PROTEINAS FLUORESCENTES DE AEQUOREA COERULESCENS Y USO DE LAS MISMAS.
Un ácido nucleico aislado que codifica un péptido de Aequorea coerulescens,
seleccionado entre:
(a) un ácido nucleico que codifica una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la Figura 1, y
(b) un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos mostrada en la Figura 1
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IB03/00907.
Solicitante: EVROGEN IP.
Nacionalidad solicitante: Federación de Rusia.
Dirección: 16/10 MIKLUKHO-MAKLAYA STREET,MOSCOW 117997.
Inventor/es: GURSKAYA,NADEJDA,G, FRADLOV,ARKADIY,F, LUKYANOV,SERGEY,A, PUNKOVA,NATALIA.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 24 de Febrero de 2010.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K14/435A5
Clasificación PCT:
- A01K67/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA. › A01K CRÍA DE ANIMALES; AVICULTURA; APICULTURA; PISCICULTURA; PESCA; ANIMALES PARA CRIA O REPRODUCCIÓN, NO PREVISTOS EN OTRO LUGAR; NUEVAS VARIEDADES DE ANIMALES. › Cría u obtención de animales, no prevista en otro lugar; Nuevas razas de animales.
- C07K14/435 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de animales; de humanos.
- C07K16/18 C07K […] › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra materiales animales o humanos.
- C12N15/12 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Genes que codifican proteínas animales.
- C12N15/62 C12N 15/00 […] › Secuencias de ADN que codifican proteínas de fusión.
- C12N15/63 C12N 15/00 […] › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
Clasificación antigua:
- A01K67/00 A01K […] › Cría u obtención de animales, no prevista en otro lugar; Nuevas razas de animales.
- C07K14/435 C07K 14/00 […] › de animales; de humanos.
- C07K16/18 C07K 16/00 […] › contra materiales animales o humanos.
- C12N15/12 C12N 15/00 […] › Genes que codifican proteínas animales.
- C12N15/62 C12N 15/00 […] › Secuencias de ADN que codifican proteínas de fusión.
- C12N15/63 C12N 15/00 […] › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
Fragmento de la descripción:
Proteínas fluorescentes de Aequorea coerulescens y uso de las mismas.
Campo de la invención
Esta invención se refiere a proteínas fluorescentes.
Antecedentes de la invención
El etiquetado es una herramienta para el mareaje de una proteína, célula, u organismo de interés y desempeña un papel destacado en muchas aplicaciones diagnósticas bioquímicas, de biología molecular y médicas. Se han desarrollado y utilizado en la técnica varias etiquetas diferentes, incluyendo etiquetas radiactivas, cromoetiquetas, etiquetas fluorescentes, etiquetas quimioluminiscentes, y similares, con diferentes propiedades y usos óptimos. No obstante, continúa el interés por el desarrollo de nuevas etiquetas. De particular interés es el desarrollo de nuevas etiquetas de proteína, incluyendo etiquetas de proteínas fluorescentes.
Literatura relevante
Las Patentes de los Estados Unidos de interés incluyen: 6.066.476; 6.020.192; 5.985.577; 5.976.796; 5.968.750; 5.968.738; 5.958.713; 5.919. 445; 5.874.304 y 5.491.084. Las Publicaciones de Patentes Internacionales de interés incluyen: WO 00/46233; WO 99/49019; y DE 197 18 640 A. También tienen interés: Anderluh et al., Biochemical and Biophysical Research Communications (1996) 220:437-442; Dove et al., Biological Bulletin (1995) 189:288-297; Fradkov et al., FEBS Lett. (2000) 479(3):127-30; Gurskaya et al., FEBS Lett., (2001) 507(1):16-20; Gurskaya et al., BMC Biochem. (2001) 2:6; Lukyanov, K., et al. (2000) J. Biol. Chemistry 275(34):25879-25882: Macek et al., Eur. J. Biochem. (1995) 234:329-335; Martynov et al., J. Biol. Chem. (2001) 276:21012-6; Matz, M.V., et al. (1999) Nature Biotechnol., 17:969-973; Terskikh et al., Science (2000) 290:1585-8; Tsien, Annual Rev. of Biochemistry (1998) 67:509-544; Tsien, Nat. Biotech. (1999) 17:956-957; Ward et al., J. Biol. CHEM. (1979) 254:781-788; Wiedermann et al., Jarhrestagung der Deutschen Gesellschact fur Tropenokologie-gto Ulm. 17-19.02.1999. Poster P-4.20; Yarbrough et al., Proceedings of the National Academy of Sciences (2001) 98:462-7
Prasher et al., (1992), Gene, Vol 111 págs. 229-233, describen la estructura primaria de la proteína fluorescente verde de Aequorea victoria incluyendo sus secuencias de ADN y de péptidos.
Inouye y Tsuji (1999) FEBS Letters, Vol. 341 págs. 277-280, describen GFP de Aequorea victoria, y caracterizan las características de fluorescencia de las proteínas recombinantes.
