Captura, detección y cuantificación de ARN pequeño.
Un método para detectar un ARN pequeño maduro, comprendiendo el método:
proporcionar una muestra que comprende una molécula de ARN pequeño que comprende aproximadamente 20-30 nucleótidos que se ha procesado a partir de un precursor de ARN más grande (ARN pequeño maduro);
poliadenilar el extremo 3' del ARN pequeño maduro;
realizar la transcripción inversa del ARN pequeño maduro poliadenilado usando un cebador de transcripción inversa universal, de modo que se forma así un ADNc del ARN pequeño maduro, en donde el cebador de transcripción inversa universal comprende una parte de poli(T) y una parte de cola, en donde la parte de cola comprende una parte de cebador universal;
ligar un adaptador de ligadura universal al extremo 3' del ADNc en presencia de una férula de ligadura, en donde la férula de ligadura comprende una región terminal 3' que contiene de aproximadamente 3 nucleótidos a aproximadamente 6 nucleótidos que se hibridan con el extremo 3' del ADNc del ARN pequeño maduro y una región terminal 5' que se hibrida con el extremo 5' del adaptador de ligadura, de modo que se forma un producto de ligadura de ADNc;
amplificar el producto de ligadura de ADNc usando un par de cebadores directo e inverso universales para formar un producto de amplificación; y
detectar el producto de amplificación.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2013/068350.
Solicitante: LIFE TECHNOLOGIES CORPORATION.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 5823 Newton Drive Carlsbad, CA 92008 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: WONG,LINDA, CHEN,CAIFU, WU,YALEI, DONG,SHOULIAN, LIU,CHUNMEI.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12P19/34 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Polinucleótidos, p. ej. ácidos nucleicos, oligorribonucleótidos.
- C12Q1/6832 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › Optimización de la reacción de hibridación.
- C12Q1/6851 C12Q 1/00 […] › Amplificación cuantitativa.
- C12Q1/6853 C12Q 1/00 […] › usando cebadores o moldes modificados.
- C12Q1/6855 C12Q 1/00 […] › Adaptadores de ligadura.
- C12Q1/6858 C12Q 1/00 […] › Amplificación específica de alelo.
PDF original: ES-2749463_T3.pdf
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