Un polipéptido receptor soluble aislado que comprende una secuencia de aminoácidos como la mostrada en los restos 21 a 467 de la SEC ID Nº 68

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Las citocinas son pequeñas proteínas solubles que median en diversos efectos biológicos, como la regulación del crecimiento y la diferenciación de muchos tipos celulares (véase, por ejemplo, Arai et al., Annu. Rev. Biochem. 59:783 (1990); Mosmann, Curr. Opin. Immunol. 3:311 (1991); Paul y Seder, Cell 76:241 (1994)). Las proteínas que constituyen el grupo de las citocinas son interleucinas, interferones, factores estimulantes de colonias, factores de necrosis tumoral y otras moléculas reguladoras. Por ejemplo, la interleucina-17 humana es una citocina que estimula la expresión de la interleucina-6, la molécula de adhesión intracelular 1, la interleucina-8, el factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos y la prostaglandina E2; además participa en la maduración preferente de precursores hematopoyéticos CD34+ en neutrófilos (Yao et al., J. Immunol. 155:5483 (1995); Fossiez et al., J. Exp. Med. 183:2593 (1996)).

Los receptores que se unen a las citocinas normalmente están compuestos de una o más proteínas integrales de membrana que se unen a la citocina con alta afinidad y transduce este acontecimiento de unión a la célula a través de las porciones citoplásmicas de determinadas subunidades del receptor. Los receptores de citocinas se han agrupado en varias clases en función de las semejanzas en sus dominios extracelulares de unión a ligando.

Las actividades demostradas in vivo de las citocinas y sus receptores ponen de manifiesto el potencial clínico, y la necesidad de otras citocinas, receptores de citocinas, agonistas de citocinas y antagonistas de citocinas. Por ejemplo, las actividades demostradas in vivo de la familla de citocinas proinflamatorias ponen de manifiesto el enorme potencial clínico, y la necesidad de antagonistas de moléculas proinflamatorias.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La presente invención aborda estas necesidades proporcionando antagonistas de las citocinas proinflamatorias IL-17A e IL-17F. Específicamente, las citocinas proinflamatorias IL-17A e IL-17F tienen un alto grado de similitud de secuencia, comparten muchas propiedades biológicas y ambas son producidas por células T activadas. Ambas se han considerado factores que contribuyen a la progresión de diversas enfermedades autoinmunes e inflamatorias como artritis reumatoide y asma. De hecho, los reactivos que anulan la función de IL-17A mejoran significativamente la incidencia y la gravedad de la enfermedad en diversos modelos de ratón de enfermedad humana. La IL-17A ejerce sus efectos a través de la interacción con su receptor análogo, el receptor de IL-17 (IL-17R), aunque el receptor de IL-17F aún no se ha identificado. Ahora describimos que se ha identificado la molécula relacionada con IL-17R, IL-17RC como el receptor de IL17F. No obstante, también se ha observado que este receptor se une tanto a IL-17A como IL-17F con una alta afinidad similar. Por otro lado, IL-17R se une a IL-17A con alta afinidad, aunque se une a IL-17F con muy baja afinidad. De acuerdo con esto, los inventores han demostrado que una forma soluble de IL-17R bloquea la unión de IL-17A y la señalización en las células que expresan su receptor, aunque no interfiere con la unión de IL-17F a IL-17RC ni con su función. Por el contrario, una forma soluble de IL-17RC antagoniza tanto con IL-17A como IL-17F, bien por separado o juntas, en células que expresan cualquiera de los dos receptores. Puesto que se ha propuesto la intervención de IL-17A como tratamiento eficaz para varias enfermedades autoinmunes, el uso de antagonistas de la presente invención, que pueden bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad de IL17A, IL-17F o de ambas IL-17A e IL-17F, e incluye receptores IL-17RC solubles y anticuerpos neutralizantes anti-IL-17RC, tendrá ventajas sobre tratamientos dirigidos solo a una de estas dos citocinas. La invención además proporciona los usos de los mismos en enfermedades inflamatorias, así como composiciones y métodos relacionados.

A) Introducción

Las enfermedades inflamatorias y relacionadas con el sistema inmunitario son la manifestación o consecuencia de rutas biológicas interconectadas bastante complejas, con frecuencia múltiples, que en la fisiología normal son críticas para responder a un ataque o lesión, iniciar la reparación a partir de una agresión o lesión y organizar una defensa innata y adquirida frente a organismos extraños. La enfermedad o patología se produce cuando estas rutas fisiológicas normales causan una agresión o lesión adicional relacionada directamente con la intensidad de la respuesta, como consecuencia de una regulación anómala o una excesiva estimulación, como una reacción a lo propio, o como una combinación de estos.

Aunque la génesis de estas enfermedades a menudo supone rutas de varias etapas y con frecuencia múltiples sistemas/rutas biológicas diferentes, la intervención en puntos críticos en una o más de estas rutas puede tener un efecto terapéutico o de mejora. La intervención terapéutica puede producirse mediante antagonismo de un proceso/ruta perjudicial o mediante la estimulación de un proceso/ruta beneficiosa.

Se conocen muchas enfermedades relacionadas con el sistema inmunitario que han sido ampliamente estudiadas. Entre dichas enfermedades se incluyen enfermedades inflamatorias mediadas por el sistema inmunitario (como artritis reumatoide, enfermedad renal mediada por el sistema inmunitario, enfermedades hepatobiliares, enfermedad inflamatoria intestinal (EII), psoriasis y asma), enfermedades inflamatorias no mediadas por el sistema inmunitario, enfermedades infecciosas, inmunodeficiencias, neoplasias, etc.

