PROTEINAS DE FUSION DE TACI-INMUNOGLOBULINA.

Utilización de una proteína de fusión de activador transmembrana e interaccionador con el modulador del calcio y el ligando de la ciclofilina (TACI)-inmunoglobulina para la fabricación de un medicamento para inhibir la proliferación de células tumorales,

en el que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto de receptor TACI que consta de una secuencia de aminoácidos seleccionada entre:

(i) los residuos de aminoácido 34 a 104 de SEC ID N.º 2;

(ii) los residuos de aminoácido 30 a 110 de SEC ID N.º 2; y

(iii) los residuos de aminoácido 30 a 154 de SEC ID N.º 2;

en la que el resto de receptor TACI se une con al menos uno entre ZTNF2 o ZTNF4; y

(b) un resto de inmunoglobulina que comprende una región constante de una inmunoglobulina

Proteínas de fusión de TACI-inmunoglobulina.

Campo de la técnica

La presente invención se refiere, en general, a proteínas de fusión mejoradas que comprenden un resto de receptor de factor de necrosis tumoral y un resto de inmunoglobulina. En concreto, la presente invención se refiere a proteínas de fusión de TACI-inmunoglobulina mejoradas.

Antecedentes de la invención

Las citocinas son proteínas pequeñas solubles que median en una variedad de efectos biológicos, incluyendo la regulación del crecimiento y de la diferenciación de muchos tipos de células (véase, por ejemplo, Arai et al., Annu. Rev. Biochem. 59:783 (1990); Mosmann, Curr. Opin. Immunol. 3:311 (1991); Paul y Seder, Cell 76:241 (1994)). Las proteínas que constituyen el grupo de las citocinas incluyen interleucinas, interferones, factores de estimulación de colonias, factores de necrosis tumoral y otras moléculas reguladoras. Por ejemplo, la interleucina-17 humana es una citocina que estimula la expresión de la interleucina-6, la molécula de adhesión intracelular 1, la interleucina-8, el factor de estimulación de colonias de macrófagos de granulocitos y la expresión de la prostaglandina E2, y desempeña un papel en la maduración preferencial de los precursores hematopoyéticos CD34+ en neutrófilos (Yao et al., J. Immunol. 155:5483 (1995); Fossiez et al., J. Exp. Med. 183:2593 (1996)).

Los receptores que se unen a las citocinas están compuestos comúnmente por una o más proteínas integrales de membrana que se unen a la citocina con una afinidad elevada y transducen esta unión con la célula a través de partes citoplasmáticas del ciertas subunidades de los receptores. Los receptores de citocinas han sido agrupados en varias clases en base a las semejanzas entre sus dominios de unión con ligandos extracelulares. Por ejemplo, las cadenas de los receptores responsables de la unión y/o la transducción del efecto de los interferones son miembros de la familia de receptores de citocinas de tipo II, en base a un dominio extracelular característico de 200 residuos.

Las interacciones celulares que tienen lugar durante una respuesta inmune están reguladas por miembros de varias familias de receptores de la superficie celular, incluyendo la familia de los receptores de los factores de necrosis tumoral (TNFR, Tumor Necrosis Factor Receptors). La familia de los TNFR consta de un número de receptores glicoproteínicos integrales de membrana, muchos de los cuales, en combinación con sus respectivos ligandos, regulan las interacciones entre los diferentes linajes celulares hematopoyéticos (véase, por ejemplo, Cosman, Stem Cells 12:440 (1994); Wajant et al., Cytokine Growth Factor Rev. 10: 15 (1999); Yeh et al., Immunol. Rev. 169:283 (1999); Idriss y Naismith, Microsc. Res. Tech. 50:184 (2000)).

Uno de tales receptores es el TACI (transmembrane activator and CAML-interactor), activador transmembrana e interaccionador con el CAML (von Bülow y Bram, Science 228:138 (1997); Bram y von Bülow, patente estadounidense n.º 5.969.102 (1999)). El TACI es un receptor unido a la membrana que tiene un dominio extracelular que contiene dos pseudo-repeticiones ricas en cisteína, un dominio transmembranal y un dominio citoplasmático que interacciona con el CAML (CAlcium-Modulator and cyclophilin Ligand), modulador del calcio y ligando de la ciclofilina), una proteína integral de membrana ubicada en las vesículas intracelulares que es co-inductora de la activación de los NF-AT (Nuclear Factor of Activated T cells, factores nucleares de células T activadas) cuando se sobreexpresa en células Jurkat. El TACI se asocia con células B y un subconjunto de células T. Las secuencias de nucleótidos que codifican el TACI y su correspondiente secuencia de aminoácidos se proporcionan en la presente memoria como las SEC ID N.º 1 y 2, respectivamente.