Compendio de la invención
La presente invención proporciona composiciones de ácido nucleico que codifican una proteína incolora única de Aequorea coerulescens y sus mutantes fluorescentes, así como las proteínas y péptidos codificados por los ácidos nucleicos. Las proteínas de la presente invención son proteínas que están coloreadas y/o son fluorescentes y/o pueden ser fotoactivadas, donde esta característica óptica surge de la interacción de dos o más residuos aminoácido de la proteína. También tienen interés las proteínas que son proteínas que tienen al menos 95% de identidad con las proteínas específicas referidas anteriormente incluyendo las proteínas de fusión que incorporan péptidos de la presente invención, así como los anticuerpos para estas proteínas. La proteína sujeto y las composiciones de ácidos nucleicos encuentran uso en una variedad de aplicaciones diferentes.
Descripción de las figuras
La figura 1 es la secuencia de aminoácidos y la secuencia de ácido nucleico que codifica la proteína GFP de tipo salvaje de Aequorea coerulescens, referida en la presente memoria como acGFP.
La Figura 2 es la comparación de las secuencias de aminoácidos de GFP de Aequorea victoria y acGFP de Aequorea Coerulescens.
La Figura 3 es la secuencia de aminoácidos y la secuencia de ácido nucleico que codifican la acGFP mutante, Z1.
La Figura 4 son los espectros de excitación-emisión de Z1 mutante.
La Figura 5 es la secuencia de aminoácidos y la secuencia de ácido nucleico de la secuencia de acGFP mutante, Z2.
La Figura 6 es la secuencia de aminoácidos y la secuencia de ácido nucleico que codifican la acGFP mutante, G1.
La Figura 7 es la secuencia de aminoácidos y de ácido nucleico que codifican la acGFP mutante, G2.
La Figura 8 son los espectros de excitación-emisión de G2 mutante.
La Figura 9 es la secuencia de aminoácidos y la secuencia de ácido nucleico que codifican la acGFP mutante, G22.
La Figura 10 son los espectros de excitación-emisión de G22 mutante.
La Figura 11 análisis de electroforesis en gel de las proteínas acGFP de tipo salvaje y acGFP mutante.
La Figura 12 es la secuencia de aminoácidos y la secuencia de ácido nucleico que codifican la acGFP mutante, G22-G222E.
La Figura 13 son los espectros de absorción excitación-emisión del mutante G22-G222E.
La Figura 14 proporciona los espectros de fotoconversión inducida por UV de G22-G222E.
La Figura 15 es la secuencia de aminoácidos y la secuencia de ácido nucleico que codifican la acGFP mutante, G22-G222E/Y22 0L.
La Figura 16 son los espectros de excitación-emisión de G22-G222E/Y220L mutante.
La Figura 17 es la secuencia de aminoácidos y la secuencia de ácido nucleico que codifican la acGFP mutante, 220-II-5.
La Figura 18 proporciona las propiedades espectrales de 220-II-5 mutante.
La Figura 19 es la secuencia de aminoácidos y la secuencia de ácido nucleico que codifican la acGFP mutante, CFP-rand3.
La Figura 20 son los espectros de excitación-emisión de CFP-rand3 mutante.
La Figura 21 es la secuencia de aminoácidos y la secuencia de ácido nucleico que codifican acGFP mutante, CFP-3.
La Figura 22 proporciona las propiedades espectrales de CFP-3 mutante.
La Figura 23 son las secuencias de aminoácidos y de ácido nucleico de una versión humanizada de G22 mutante.
La Figura 24 muestra microfotografías de células de mamíferos que expresan G22 mutante.
La Figura 25 muestra la fotoactivación de 220-11-5 mutante en colonias de E. coli.
Descripción de la invención
La invención sujeto proporciona un ácido nucleico, donde el ácido nucleico codifica una proteína fluorescente, acGFP. En algunas realizaciones, el ácido nucleico es aislado, ha sido diseñado o está presente en un entorno distinto de su entorno natural. En algunas realizaciones, el ácido nucleico tiene una secuencia de residuos que comprende las que se muestran en las figuras 01, 03, 05, 07, 09, 11, 13, 15, 17, 19, 21, o 23. En algunas realizaciones, el ácido nucleico de la presente invención codifica una proteína que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las que se muestran en las figuras 02, 04, 06, 08, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22.
También se proporcionan los constructos que comprenden un vector y un ácido nucleico de la presente invención. Además, la presente invención proporciona casetes de expresión que incluyen: una región de iniciación de la transcripción funcional en un anfitrión de expresión, un ácido nucleico de la presente invención, y una región de terminación de la transcripción funcional en la casete de expresión como parte de un elemento extracromosómico o integrado en el genoma de la célula como resultado de la introducción de dicha casete de expresión en la célula.
También se proporcionan métodos de producción de una proteína cromogénica y/o fluorescente que incluyen el crecimiento de una célula de la presente invención, que expresa la proteína en la célula, y el aislamiento de la proteína esencialmente libre de otras proteínas.
Además, se proporcionan las proteínas codificadas por un ácido nucleico de la presente invención, puesto que son anticuerpos que se unen específicamente a las proteínas o péptidos de la presente invención.
