MÉTODO DE VALORACIÓN DEL RIESGO DE ENFERMEDADES CARDIOVASCULARES ISQUÉMICAS USANDO CONJUGADOS DE FOSFORILCOLINA.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

[0001] Este campo se refiere al campo de evaluación de riesgo de enfermedad cardiovascular, tal como la ateroesclorosis y las enfermedades cardiovasculares isquémicas.

DESCRIPTION DE LA TÉCNICA RELACIONADA [0002] Ateroesclorosis es una enfermedad crónica que causa un engrosamiento de la capa más interna (la íntima) de las arterias de tamaño medio y grande. Ello hace que el flujo de sangre disminuya y pueda causar isquemia y la destrucción de tejido en órganos suministrados por los vasos afectados. La ateroesclorosis es la mayor causa de enfermedad cardiovascular incluyendo infarto de miocardio, ataque de apoplejía y enfermedad arterial periférica. Es la mayor causa de mortalidad en el mundo occidental y se predice que puede llegar a liderar la causa de muerte en el mundo entero dentro de dos décadas. [0003] La enfermedad se inicializa por acumulación de lipoproteínas; primariamente lipoproteína de baja densidad (LDL)m en la matriz extracelular del vaso. Estas particulas LDL se agregan y se someten a una modificación oxidativa. LDL oxidad es proinflamartoria, tóxica y causa daño bascular. Ateroesclerosis reprensta en muchos aspectos una respuesta a este daño incluyendo inflamación y fibrosis. [0004] En 1989 Palinski y sus colegas indentificaron anticuerpos circulantes contra LDL oxidadas en humanos. Esta obeservación sugirió que la ateroesclerosis puede ser una enfermedad autoinmune causada por reaxxiones inmunes contra lipoproteínas oxidadas. En este momento, varios laboratorios empezaron la búsqueda de asociaciones entre títulos de anticuerpo contre LDL oxidadas y enfermedad cardiovascular. Sin embargo, la imagen que surgió de estos estudios fue nada Lara. Esistían anticuerpos contra un gran número de difrentes epitopos en LD oxidadas, pero la estructura de estos epitopos era desconocida. El término “anticuerpos LDL oxidados” se refería así a una mezcla desconocida de diferentes anticuerpos en lugar de un anticuerpo específico. [0005] Esta bien establecido que hay una inflamación en curso en las lesiones de aterosclerosis, caracterizada por la activación de células inmunocompetentes y la producción de citoquinas inflamatorias. Factores de riesgo establecidos como hipertensión, lípidos en sangre, diabetes y fumar es probable que promuevan esta reacción inflamatoria, pero el mecanismo por el cual esto ocurre no está bien caracterizado y existen posiblilidades diferentes que no se excluyen mutuamente, Varios autoantígenos diferentes que pueden provocar esta reactividad inmune han sido propuestos, incluyendo lipoproteina oxidada de baja densidad (oxLDL) y proteínas de choque térmico (HSP) 2,3 . Los datos disponibles en el papel de reacciones inmunes en aterosclerosis indican una relación compleja, Un ejemplo de esto es la inmunización en modelos animales para influenciar la aterogenesis. Cuando HSP es utilizado, la ateroesclerosis aumenta pero disminuye cuand oxLDL es el antígeno 4,5. [0006] El papel de aOxLDL en enfermedad en humanos parece ser complejo. En humanos ha sido previamente demostrado que aOxLDL es superior en controles de salud en hombres próximos a la hipertensión, un ejemplo de enfermedad6 cardiovasacular temprana. Estudios recientes están en linea con la observación 7,8. Por otro lado, varios autores han informado que aOxLDL se elevan en enfermedades cardiovasculares en humanos (CVD), especialmente en las últimas etapas2,3,9,10 . Un ejemplo es el lupus eritematoso sistémico (SLE) y la enfermedad autoinmune asociada con un alto riesgo de CVD. Pacientes-SLE con un historial de CVD tuvieron elevados níveles aOxLDL 11. Estos resultados hasta cierto punto contradictorios pueden depender de métodos diferentes y etapas de LDL-oxidación, dando diferencias en la antigenicidad. Es también probable que la etapa de la enfermedad y el perfil de factor riesgo estén relacionados con los niveles anticuerpo. [0007] La lipoproteína de baja densidad oxidada (oxLDL) tiene ella misma porpiedades porinflamatorias inclutendo la activación de las células T12,13, monocitos/macrófagos y células endoteliales14-16. OxLDL promueve también la inflamación en las células competentes inmunes de las lesiones ateroscleroticas17. Sin embargo, debería remarcarse que oxLDL puede disminuir las reacciones inflamatorias agudas y por ejemplo, promover