El receptor TACI se une con dos miembros de la familia de ligandos de los factores de necrosis tumoral (TNF, Tumor Necrosis Factor). Un ligando se nombra de forma muy diversa ZTNF4, "BAFF", "neutrocina-a", "BLyS", "TALL-1" y "THANK" (Yu et al., Publicación internacional n.º WO98/18921 (1998), Moore et al., Science 285:269 (1999); Mukhopadhyay et al., J Biol. Chem. 274:15978 (1999); Schneider et al., J. Exp. Med. 189:1747 (1999); Shu et al., J Leukoc. Biol. 65:680 (1999)). La secuencia de aminoácidos de ZTNF4 se proporciona como SEC ID N.º 3. El otro ligando ha sido nombrado "ZTNF2", "APRIL" y "ligando inductor de la apoptosis de los TNFR 1" (Hahne et al., J Exp. Med. 188:1185 (1998); Kelly et al., Cancer Res. 60:1021 (2000)). La secuencia de aminoácidos de ZTNF2 se proporciona como SEC ID N.º 4. Ambos ligandos también son unidos por el receptor de maduración de células B (BCMA, B-Cell MAturation receptor) (Gross et al., Nature 404:995 (2000)). Las secuencia de nucleótidos y la de aminoácidos del BCMA se proporcionan como la SEC ID N.º 26 y la SEC ID N.º 27, respectivamente.

Las actividades demostradas in vivo de los receptores de los factores de necrosis tumoral ilustran el potencial clínico de las formas solubles del receptor. Las formas solubles del receptor TACI han sido generadas como proteínas de fusión de inmunoglobulina. Las versiones iniciales dieron como resultado una proteína heterogénea de baja expresión. La heterogeneidad se observó en el terminal amino de TACI, en el terminal carboxilo del Fc, y en la región del tallo del TACI. Existe, por tanto, la necesidad de composiciones de receptor TACI farmacéuticamente útiles.

El documento WO 00/40716 describe polipéptidos secretados solubles y sus usos para detectar ligandos, agonistas y antagonistas, así como procedimientos que modulan la activación de las células B.

El documento WO 01/81417 describe el TACI como un agente anti-humano.

La presente invención proporciona el uso de una proteína de fusión de activador transmembrana e interaccionador con el modulador del calcio y el ligando de la ciclofilina-inmunoglobulina para la fabricación de un medicamento para inhibir la proliferación de células tumorales, en el que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina comprende: (a) un resto de receptor TACI que consta de un fragmento de un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de los residuos de aminoácido 30 a 154 de la SEC ID N.º 2, en la que el resto de receptor TACI consta de una secuencia de aminoácidos seleccionada entre (i) los residuos de aminoácido 34 a 104 de la SEC ID N.º 2, (ii) los residuos de aminoácido 30 a 110 de la SEC ID N.º 2; y (iii) los residuos de aminoácido 30 a 154 de la SEC ID N.º 2; y en la que el resto de receptor TACI se une al menos con uno entre ZTNF2 o ZTNF4, y (b) un resto de inmunoglobulina que comprende una región constante de una inmunoglobulina.

Por tanto, la presente invención también proporciona una proteína de fusión que comprende: (a) un resto de receptor activador transmembrana e interaccionador con el modulador del calcio y el ligando de la ciclofilina (TACI), en la que el resto de receptor TACI consta de una secuencia de aminoácidos seleccionada entre: (i) los residuos de aminoácido 34 a 104 de la SEC ID N.º 2, (ii) los residuos de aminoácido 30 a 110 de la SEC ID N.º 2 y (iii) los residuos de aminoácido 30 a 154 de la SEC ID N.º 2; en la que el resto de receptor TACI se une al menos con uno entre ZTNF2 o ZTNF4, y (b) un resto de inmunoglobulina que comprende una región constante de una inmunoglobulina.

La presente invención proporciona mejores proteínas de fusión de TACI-inmunoglobulina adecuadas como compuestos terapéuticos.

Breve descripción de las figuras

La figura 1 muestra la secuencia de aminoácidos del TACI humano. Las ubicaciones de las pseudo-repeticiones ricas en cisteína se indican en sombreado, el dominio transmembrana está encuadrado y la región del tallo se indica con una línea discontinua.

La Figura 2 es un diagrama esquemático de una inmunoglobulina de la subclase de IgGl. C_L: región constante de las cadenas ligeras; C_H1, C_H2, C_H3: regiones constantes de las cadenas pesadas; V_L: región variable de las cadenas ligeras; V_H: región variable de las cadenas pesadas; CHO: hidrato de carbono; N: terminal amino; C: terminal carboxilo.

Las figuras 3A, 3B, 3C y 3D muestran una comparación de la secuencia de aminoácidos del...