Los linfocitos T (células T) son un componente importante de la respuesta inmune de mamíferos. Las células T reconocen antígenos que están asociados con una molécula propia codificada por genes dentro del complejo principal de histocompatibilidad (MHC). El antígeno puede mostrarse junto con las moléculas de MHC en la superficie de las células presentadoras de antígeno, células infectadas por virus, células cancerosas, injertos, etc. El sistema de células T elimina estas células alteradas que suponen una amenaza para la salud del mamífero hospedador. Entre las células T se incluyen células T colaboradoras y células T citotóxicas. Las células T colaboradoras proliferan ampliamente tras el reconocimiento de un complejo antígeno-MHC en una célula presentadora de antígeno. Las células T colaboradoras también secretan diversas citocinas, es decir, linfocinas, que tienen una función central en la activación de células B, de células T citotóxicas y de otras células que participan en la respuesta inmune.

Un suceso central tanto en respuestas inmunes humorales como celulares es la activación y expansión clonal de células T colaboradoras. La activación de células T colaboradoras se inicia mediante la interacción del complejo receptor de célula T (TCR)–CD3 con un complejo antígeno–MHC en la superficie de una célula presentadora de antígeno. Esta interacción media una cascada de acontecimientos bioquímicos que inducen a las células T colaboradoras a entrar en el ciclo celular (la transición de G0 a G1) que tiene como resultado la expresión de un receptor de alta afinidad para la IL-2 y, a veces, para la IL-4. La célula T activada progresa en el ciclo proliferando y diferenciándose en células de memoria o células efectoras.

Además de las señales mediadas por el TCR, la activación de las células T implica la estimulación simultánea adicional inducida por citocinas liberadas por la célula presentadora de antígeno o a través de interacciones con moléculas unidas a membrana en la célula presentadora de antígeno y en la célula T. Se ha demostrado que las citocinas IL-1 e IL-6 proporcionan una señal estimuladora simultánea. Además, la interacción entre la molécula B7 expresada en la superficie de la célula presentadora de antígeno y las moléculas CD28 y CTLA-4 expresadas en la superficie de la célula T causa la activación de la célula T. Las células T activadas expresan un número elevado de moléculas de adhesión celular, como ICAM-1, integrinas, VLA-4, LFA-1, CD56, etc.

La proliferación de células T en un cultivo mixto de linfocitos o en una reacción mixta de linfocitos (MLR) es un indicativo establecido de la capacidad de un compuesto para estimular el sistema inmunitario. En muchas respuestas inmunes, las células inflamatorias se infiltran en el sitio de lesión o infección. Las células que migran pueden ser neutrófilos, eosinófilos, monocitos o linfocitos,...

1. Un polipéptido receptor soluble aislado que comprende una secuencia de aminoácidos como la mostrada en los restos 21 a 467 de la SEC ID Nº 68.

2. El polipéptido receptor soluble de la reivindicación 1, en el que el receptor soluble es una proteína de fusión soluble que adicionalmente comprende una región constante de la cadena pesada de la inmunoglobulina, tal como un fragmento Fc.

3. El polipéptido receptor soluble de las reivindicaciones 1 ó 2 para uso en terapia.

4. El polipéptido receptor soluble aislado según las reivindicaciones 1 ó 2 para reducir la inflamación inducida por IL-17A y/o inducida por IL-17F en un mamífero.

5. El polipéptido receptor soluble aislado según las reivindicaciones 1 ó 2 para el tratamiento de un mamífero afectado por una enfermedad inflamatoria en la que están implicadas IL-17A y/o IL-17F.

6. Uso de un polipéptido receptor soluble aislado según las reivindicaciones 1 ó 2 en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de un mamífero afectado por una enfermedad inflamatoria en la que están implicadas IL-17A y/o IL17F.

7. El uso de la reivindicación 6, en el que la enfermedad inflamatoria es una enfermedad inflamatoria crónica.

8. En uso de la reivindicación 7, en el que la enfermedad inflamatoria crónica se selecciona entre el grupo compuesto por enfermedad inflamatoria intestinal (EII), artritis, dermatitis atópica y psoriasis.

9. El uso de la reivindicación 8, en el que la enfermedad inflamatoria intestinal se seleccionan entre el grupo compuesto por colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn; o en el que la artritis se selecciona entre el grupo compuesto por artritis reumatoide y artritis psoriásica.

10. El uso de la reivindicación 6, en el que la enfermedad inflamatoria es una enfermedad inflamatoria aguda, como endotoxemia, septicemia, síndrome de choque tóxico o una enfermedad infecciosa.

5 11. El uso de la reivindicación 6, en el que la enfermedad inflamatoria es una enfermedad autoinmune.

12. El uso de la reivindicación 11, en el que la enfermedad autoinmune se selecciona entre el grupo compuesto por diabetes de tipo 1 (DMDI), esclerosis

10 múltiple (EM), lupus eritematoso sistémico (LES), miastenia gravis, artritis reumatoide y enfermedad inflamatoria intestinal (EII).

13. El uso de la reivindicación 6, en el que la enfermedad inflamatoria es una

enfermedad inflamatoria crónica de las vías respiratorias. 15

14. El uso de la reivindicación 13, en el que la enfermedad inflamatoria crónica de las vías respiratorias se selecciona entre el grupo compuesto por asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y fibrosis quística.

20 15. El uso de la reivindicación 6, en el que la enfermedad inflamatoria se selecciona entre el grupo compuesto por rechazo de trasplante y enfermedad injerto contra huésped (GVHD).