Además, se proporcionan las células transgénicas (o su progenie) que incluyen un ácido nucleico de la presente invención, ya que son organismos transgénicos no humanos que incluyen un ácido nucleico de la presente invención.
También se proporcionan métodos que emplean una cromoproteína o una proteína fluorescente de la presente invención, o que emplean a un ácido nucleico que codifica...
Reivindicaciones:
1. Un ácido nucleico aislado que codifica un péptido de Aequorea coerulescens, seleccionado entre:
2. Un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un mutante fluorescente de una proteína de Aequorea coerulescens con la secuencia de aminoácidos mostrada en la Figura 1 seleccionado del grupo consistente en:
3. Un ácido nucleico aislado de la reivindicación 2, donde dicho ácido nucleico codifica una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las secuencias de aminoácidos mostradas en las Figuras 3, 5, 6, 7, 9, 12, 15, 17, 19 o 21.
4. Una casete de expresión que comprende
5. Una casete de expresión que comprende
6. Una célula, o su progenie, que comprende la casete de expresión de la reivindicación 4.
7. Una célula, o su progenie, que comprende la casete de expresión de la reivindicación 5.
8. Un péptido aislado codificado por el ácido nucleico de la reivindicación 2.
9. Un anticuerpo que se une específicamente al péptido de la reivindicación 8.
10. Un péptido de fusión que incorpora el péptido de la reivindicación 8.
11. Un organismo transgénico no humano capaz de expresar el péptido de la reivindicación 8.
12. Un método para marcar o detectar una molécula biológica que comprende acoplar dicha molécula biológica al péptido de la reivindicación 8.
13. Un método para marcar o detectar una célula o un orgánulo celular que comprende la producción del péptido de la reivindicación 8 en la célula.
14. Un método detectar la expresión génica que comprende la producción del péptido de la reivindicación 8 en la célula.
Patentes similares o relacionadas:
PROTEINAS FLUORESCENTES Y CROMOPROTEÍNAS DE ESPECIES DE HIDROZOOS QUE NO SON AEQUOREA Y MÉTODOS PARA SU USO, del 24 de Octubre de 2011, de ZAKRYTOE AKTSIONERNOE OBSCHESTVO " EVROGEN": Molécula aislada de ácido nucleico que codifica una proteína fluorescente o una cromoproteína, seleccionada del grupo que consta de: (a) un ácido nucleico que codifica una […]
PROTEÍNAS FLUORESCENTES DE ESPECIES SIN BIOLUMINISCENCIA DE LA CLASE DE LOS ANTOZOOS, GENES CODIFICANTES DE TALES PROTEÍNAS Y SUS USOS, del 24 de Junio de 2011, de CLONTECH LABORATORIES, INC.: Un ácido nucleico en un entorno distinto de su entorno natural cuya secuencia codifica una proteína fluorescente de un organismo antozoo sin bioluminiscencia […]
UN COMPLEJO POLIPEPTÍDICO FLUORESCENTE DE 40 A 500 NM DE TAMAÑO, del 15 de Marzo de 2011, de F. HOFFMANN-LA ROCHE AG: Un método para fabricar un complejo polipeptídico fluo-rescente esférico que se caracteriza por que un polipéptido fluorescente aislado es reticulado inter-molecularmente […]
NUEVAS PROTEÍNAS FLUORESCENTES Y MÉTODOS PARA USARLAS, del 25 de Febrero de 2011, de EVROGEN IP: Un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia de aminoácidos que codifica una proteína fluorescente, donde dicha proteína tiene al menos el 90% de identidad en […]
PROTEINAS FLUORESCENTES, del 22 de Diciembre de 2009, de FISHER BIOIMAGE APS: Una proteína fluorescente derivada de la Proteína Fluorescente Verde (GFP), que comprende una secuencia de aminoácidos en la que el aminoácido de la posición […]
PROTEINAS FLUORESCENTES DE MADURACION RAPIDA Y PROCEDIMIENTOS DE USO DE LAS MISMAS, del 30 de Noviembre de 2009, de THE UNIVERSITY OF CHICAGO: Polinucleótido que codifica un mutante cromo- o fluorescente de DsRed de tipo silvestre, en el que el mutante comprende una mutación en N42 de DsRed […]
CD52 soluble para su uso en el tratamiento o la prevención de la esclerosis múltiple o de la artritis reumatoide, del 29 de Julio de 2020, de THE WALTER AND ELIZA HALL INSTITUTE OF MEDICAL RESEARCH: Uno cualquiera o más de:
i) glucoproteína CD52 soluble, ii) una proteína de fusión que comprende la glucoproteína CD52 soluble como una primera proteína, y una segunda proteína;
[…]
Anticuerpo biespecífico o mezcla de anticuerpos con cadenas ligeras comunes, del 15 de Julio de 2020, de Jiangsu Alphamab Biopharmaceuticals Co., Ltd: Anticuerpo biespecífico o parte de unión a antígeno del mismo, en el que el anticuerpo biespecífico o la parte de unión a antígeno del mismo tiene una cadena […]