Un complejo receptor heterodímero o multímero aislado capaz de señalización intracelular,

en el que dicho complejo receptor comprende:

(i) una primera subunidad de receptor que comprende el dominio extracelular del receptor zalfa11, como se muestra en los residuos 20 (Cys) a 237 (His) de la SEQ ID NO: 2 y un dominio intracelular de un receptor de citoquinas de clase I; y

(ii) una segunda subunidad de receptor que comprende el dominio extracelular del receptor IL-2R?, como se muestra en SEQ ID NO: 4, y un dominio intracelular de un receptor de citoquinas de clase I

Receptores de citoquina zalfa11 solubles.

Antecedentes de la invención

Las hormonas y factores de crecimiento de polipéptidos controlan la proliferación y diferenciación de células de organismos multicelulares. Estas moléculas difundibles permiten a las células comunicarse entre sí y actúan de común acuerdo para formar células y órganos, y para reparar tejido dañado. Los ejemplos de hormonas y factores de crecimiento incluyen las hormonas esteroides (por ejemplo, estrógeno, testosterona), hormona paratiroidea, hormona estimulante de folículos, las interleuquinas, factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF), eritropoyetina (EPO) y calcitonina.

Las hormonas y factores de crecimiento influyen en el metabolismo celular uniéndose a receptores. Los receptores pueden ser proteínas de membrana integrales que se enlazan a trayectorias de señalización dentro de la célula, tales como sistemas de segundo mensajero. Otras clases de receptores son moléculas solubles, tales como los factores de transcripción. Son de particular interés receptores de citoquinas, moléculas que promueven la proliferación y/o diferenciación de células. Los ejemplos de citoquinas incluyen eritropoyetina (EPO), que estimula el desarrollo de hematíes; trombopoyetina (TPO), que estimula el desarrollo de células del linaje de megacariocitos; y factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), que estimula el desarrollo de neutrófilos. Estas citoquinas son útiles para restaurar niveles de hematíes normales en pacientes que padecen anemia, trombocitopenia y neutropenia o que reciben quimioterapia para el cáncer.

Las actividades in vitro demostradas de estas citoquinas ilustran el enorme potencial clínico de, y la necesidad de, otras citoquinas, agonistas de citoquinas y antagonistas de citoquinas o compañeros de unión. La presente invención se dirige a estas necesidades proporcionando un nuevo antagonista de vitoquinas o compañero de unión, un receptor de citoquinas hematopoyético soluble, así como métodos y composiciones relacionados.

El documento WO 00/17235 describe el receptor de citoquina zalfa11, y anticuerpos para ello.

El documento WO 00/08152 describe receptores de citoquinas huérfanos, y sus usos, y los correspondientes ácidos nucleicos.

El documento WO 99/47675 describe MU-1, un miembro de la familia de los receptores de citoquinas.

He Y-W. et al., Critical Reviews in Immunology, Vol. 18, No.6, (1998) páginas 503-524, describe la estructura y la función de receptores y citoquinas dependientes de gammac.

Parrish-Novak J. et al, Nature, Vol. 408, No 6808, 2 de Noviembre de 2000, páginas 57-63, describe IL-21 y su receptor y su papel en la expansión de células NK y la regulación de la función de los linfocitos.

El documento WO 00/69880 describe moléculas de tipo receptor IL-9/IL-2 y sus usos.

La presente invención proporciona un complejo receptor heterodímero o multímero según se define en las reivindicaciones.

La presente memoria descriptiva describe un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido de receptor soluble que comprende una secuencia de residuos de aminoácidos que es al menos 90% idéntica a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 6, y en el que el polipéptido de receptor soluble codificado por la secuencia de polinucleótido se une a un ligando que comprende un polipéptido de SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 47, o antagoniza la actividad del ligando. En una realización, el polinucleótido aislado es como se ha descrito antes, en el que el polipéptido de receptor soluble codificado por el polinucleótido forma un complejo receptor homodímero.

La presente memoria descriptiva describe un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido de receptor soluble que comprende una secuencia de residuos de aminoácidos que es al menos 90% idéntica a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 6, en el que el polipéptido de receptor soluble codificado por el polinucleótido forma un complejo receptor heterodímero o multímero. En una realización, el polinucleótido aislado es como se ha descrito antes, en el que el polipéptido de receptor soluble codificado por el polinucleótido forma un complejo receptor heterodímero o multímero que comprende además un receptor de citoquina de Clase I soluble.

En una realización, el polinucleótido aislado es como se ha descrito antes, en el que el polipéptido de receptor soluble codificado por el polinucleótido forma un complejo receptor heterodímero o multímero que comprende además un polipéptido de receptor IL-2R? soluble (SEQ ID NO: 4) o un polipéptido de receptor de IL-13a' soluble (SEQ ID NO: 82). En otra realización, el polinucleótido aislado es como se ha descrito antes, en el que el polipéptido comprende además un motivo WSXWS como se muestra en SEQ ID NO: 13.

