Un método in vitro para expandir selectivamente una población de células T CD8 + de memoria,

que comprende: poner en contacto una población de células en la que al menos una parte de las mismas comprende células T CD8 + con un gránulo, en que dicho gránulo tiene unido al mismo un primer agente que se liga al complejo de células T de receptor de antígeno de células T (TCR)/CD3 y el mismo gránulo tiene unido al mismo un segundo agente que se liga a la molécula accesoria de CD28 de células T, en que el primer agente es un anticuerpo anti-CD3 o un fragmento de unión a antígeno del mismo y el segundo agente es un anticuerpo anti-CD28 o un fragmento de unión a antí- geno del mismo, y expandir así selectivamente una población de células T CD8 + de memoria, caracterizado porque dicha relación de gránu- los:células es de 1:1 a 1:10

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Campo de la invención

La presente invención se refiere en general a métodos para expandir selectivamente células T CD8+ de memoria has-5 ta densidades muy elevadas y a expandir células hasta núme-ros muy elevados y a suprimir selectivamente células CD8+ de memoria. La presente invención se refiere también a com-posiciones de células, que incluyen las células T activadas y expandidas a concentraciones elevadas y expandidas hasta 10 números elevados.

Descripción de la técnica relacionada

El receptor de antígenos de células T (TCR) es un re-ceptor de reconocimiento inmune de múltiples subunidades que se asocia con el complejo CD3 y se una a péptidos pre-15 sentados por las proteínas de clase I y II del complejo de histocompatibilidad principal (MHC) en la superficie de las células que presentan antígenos (APC). La unión de TCR al péptido antígeno en las APC es el acontecimiento central en la activación de células T, que se produce en una sinapsa 20 inmunológica en el punto de contacto entre la célula T y la APC.

Para mantener la activación de células T, los linfoci-tos T requieren normalmente una segunda señal co-estimuladora. La co-estimulación es necesaria normalmente 25 para que una célula helper T produzca suficientes niveles de citoquinas para inducir la expansión clonal. Bretscher, Immunol. Today 13:74, 1992; June et al., Immunol. Today 15:321, 1994. La señal co-estimuladora principal se produce cuando un miembro de los ligandos de la familia B7 (CD80 30 (B7.1) 0 CD86 (B7.2)) en una célula activada que presenta antígenos (APC) se une a CD28 en una célula T.

Los métodos para estimular la expansión de ciertos subconjuntos de células T tienen la capacidad potencial de generar una diversidad de composiciones de células T útiles 35

en inmunoterapia. Una inmunoterapia satisfactoria puede es-tar ayudada mediante el aumento de la reactividad y canti-dad de células T mediante una estimulación eficaz.

Las diversas técnicas disponibles para expandir células T humanas se han basado principalmente en el uso de 5 células accesorias y/o factores de crecimiento exógenos, como interleucina-2 (IL-2). La IL-2 ha sido usada conjunta-mente con un anticuerpo anti-CD3 para estimular la prolife-ración de células T, expandiendo predominantemente la sub-población CD8+ de célula T. Ambas señales de APC se cree 10 que son necesarias para una activación, expansión y super-vivencia a largo plazo óptimas de células T de las células T tras la re-infusión. El requisito de APC coincidentes con MCH como células accesorias presenta un problema significa-tivo para sistemas de cultivo a largo plazo porque las APC 15 tienen una vida relativamente corta. Por lo tanto, en un sistema de cultivo a largo plazo, las APC deben ser conti-nuamente obtenidas a partir de una fuente y repuestas. La necesidad de un suministro renovable de células accesorias es problemática para el tratamiento de inmunodeficiencias 20 en las que estén afectadas células accesorias. Además, cuando se trata una infección viral, si las células acceso-rias portan el virus, las células pueden contaminar la po-blación completa de células T durante un cultivo a largo plazo. 25

En ausencia de factores de crecimientos exógenos o células accesorias, una señal co-estimuladora puede ser su-ministrada a una población de células T, por ejemplo, expo-niendo las células T a un ligando CD3 y un ligando CD28 unidos a una superficie de fase solida, como un gránulo. 30 Véase C. June et al. (patente de EE.UU Nº 5,858,358); C. June et al. documento WO 99/953823.Aunque estos métodos son capaces de conseguir poblaciones de células T terapéutica-mente útiles, la consistencia aumentada y la facilidad de preparación de células T continúa siendo menor que lo ide-35

al.

