antes de que pueda considerarse su administración en humanos para realizar el primer ensayo.

Con la ayuda de animales de experimentación deben estudiarse criterios importantes como la biodisponibilidad y el aclaramiento de anticuerpos, sólo por mencionar dos de ellos. Muchos de estos estudios requieren la cuantificación del anticuerpo terapéutico en medio de los propios anticuerpos del huésped. En la mayoría de casos se utilizan como animales de experimentación mamíferos. La toxicología se evalúa habitualmente en primer lugar en roedores como ratones y ratas. En etapas más avanzadas del desarrollo del fármaco deben incluirse incluso monos en dichos estudios pre-clínicos, especialmente antes de la administración del fármaco a humanos.

Los mamíferos poseen habitualmente entre aproximadamente 10 y aproximadamente 30 miligramos de inmunoglobulinas por ml en la circulación.

Los anticuerpos monoclonales terapéuticos deben analizarse típicamente con niveles séricos entre aproximadamente 1 nanogramo por ml y aproximadamente 100 microgramos por ml. Por lo tanto, el anticuerpo terapéutico debe detectarse en medio de un fondo de anticuerpos del huésped que se encuentra en un exceso de aproximadamente entre 100 veces y 10 millones de veces. La detección de un anticuerpo terapéutico humano o humanizado en medio del fondo de las inmunoglobulinas del huésped representa un cometido bastante significativo del farmacólogo. Además, se apreciará que anticuerpos terapéuticos diferentes pueden necesitar reactivos y formatos de ensayo diferentes. La detección de anticuerpos humanos o humanizados se hace más y más difícil cuanto más cercano se encuentra el animal de experimentación al H. sapiens.

En el documento US 2004/214761 se dan a conocer métodos para el tratamiento del mieloma múltiple. Lei, B. y otros en Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 41 (2000) 262-266 notifican que los anticuerpos de la retinopatía asociada al melanoma humano alteran la propia respuesta retiniana del mono ERG in vivo. Hazelwood, M. y otros (Clin. Exp. Immunol. 93 (1993) 157-164) notifican la adquisición de anticuerpos contra el polisacárido capsular neumocócico del Haemophilus influenzae tipo b y contra el toxoide tetánico con la edad en el Reino Unido. Nath, D., y otros (J. Biol. Chem. 270 (1995) 26184-26191) notifican que el dominio tipo inmunoglobulina amino terminal de la sialoadhesina contiene el sitio de unión al ácido siálico. En el documento EP 1 098 198 se notifica un método para la determinación cualitativa y cuantitativa de anticuerpos humanos de la clase IgG.

Es un objetivo de la presente invención investigar si pueden mejorarse los métodos para la detección de un anticuerpo terapéutico en una muestra obtenida de un animal de experimentación. También se ha investigado si puede estudiarse un anticuerpo terapéutico humano o humanizado en el suero de monos, especialmente en el suero de simios inferiores. Este objetivo se ha conseguido mediante la presente invención tal como se describe más adelante y en la sección de ejemplos y tal como se reivindica en las reivindicaciones adjuntas.

En una primera realización, la presente invención se refiere a un método para detectar un anticuerpo terapéutico en una muestra obtenida de un animal de experimentación que comprende las etapas de a) proporcionar la muestra a analizar, b) incubar dicha muestra con un anticuerpo que se une a un anticuerpo terapéutico y que no se une a las inmunoglobulinas de dicho animal de experimentación, c) opcionalmente incubar dicha muestra con un reactivo adecuado para la detección selectiva del anticuerpo terapéutico total, activo o unido al antígeno y d) correlacionar el complejo formado en (b) o (c) con la concentración de dicho anticuerpo terapéutico.

El término “anticuerpo terapéutico” se refiere a cualquier preparación de anticuerpo destinado a ser utilizado en un ser humano. Preferentemente dicho anticuerpo terapéutico será un anticuerpo monoclonal. Es más preferente que dicho anticuerpo monoclonal se obtenga de un simio superior o sea un anticuerpo monoclonal humano. Preferentemente será un anticuerpo monoclonal humano. También es preferente que dicho anticuerpo monoclonal terapéutico sea un anticuerpo monoclonal humanizado.

