TRATAMIENTO CON TOXINA BOTULINA DE LA VEJIGA ESPASTICA.

La utilización de una formulación sólida, semi-sólida o líquida de toxina botulina para la preparación de un medicamento destinado a tratar un trastorno que se caracteriza por espasmos en la vejiga,

en la que dicho medicamento se suministra sin emplear una inyección en el interior de la pared vesical y se encuentra en forma de formulación sólida, semi-sólida o líquida de toxina botulina extendida sobre la pared externa de un globo que se infla en el interior de la vejiga

Tratamiento con toxina botulina de la vejiga espástica.

El presente invento se refiere a la utilización de toxina botulina para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento tópico de trastornos urinarios y particularmente el de vejiga espástica.

La bacteria anaerobia gram positivo Clostridium botulinum produce una potente neurotoxina de polipéptido, la toxina botulina, que provoca una enfermedad neuroparalítica en humanos y animales denominada botulismo. Las esporas de Clostridium botulinum se encuentran en el suelo y pueden desarrollarse en latas herméticas de comida impropiamente esterilizadas, constituyendo la causa de muchos casos de botulismo. Típicamente, los efectos del botulismo aparecen de 18 a 36 horas después de ingerir el alimento infectado con el cultivo o las esporas de Clostridium botulinum. Según parece, la toxina botulina puede atravesar la pared interior del intestino permaneciendo inalterada y atacar a las neuronas motoras periféricas. Los síntomas de la intoxicación por toxina botulina pueden incluir desde dificultad para andar, tragar y hablar hasta parálisis de los músculos respiratorios y muerte.

La toxina botulina de tipo A es el agente biológico natural más letal conocido en humanos. Alrededor de 50 picogramos de toxina botulina de tipo A disponible comercialmente (complejo de neurotoxina purificado) corresponden a la LD₅₀ en ratones.

Se han caracterizado siete neurotoxinas botulina distintas desde el punto de vista inmunológico, siendo los serotipos de neurotoxina botulina A, B, C₁, D, E, F y G respectivamente, cada uno de los cuales se distingue por neutralización con anti-cuerpos específicos de tipo. Los diferentes serotipos de toxina botulina se diferencian por la especie animal a la que pueden afectar así como por la gravedad y duración de la parálisis que provocan. Por ejemplo, se ha determinado que la toxina botulina de tipo A es 500 veces más potente, medido según el LD₅₀ en ratones, que la toxina botulina de tipo B. De manera adicional, se ha determinado que la toxina botulina de tipo B no resulta tóxica en primates a una dosis de 480 U/kg, que es aproximadamente 12 veces el valor de LD₅₀ en primates para la toxina botulina de tipo A. Según parece, la toxina botulina forma enlace con elevada afinidad con las neuronas motoras colinérgicas, experimenta traslocación en el interior de la neurona y bloquea la eliminación de acetilcolina.

Aunque según parece todos los serotipos de toxina botulina inhiben la liberación del neurotransmisor de acetilcolina en la zona de unión neuromuscular, esto tiene lugar mediante afección a distintas proteínas neurosecretoras y/o mediante adhesión de dichas proteínas en diferentes puntos. Por ejemplo, las botulinas de tipo A y E se adhieren a la proteína asociada sinaptosómica de 25 kilodalton (kD), pero tienen como objetivo distintas secuencias de aminoácido dentro de esta proteína. Las toxinas de botulina de tipo B, D, F y G actúan sobre la proteína asociada a vesículas (V, AMP, también denominada sinaptobrevina), adhiriéndose cada serotipo en un lugar diferente de la proteína. Finalmente, se ha comprobado que la toxina de botulina de tipo C se adhiere tanto a sintaxina como a SNAP-25. Estas diferencias relacionadas con el mecanismo de acción pueden afectar a la potencia relativa y/o duración de la acción de los distintos serotipos de toxina de botulina.

El peso molecular de la molécula de proteína de toxina botulina, para los siete serotipos conocidos de toxina botulina, es de alrededor de 150 kD. De manera interesante, las toxinas botulinas son liberadas por la bacteria Clostridial en forma de complejos formados por la molécula de proteína de toxina botulina de 150 kD a lo largo de las proteínas asociadas no tóxicas. De este modo, la bacteria Clostridial puede producir el complejo de la toxina botulina de tipo A con formas de 900 kD, 500 kD y 300 kD. Según parece, las toxinas botulina de tipo B y C₁ únicamente son producidas en forma de complejo de 500 kD. La toxina de botulina de tipo D es producida en forma de complejos tanto de 300 kD como de 500 kD. Finalmente, las toxinas de botulina de tipos E y F son producidas únicamente en forma de complejos de aproximadamente 300 kD. Se cree que los complejos (es decir los que tienen un peso molecular mayor que alrededor de 150 kD) contienen una proteína de hematoglutinina que no contiene toxina y una proteína que no contiene hematoglutinina y que no contiene toxina. Estas proteínas que no contienen toxina (que junto con la molécula de toxina botulina forman el complejo apropiado de neurotoxina) pueden actuar para proporcionar a la molécula de toxina botulina estabilidad frente a la desnaturalización y protección frente a los ácidos del estómago cuando la toxina es ingerida. De manera adicional, es posible que los complejos de toxina botulina de mayor tamaño (peso molecular mayor que alrededor de 150 kD) puedan dar lugar a una menor velocidad de difusión de toxina botulina fuera del lugar de inyección intramuscular del complejo de toxina botulina.