Además, los métodos actualmente disponibles en la técnica no se han enfocado sobre la expansión a corto pla-zo de células T o la obtención de una población más consis-tente de células T y de sus resultados ventajosos. Además 5 de ello, La aplicabilidad de las células T expandidas ha estado limitada solamente a unos pocos estados de enferme-dad. Para una máxima eficacia in vivo, teóricamente, una población de células T activadas y generadas ex vivo o in vivo deben estar en un estado que pueda compaginar de forma 10 máxima una respuesta inmune a un cáncer, enfermedad infec-ciosa u otros estados de enfermedad.

La presente invención es un método in vitro para ex-pandir selectivamente una población de células T CD8+ de memoria, que comprende: 15

poner en contacto una población de células T en la que al menos una parte de las mismas comprende células T CD8+ con un gránulo, en que dicho gránulo tiene unido al mismo un primer agente que liga el receptor de antígeno de células T (TCR)/complejo CDR de células T, y el mismo gránulo 20 tiene unido al mismo un segundo agente que liga la molécula accesoria CD28 de células T, en que el primer agente es un anticuerpo anti-CD3 o un fragmento de unión a antígeno del mismo y el segundo agente es un anticuerpo anti-CD28 o un fragmento de unión a antígeno del mismo, y expandir así se-25 lectivamente una población de células T CD8+ de memoria,

caracterizado porque dicha relación de gránulo:célula es de 1:1 a 1:10.

En una realización, la relación de gránulos:células es de 1:5 a 1:10. 30

En una realización adicional, la relación de anticuer-po anti-CD3:anticuerpo anti- CD8 es de 1:1 a 1:100.

La presente invención proporciona también una composición que comprende una población de células de CD8+ de me-moria activadas producida según el método in vitro para ex-35

pandir selectivamente una población de células T CD8+ de memoria definidas en la presente memoria descriptiva.

La presente invención proporciona también una composición farmacéutica que comprende una población de células T CD8+ de memoria según el método in vitro para expandir se-5 lectivamente una población de células T CD8+ de memoria de-finidas en la presente memoria descriptiva, junto con un vehículo, diluyente o tampón farmacéuticamente aceptable.

La presente invención proporciona también el uso de una población de células T CD8+ de memoria producida según 10 el método in vitro para expandir selectivamente una pobla-ción de células T CD8+ de memoria definidas en la presente memoria descriptiva, en la elaboración de un medicamento para el tratamiento del cáncer.

La presente invención se refiere también al uso de una 15 población de células T CD8+ de memoria producida según el método in vitro para expandir selectivamente una población de células T CD8+ de memoria definida en la presente memo-ria descriptiva en el tratamiento del cáncer.

El cáncer puede ser un melanoma, un linfoma que no es 20 de Hodgkin, linfoma de células T cutáneas, enfermedad de Hodgkin, leucemia, plasmacitoma, sarcoma, glioma, timoma, cáncer de mamas, cáncer de próstata, cáncer colo-rectal, cáncer de riñón, carcinoma de células renales, cáncer ute-rino, cáncer pancreático, cáncer esofágico, cáncer cere-25 bral, cáncer de pulmón, cáncer de ovarios, cáncer de cuello uterino, cáncer testicular, cáncer gástrico, cáncer esofá-gico, mieloma múltiple, hepatoma, leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mielogenosa aguda (AML), leucemia mielogenosa crónica (CML), o leucemia linfocítica crónica 30 (CLL). En una realización, el cáncer es un mieloma múltiple o CLL.

La presente invención se refiere adicionalmente a un método in vitro para suprimir selectivamente una población de células T CD8+ de memoria, que comprende: 35

poner en contacto una población de células con un gránulo, en que al menos una parte de dichas células com-prende células T CD8, en que dicho gránulo tiene unido al mismo un primer agente que se liga al receptor de antígeno de células T (TCR)/complejo CD3 de células T y el mismo 5 gránulo tiene unido al mismo un segundo agente que se liga a moléculas accesorias CD28 de células T, en que el primer agente es un anticuerpo anti-CD3 o un fragmento de unión a antígeno del mismo y el segundo agente es un anticuerpo an-ti-CD28 o un fragmento de unión a antígeno del mismo, su-10 primiendo así selectivamente una población de células T CD8+ de memoria,

caracterizado porque dicha relación de gránulo:célula...