La presente memoria descriptiva describe un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido de receptor soluble que comprende una secuencia de residuos de aminoácidos como se muestra en SEQ ID NO: 6, en el que el polipéptido de receptor soluble codificado por el polinucleótido forma un complejo receptor heterodímero o multímero. En una realización, el polinucleótido aislado es como se ha descrito antes, en el que el polipéptido de receptor soluble codificado por el polinucleótido forma un complejo receptor heterodímero o multímero que comprende además un polipéptido de receptor IL-2R? soluble (SEQ ID NO: 4) o un polipéptido de receptor de IL-13a' soluble (SEQ ID NO: 82). En otra realización, el polinucleótido aislado es como se ha descrito antes, en el que el polipéptido de receptor soluble es codificado por el polinucleótido mostrado en SEQ ID NO: 7. En otra realización, el polinucleótido aislado es como se ha descrito antes, en el que el polipéptido de receptor soluble comprende además una etiqueta de afinidad.

La presente memoria descriptiva describe un vector de expresión que comprende los siguientes elementos enlazados operativamente: (a) un promotor de transcripción; un primer segmento de ADN que codifica un polipéptido de receptor soluble que tiene una secuencia de aminoácidos como se muestra en SEQ ID NO: 6, y un terminador de transcripción; y (b) un segundo promotor de transcripción; un segundo segmento de ADN que codifica un polipéptido de un receptor de una citoquina de clase I soluble; y un terminador de transcripción, y donde el primer y segundo segmentos de ADN están contenidos están contenidos dentro de un vector de expresión simple o están contenidos en vectores de expresión independientes. En una realización, el vector de expresión descrito anteriormente comprende una secuencia de señal secretora enlazada operativamente a los primero y segundo segmentos de ADN. En otra realización, el vector de expresión es como se ha descrito anteriormente, donde el segundo segmento de ADN codifica un polipéptido de receptor IL-2R? soluble (SEQ ID NO: 4) o un polipéptido de receptor de IL-13a' soluble (SEQ ID NO: 82).

La presente memoria descriptiva describe una célula cultivada que comprende un vector de expresión como se ha descrito anteriormente, donde la célula expresa los polipéptidos codificados por los segmentos de ADN. En una realización, la célula cultivada que comprende un vector de expresión es como se ha descrito antes, en la que los primero y segundo segmentos de ADN están situados en vectores de expresión independientes y están co-transfectados en la célula, y la célula expresa los polipéptidos codificados por los segmentos de ADN. En otra realización, la célula cultivada que comprende un vector de expresión es como se ha descrito antes, en la que la célula expresa un polipéptido de receptor soluble heterodímero o multímero codificado por los segmentos de ADN. En otra realización, la célula cultivada que comprende un vector de expresión es como se ha descrito antes, en la que la célula segrega un complejo heterodímero o multímero de polipéptido de receptor soluble que se une a un ligando que comprende un polipéptido de SEQ ID NO: 10 o SEQ ID NO: 47, o antagoniza con la actividad del ligando.

La presente memoria descriptiva describe una construcción de ADN que codifica una proteína de fusión que comprende: un primer segmento de ADN que codifica un polipéptido que tiene una secuencia de residuos de aminoácidos como se muestra en SEQ ID NO: 6; y al menos otro segmento de ADN que codifica un polipéptido de receptor de citoquina...

1. Un complejo receptor heterodímero o multímero aislado capaz de señalización intracelular, en el que dicho complejo receptor comprende:

2. Un complejo receptor heterodímero o multímero aislado, según la reivindicación 1, en el que la primera subunidad del receptor comprende el dominio intracelular del receptor zalfa11, como se muestra en los residuos 256 (Lys) a 538 (Ser) de SEQ ID NO: 2.

3. Un complejo receptor heterodímero o multímero aislado, según la reivindicación 1, en el que la segunda subunidad del receptor comprende el dominio intracelular del receptor zalfa11, como se muestra en los residuos 256 (Lys) a 538 (Ser) de SEQ ID NO: 2.

4. Un complejo receptor heterodímero o multímero aislado, según la reivindicación 1, en el que la primera subunidad del receptor comprende un dominio intracelular de un receptor de citoquinas de clase I distinto del receptor zalfa11;

y donde la primera subunidad del receptor comprende además un dominio transmembrana; donde el dominio transmembrana es entre: (i) el receptor zalfa11 como se muestra en los residuos 238 (Leu) a 255 (Leu) de SEQ ID NO: 2; o (ii) el receptor de citoquinas de clase I distinto del receptor zalfa11.

5. Un complejo receptor heterodímero o multímero aislado, según la reivindicación 1, en el que tanto la primera subunidad del receptor como la segunda subunidad del receptor comprende un dominio transmembrana y un dominio intracelular de un receptor de citoquinas de clase I distinto del receptor zalfa11.