1. Utilización de una proteína de fusión de activador transmembrana e interaccionador con el modulador del calcio y el ligando de la ciclofilina (TACI)-inmunoglobulina para la fabricación de un medicamento para inhibir la proliferación de células tumorales, en el que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto de receptor TACI que consta de una secuencia de aminoácidos seleccionada entre:

(i) los residuos de aminoácido 34 a 104 de SEC ID N.º 2;

(ii) los residuos de aminoácido 30 a 110 de SEC ID N.º 2; y

(iii) los residuos de aminoácido 30 a 154 de SEC ID N.º 2;

en la que el resto de receptor TACI se une con al menos uno entre ZTNF2 o ZTNF4; y

(b) un resto de inmunoglobulina que comprende una región constante de una inmunoglobulina.

2. Utilización según la reivindicación 1, en el que el medicamento comprende la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina y un vehículo farmacéuticamente aceptable, y en el que la composición farmacéutica es para su administración a un sujeto mamífero que tiene un tumor.

3. Utilización según la reivindicación 2 para inhibir la proliferación de linfocitos B en el sujeto mamífero.

4. Utilización de una proteína de fusión de activador transmembrana e interaccionador con el modulador del calcio y el ligando de la ciclofilina (TACI)-inmunoglobulina para la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad autoinmune, en el que la proteína de fusión e TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto de receptor TACI que consta de una secuencia de aminoácidos seleccionada entre:

(i) los residuos de aminoácido 34 a 104 de SEC ID N.º 2;

(ii) los residuos de aminoácido 30 a 110 de SEC ID N.º 2; y

(iii) los residuos de aminoácido 30 a 154 de SEC ID N.º2;

en la que el resto de receptor TACI se une con al menos uno entre ZTNF2 o ZTNF4; y

(b) un resto de inmunoglobulina que comprende una región constante de una inmunoglobulina.

5. Utilización según la reivindicación 4, en el que dicha enfermedad autoinmune se selecciona del grupo constituido por lupus eritematoso sistémico, miastenia grave, esclerosis múltiple, diabetes mellitus dependiente de la insulina, enfermedad de Crohn, artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil de curso poliarticular y artritis psoriática.

6. Utilización de una proteína de fusión de activador transmembrana e interaccionador con el modulador del calcio y el ligando de la ciclofilina (TACI)-inmunoglobulina para la fabricación de un medicamento para tratar asma, bronquitis o enfisema, en el que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto de receptor TACI que consta de una secuencia de aminoácidos seleccionada entre:

(i) los residuos de aminoácido 34 a 104 de SEC ID N.º 2;

(ii) los residuos de aminoácido 30 a 110 de SEC ID N.º 2; y

(iii) los residuos de aminoácido 30 a 154 de SEC ID N.º2;

en la que el resto de receptor TACI se une con al menos uno entre ZTNF2 o ZTNF4; y

(b) un resto de inmunoglobulina que comprende una región constante de una inmunoglobulina.

7. Utilización de una proteína de fusión de activador transmembrana e interaccionador con el modulador del calcio y el ligando de la ciclofilina (TACI)-inmunoglobulina para la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad renal, en el que la proteína de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto de receptor TACI que consta de una secuencia de aminoácidos seleccionada entre:

(i) los residuos de aminoácido 34 a 104 de SEC ID N.º 2;

(ii) los residuos de aminoácido 30 a 110 de SEC ID N.º 2; y

(iii) los residuos de aminoácido 30 a 154 de SEC ID N.º2;

en la que el resto de receptor TACI se une con al menos uno entre ZTNF2 o ZTNF4; y

(b) un resto de inmunoglobulina que comprende una región constante de una inmunoglobulina.

8. Utilización según la reivindicación 7, en el que dicha enfermedad renal se selecciona del grupo constituido por insuficiencia renal en estadio terminal, glomerulonefritis, vasculitis, nefritis, amiloidosis y pielonefritis.

9. Utilización de una proteína de fusión de activador transmembrana e interaccionador con el modulador del calcio y el ligando de la ciclofilina (TACI)-inmunoglobulina para la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad o un trastorno asociado con inmunosupresión, rechazo de injertos, enfermedad del injerto frente al huésped, inflamación, dolor articular, hinchazón, anemia y choque séptico, en el que la proteína de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto de receptor TACI que consta de una secuencia de aminoácidos seleccionada entre:

(i) los residuos de aminoácido 34 a 104 de SEC ID N.º 2;

(ii) los residuos de aminoácido 30 a 110 de SEC ID N.º 2; y

(iii) los residuos de aminoácido 30 a 154 de SEC ID N.º2;

en la que el resto de receptor TACI se une con al menos uno entre ZTNF2 o ZTNF4; y

(b) un resto de inmunoglobulina que comprende una región constante de una inmunoglobulina.