1. Un método in vitro para expandir selectivamente una población de células T CD8+ de memoria, que comprende:

poner en contacto una población de células en la que al menos una parte de las mismas comprende células T CD8+ 5 con un gránulo, en que dicho gránulo tiene unido al mismo un primer agente que se liga al complejo de células T de receptor de antígeno de células T (TCR)/CD3 y el mismo gránulo tiene unido al mismo un segundo agente que se liga a la molécula accesoria de CD28 de células T, 10

en que el primer agente es un anticuerpo anti-CD3 o un fragmento de unión a antígeno del mismo y el segundo agente es un anticuerpo anti-CD28 o un fragmento de unión a antí-geno del mismo, y expandir así selectivamente una población de células T CD8+ de memoria, 15

caracterizado porque dicha relación de gránu-los:células es de 1:1 a 1:10.

2. El método de la reivindicación 1, en el que dicha relación de gránulos:células es de 1:5 a 1:10.

3. El método de la reivindicación 1, en el que la re-20 lación de anticuerpos anti-CD3:anticuerpos anti-CD28 es de 1:1 a 1:100.

4. Una composición, que comprende una población de células T de CD8+ de memoria activadas producidas según el método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3. 25

5. Una composición farmacéutica, que comprende una po-blación de células T CD8+ de memoria producida según el método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 junto con un vehículo, diluyente o tampón farmacéuticamente acep-table. 30

6. El uso de una población de células T CD8+ de memo-ria producida según el método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de cáncer.

7. Población de células T CD8+ de memoria producida 35

según el método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, para ser usada en el tratamiento de cáncer.

8. Los usos según la reivindicación 6 o la población según la reivindicación 7, en que dicho cáncer es un mela-noma, linfoma que no es de Hodgkin, linfoma de células T 5 cutáneas, enfermedad de Hodgkin, leucemia, plasmacitoma, sarcoma, glioma, timoma, cáncer de mamas, cáncer de prósta-ta, cáncer colorrectal, cáncer de riñón, carcinoma de células renales, cáncer uterino, cáncer pancreático, cáncer esofágico, cáncer de cerebro, cáncer de pulmón, cáncer de 10 ovarios, cáncer de cuello uterino, cáncer testicular, cáncer gástrico, cáncer esofágico, mieloma múltiple, hepa-toma, leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloge-nosa aguda (AML), leucemia mielogenosa crónica (CML) o leu-cemia linfocítica crónica (CLL). 15

9. Los usos según la reivindicación 6 o la población según la reivindicación 7, en los que dicho cáncer es mie-loma múltiple o CLL.

10. Un método in vitro para suprimir selectivamente una población de células T CD8+ de memoria, que comprende: 20

poner en contacto una población de células en la que al menos una parte de las mismas comprende células T CD8+ con un gránulo, en que dicho gránulo tiene unido al mismo un primer agente que se liga al complejo de células T de receptor de antígeno de células T (TCR)/CD3 y el mismo 25 gránulo tiene unido al mismo un segundo agente que se liga a la molécula accesoria CD28 de células T,

en que el primer agente es un anticuerpo anti-CD3 o un fragmento de unión a antígeno del mismo y el segundo agente es un anticuerpo anti-CD28 o un fragmento de unión a antí-30 geno del mismo, y suprimir así selectivamente una población de células T CD8+ de memoria,

caracterizado porque dicha relación de gránu-los:células es de de 3:1 a 10:1.

11. El método de la reivindicación 10, en el que dicha 35

relación de gránulos:células es de 5:1 a 10:1.

12. El método de la reivindicación 10, en el que la relación de anticuerpos anti-CD3:anticuerpos anti-CD28 es de 1:1 a 1:100.

13. Una composición que comprende una población de 5 células T CD8+ activadas, con agotamiento de células de me-moria, producida según el método de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12.

14. Una composición farmacéutica que comprende una po-blación de células T CD8+, con agotamiento de células de 10 memoria, producida según el método de una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, junto con un diluyente, tampón o medio farmacéuticamente aceptable.