una inflamaciones crónica de grado más bajo como se ve en las aterosclerosis18 . Es interesante resaltar que muchos efectos biológicos de oxLDL son causados por factores de activación en placa (PAF)- similar a lípidos en oxLDL19-21 . [0008] Fosforilcolina (PC) es un componente principal no sólo en los fosfolípidos inflamatorios similares al factor de activación en placa-PAF (donde es fundamentel para la interacción con el PAF-receptor) y en oxLDL, pero también como componentes inmunogénicos de muchas bacterias incluyendo S. Pneumoniae22. Además, PC se expresa por células2 ,23 apoptóticas. [0009] En US5455032, los conjugados de fosfocolina han sido utilizados en vacunas para inducir inmunoportección contra infecciones de muchas bacterias como Streptococcus pneumoniae. En un reciente estudio 24 por Binder et al en vacuna de pneumococcus en ratones, se muestra que la vacuna disminuyó la formación de lesión aterosclerótica. Se ha encontrado que muchos anticuerpos de oxLDL derivados de los ratones ateroscleroticos comparten la identidad estructural con anticuerpos que protegen contra patógeneos infecciosos comunes, incluyendo Streptococcus pneumoniae. El estudio, en ratones, no en humanos, no da una información específica sobre la especificidad, o que anticuerpos antifosforilcolina IgM son significantemente más importantes que los correspondientes anticuerpos IgG como un factor de protección en aterosclerosis. Además, los conjugados e fosforilcolina no han sido utilizados en la vacuna pneumococcus. [0010] En otro estudio fue mostrado25 que los niveles de de anticuerpo antifosforilcolina son elevados en humanos con enfermedades periodontales. La conclusión es que la fosforilcolina es un importante antígeno oral asociado con organismos en la flora periodontal y que el anticuerpo anti-PC es elevado como consecuencia de la enfermedad periodontal. Ninguna información es dada en referencia a los anticuerpos y la protección posible de o progresión de la aterosclerosis. [0011] Un par de documentos (p.e. WO2002080954 y WO0168119) relacionados con el tratamiento de inmunización de aterosclerosis han sido publicados pero están o bien basados en el uso de fragmentos de péptidos de apoliproteína B o anticuerpos para cadenas de un receptor de células T. Un método para detectar la placa ateros aclerostica (WO9908109) utilizando anticuerpos monoclonales para la oxidación de epítopos específicos en lipoproteína han sido descritos. Esto es diferente del método propuesto en esta invención donde un conjugado de fodforilcolina es usado para detectar anticuerpos, p.e, anticuerpos IgM or IgG, en muestras sujeto. [0012] Kearney (2000) J Clin Invest 105(12), 1683-1685 describe un aumento en anticuerpos antifosforilcolina debido a laaterosclerosis. [0013] Chyu Kuang-Yuh et al (2004) J Am Coll Cardiol 43(5) Suppl A, 499A resumen nº abstract no 1122173 describe un aumento en anticuerpos antifosforilcolina IgM y IgG debido a la aterosclerosis. [0014] WO 93/18161 describe la detección de células expresando anticuerpos antifosforilcolina por reacción con un conjugado de PC-albumina. [0015] US 5,475,100 trata de anticuerpos artificiales los cuáles tienen una región constante de cadena pesada dentro de la cuál ha sido introducido una secuencia amino acida RGDS. [0016] Shaw et al (2000) J Clin Invest 105(12), 1731-1740 describe el papel de los anticuerpos anti-PC en aterogenesis. RESUMEN DE LA INVENCIÓN [0017] El invento trata de diagnosticar la presencia o ausencia de anticuerpos, por ejemplo anticuerpos IgM

o IgG, relacionado con aumentar o disminuir el riesgo de desarrollo de enfermedades cardiovasculares, tal como enfermedades cardiovasculares isquémicas, o aterosclerosis. [0018] Un primer aspecto de la invención proporciona un método para evaluar un riesgo de un paciente humano de desarrollar o de progresión de enfermedad cardiovascular, en donde el método comprende -

(a) evaluar los niveles de anticuerpos del paciente reactivos con un conjugado de fosforilcolina en una muestra ex vivo tomada de un paciente,

(b) determinar el riesgo del paciente de desarrollo o progresión de enfermedad cardiovascular basado en los niveles evaluados de anticuerpos reactivos con un conjugado de fosforilcolina ; en donde el nivel de anticuerpos reactivos se correlaciona negativamente con el riesgo de desarrollo o progresión de enfermedad caridiovascular en un paciente humano sano. [0019] El primer aspecto de la invenciona... [Seguir leyendo]