10. Utilización de una proteína de fusión de activador transmembrana e interaccionador con el modulador del calcio y el ligando de la ciclofilina (TACI)-inmunoglobulina para la fabricación de un medicamento para tratar un trastorno seleccionado entre neoplasma, leucemia linfocítica crónica, mieloma múltiple, linfoma de no Hodgkin, enfermedad linfoproliferativa posterior a un transplante y gammopatía de cadena ligera, en el que la proteína de TACI-inmunoglobulina comprende:

(a) un resto de receptor TACI que consta de una secuencia de aminoácidos seleccionada entre:

(i) los residuos de aminoácido 34 a 104 de SEC ID N.º 2;

(ii) los residuos de aminoácido 30 a 110 de SEC ID N.º 2; y

(iii) los residuos de aminoácido 30 a 154 de SEC ID N.º2;

en la que el resto de receptor TACI se une con al menos uno entre ZTNF2 o ZTNF4; y

(b) un resto de inmunoglobulina que comprende una región constante de una inmunoglobulina.

11. Utilización según cualquier reivindicación anterior, en el que el resto de receptor TACI consta de los residuos de aminoácido 34 a 104 de SEC ID N.º 2 y en el que la proteína de fusión comprende además un segmento del tallo que consta de una serie continua de 2 a 50 residuos de aminoácido consecutivos que parte del residuo de aminoácido 105 de SEC ID N.º 2.

12. Utilización según cualquier reivindicación anterior, en el que el resto de inmunoglobulina comprende una región constante de cadena pesada.

13. Utilización según la reivindicación 12, en el que el resto de inmunoglobulina comprende una región constante de cadena pesada humana.

14. Utilización según la reivindicación 13, en el que la región constante de cadena pesada es una región constante de cadena pesada de IgG1.

15. Utilización según la reivindicación 14, en el que el resto de inmunoglobulina es un fragmento Fc de IgG1 que comprende los dominios C_H2 y C_H3.

16. Utilización según la reivindicación 15, en el que el resto de inmunoglobulina es un fragmento Fc de IgG1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 33.

17. Utilización según la reivindicación 16, en el que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 54.

18. Utilización según cualquier reivindicación anterior, en el que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina es un dímero.

19. Utilización según cualquier reivindicación anterior, en el que el medicamento es para su administración a células cultivadas in vitro.

20. Proteína de fusión que comprende:

(a) un resto de receptor activador transmembrana e interaccionador con el modulador del calcio y el ligando de la ciclofilina (TACI), en la que el resto de receptor TACI consta de una secuencia de aminoácidos seleccionada entre:

(i) los residuos de aminoácido 34 a 104 de SEC ID N.º 2;

(ii) los residuos de aminoácido 30 a 110 de SEC ID N.º 2; y

(iii) los residuos de aminoácido 30 a 154 de SEC ID N.º2;

en la que el resto de receptor TACI se une con al menos uno entre ZTNF2 o ZTNF4; y

(b) un resto de inmunoglobulina que comprende una región constante de una inmunoglobulina.

21. Proteína de fusión según la reivindicación 20, en la que el resto de receptor TACI consta de los residuos de aminoácido 34 a 104 de SEC ID N.º 2, y en la que la proteína de fusión comprende además un segmento del tallo que consta de una serie continua de 2 a 50 residuos de aminoácido consecutivos que parte del residuo de aminoácido 105 de SEC ID N.º 2.

22. Proteína de fusión de la reivindicación 20 ó 21, en la que el resto de inmunoglobulina comprende una región constante de cadena pesada.

23. Proteína de fusión de la reivindicación 22, en la que el resto de inmunoglobulina comprende una región constante de cadena pesada humana.

24. Proteína de fusión de la reivindicación 23, en la que la región constante de cadena pesada es una región constante de cadena pesada de IgG1.

25. Proteína de fusión de la reivindicación 24, en la que el resto de inmunoglobulina es un fragmento Fc de IgG1 que comprende los dominios C_H2 y C_H3.

26. Proteína de fusión de la reivindicación 25, en la que el resto de inmunoglobulina es un fragmento Fc de IgG1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 33.

27. Proteína de fusión de la reivindicación 26, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina tiene una secuencia de aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 54.

28. Proteína de fusión de cualquiera de las reivindicaciones 20-27, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina es un dímero.

29. Molécula de ácido nucleico que codifica una proteína de fusión según cualquiera de las reivindicaciones 20-28.

30. Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 29, en la que la molécula de ácido nucleico tiene una secuencia de nucleótidos que comprende la secuencia de nucleótidos de SEC ID N.º 53.

31. Composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una proteína de fusión de activador transmembrana e interaccionador con el modulador del calcio y el ligando de la ciclofilina (TACI)-inmunoglobulina, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina tiene una secuencia de aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º: 54.

32. Composición farmacéutica según la reivindicación 31, en la que la proteína de fusión de TACI-inmunoglobulina es un dímero.