La toxina botulina de tipo A se puede obtener creando y desarrollando cultivos de Clostridium botulinum en un fermentador y posteriormente recogiendo y purificando la mezcla fermentada de acuerdo con procedimientos conocidos. Inicialmente todos los serotipos de toxina botulina se sintetizan como proteínas inactivas de cadena sencilla, que deben ser sometidas a adhesión o fijadas por proteasas para llegar a ser neuroactivas. Las cepas bacterianas que producen los serotipos A y G de toxina botulina contienen proteasas endógenas y, por tanto, los serotipos A y G se pueden recubrir de cultivos bacterianos en sus formas predominantemente activas. Por el contrario, los serotipos C₁, D y E de toxina botulina son sintetizados por cepas no proteolíticas y, por tanto, son típicamente inactivas cuando se recubren a partir de un cultivo. Los serotipos B y F son producidos por cepas tanto proteolíticas como no proteolíticas y, por tanto, se pueden recubrir tanto en forma activa como inactiva. No obstante, incluso las cepas proteolíticas que producen, por ejemplo, el serotipo B de toxina botulina, únicamente se adhieren a una parte de la toxina producida. La proporción exacta de moléculas fijadas o sin fijar depende de la duración de la incubación y de la temperatura del cultivo. Por tanto, es probable que un determinado porcentaje de cualquier preparación de, por ejemplo, toxina botulina de tipo B, sea inactivo, posiblemente debido a la consabida potencia considerablemente menor de la toxina botulina de tipo B en comparación con la toxina botulina de tipo A. La presencia de moléculas inactivas de toxina botulina en la preparación clínica contribuye a la carga proteica total de la preparación, que se ha relacionado con una mayor antigenicidad, sin que esto contribuya a su eficacia clínica. De manera adicional, se sabe que la toxina botulina de tipo E presenta, tras inyección intramuscular, una actividad de menor duración y también resulta menos potente que la toxina botulina de tipo A, al mismo nivel de dosificación. Se puede producir toxina botulina de tipo A cristalina de alta calidad a partir de la cepa Hall A de Clostridium botulinum con características de 3•10⁷ U/mg, un valor de A₂₆₀/A₂₇₈ menor que 0,60 y un patrón de bandas diferente de electroforesis de gel. Se puede emplear el proceso Schantz conocido para obtener toxina botulina de tipo A cristalina, tal y como se explica en Schantz, E. J. y col., Properties and use of Botulinum toxin and Other Microbial Neurotoxins en Medicine, Microbiol Rev. (1992), 56, 80-99. De manera general, se puede aislar y purificar el complejo de toxina botulina de tipo A a partir de una fermentación anaerobia, creando un cultivo de Clostridium botulinum de tipo A en un medio apropiado. Una vez separadas las proteínas que no contienen toxina, también se puede emplear el proceso conocido con el fin de obtener toxinas botulinas puras, tal como por ejemplo: toxina botulina purificada de tipo A con un peso molecular de aproximadamente 150 kD con una potencia específica de 1-2•10⁸ LD₅₀ U/mg o mayor, toxina botulina purificada de tipo B con un peso molecular aproximado de 156 kD con una potencia específica de 1-2•10⁸ LD₅₀ U/mg o mayor y toxina botulina purificada de tipo F con un peso molecular aproximado de 155 kD y una potencia específica de 1-2•10⁷ LD₅₀ U/mg o mayor.

Se pueden obtener toxinas botulinas preparadas y purificadas y complejos de toxina a partir de List Biological Laboratories, Inc....

1. La utilización de una formulación sólida, semi-sólida o líquida de toxina botulina para la preparación de un medicamento destinado a tratar un trastorno que se caracteriza por espasmos en la vejiga, en la que dicho medicamento se suministra sin emplear una inyección en el interior de la pared vesical y se encuentra en forma de formulación sólida, semi-sólida o líquida de toxina botulina extendida sobre la pared externa de un globo que se infla en el interior de la vejiga.

2. La utilización de la reivindicación 1, en la que el trastorno que se caracteriza por espasmos en la vejiga se escoge en el grupo formado por incontinencia urinaria debido a vejiga inestable o esfínter detrusor inestable, complicaciones de vaciaje debidas a hiperactividad detrusora o a esfínter detrusor inestable, retención urinaria posterior a esfínter espástico o cuello vesical hiperatrofiado y disfunción vesical neurogénica posterior a enfermedad de Parkinson, lesión de la médula espinal, apoplejía o esclerosis múltiple o que se caracteriza por un reflejo espasmódico.

3. La utilización de la reivindicación 1, en la que la formulación líquida o semi-sólida tiene un volumen de 20 a 80 ml.

4. La utilización de la reivindicación 1, en la que el medicamento preparado se encuentra en forma de formulación de gel.

5. La utilización de la reivindicación 1, en la que el medicamento preparado se encuentra en forma de formulación de pulverización.

6. La utilización de la reivindicación 1, en la que el medicamento preparado se encuentra en forma de formulación sólida, semi-sólida o líquida de toxina botulina que se extiende sobre la pared externa de un globo de forma que entre en contacto con la pared vesical.