El término “anticuerpo monoclonal” tal como se utiliza en la presente invención se refiere a un anticuerpo obtenido a partir de una población de anticuerpos substancialmente homogéneos, es decir, que los anticuerpos individuales que forman parte de la población son idénticos excepto por posibles mutaciones naturales que pueden estar presentes en cantidades pequeñas. Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos, dirigiéndose contra un sitio antigénico único. Además, en comparación con las preparaciones de anticuerpos monoclonales que incluyen anticuerpos diferentes dirigidos contra determinantes (epitopos) diferentes, cada anticuerpo monoclonal se dirige contra un único determinante del antígeno. Además de por su especificidad, los anticuerpos monoclonales son ventajosos porque pueden ser sintetizados sin contaminación por otros anticuerpos. El modificador “monoclonal” indica el carácter del anticuerpo a ser obtenido a partir de una población substancialmente homogénea de anticuerpos, y no debe interpretarse como que requiere la producción de los anticuerpos por cualquier método concreto. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales que pueden utilizarse de acuerdo con la presente invención pueden sintetizarse mediante el método del hibridoma, descrito por primera vez por Koehler, G., y otros, Nature 256 (1975) 495-497, o mediante métodos de ADN recombinante (ver, por ejemplo, la patente U.S. nº 4.816.567). Los “anticuerpos monoclonales” también pueden aislarse a partir de bibliotecas de anticuerpos en fagos utilizando las técnicas descritas, por ejemplo, en Clackson, T., y otros, Nature 352 (1991) 624-628 y Marks, J. D., y otros, J. Mol. Biol. 222 (1991) 581-597.

Las formas “humanizadas” de anticuerpos no humanos (por ejemplo, de roedor) son anticuerpos quiméricos que contienen secuencias parciales derivadas de inmunoglobulinas no humanas y de inmunoglobulinas humanas. En su mayor parte, los anticuerpos humanizados derivan de una inmunoglobulina humana (anticuerpo receptor), en la cual se sustituyen residuos de la región hipervariable del receptor por residuos de una región hipervariable de especies no humanas (anticuerpo donante) tales... [Seguir leyendo]

1. Método de detección de un anticuerpo terapéutico destinado al uso en un humano en una muestra obtenida de un animal de experimentación que comprende las etapas de

a) proporcionar la muestra a analizar,

b) incubar dicha muestra con un anticuerpo que se une a dicho anticuerpo terapéutico y no se une a las inmunoglobulinas de dicho animal de experimentación,

c) opcionalmente, incubar dicha muestra con un reactivo adecuado para la detección selectiva del anticuerpo terapéutico total, activo o unido al antígeno, y

d) correlacionar el complejo formado en (b) o (c) con la concentración de dicho anticuerpo terapéutico.

2. Método, según la reivindicación 1, caracterizado además porque dicho animal de experimentación se selecciona del grupo formado por los miembros de las familias de los titíes y tamarinos, monos del viejo mundo, lémures enanos y ratón, gibones y simios inferiores, lémures verdaderos, así como cruces de los mismos.

3. Método, según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado además porque dicho anticuerpo que se une al anticuerpo terapéutico y no se une a las inmunoglobulinas del animal de experimentación es un anticuerpo que se une al mismo epítopo que el anticuerpo depositado en DSM ACC 2708.

4. Método, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado además porque dicho anticuerpo terapéutico es un anticuerpo humano o un anticuerpo humanizado.

5. Método, según la reivindicación 4, caracterizado además porque dicho anticuerpo humano o humanizado es un anticuerpo monoclonal.

6. Método, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que se detecta el anticuerpo terapéutico total.

7. Método, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que se detecta el anticuerpo terapéutico activo.

8. Método, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que se detecta el anticuerpo terapéutico que está unido a su antígeno.

9. Utilización de un anticuerpo que se une a un anticuerpo terapéutico destinado al uso en un humano y no se une a las inmunoglobulinas de un animal de experimentación para determinar la concentración de anticuerpo terapéutico total, activo o unido a antígeno en una muestra obtenida de un animal de experimentación.

10. Utilización, según la reivindicación 9, en la que dicho anticuerpo se une al mismo epítopo que el anticuerpo depositado en DSM ACC 2708.