POLIPEPTIDOS SECRETADOS Y TRANSMEMBRANA Y ACIDOS NUCLEICOS QUE LOS CODIFICAN.

Ácido nucleico aislado que:

(i) codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 2,

con o sin la secuencia señal y/o la metionina de iniciación, opcionalmente con el dominio transmembrana eliminado o desactivado;

(ii) codifica un polipéptido que consiste en los aminoácidos 1 a Y del polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 2, opcionalmente sin la secuencia señal, donde Y es cualquier aminoácido entre los residuos 136 y 146, ambos incluidos;

(iii) codifica un polipéptido que tiene por lo menos un 89% de identidad en la secuencia de aminoácidos con el polipéptido de (i) y que es capaz de inducir un paso de hemoglobina adulta a hemoglobina fetal en una línea de células eritroblásticas;

(iiia) codifica un polipéptido que tiene por lo menos un 80% de identidad en la secuencia de aminoácidos con, y una deleción en la secuencia de aminoácidos de, el polipéptido de (i) o (ii), donde el polipéptido es capaz de inducir un paso de hemoglobina adulta a hemoglobina fetal en una línea de células eritroblásticas;

(iiib) codifica un polipéptido que tiene por lo menos un 80% de identidad en la secuencia de aminoácidos con, y una sustitución en la secuencia de aminoácidos de, el polipéptido de (i) o (ii), donde el polipéptido es capaz de inducir un paso de hemoglobina adulta a hemoglobina fetal en una línea de células eritroblásticas;

(iiic) codifica un polipéptido que tiene por lo menos un 80% de identidad en la secuencia de aminoácidos con, y una inserción en la secuencia de aminoácidos de, el polipéptido de (ii), donde el polipéptido es capaz de inducir un paso de hemoglobina adulta a hemoglobina fetal en una línea de células eritroblásticas;

iv) tiene la secuencia de ácidos nucleicos mostrada en la figura 1;

(v) tiene la secuencia de ácidos nucleicos de la secuencia codificante de longitud completa mostrada en la figura 1;

(vi) tiene la secuencia codificante de longitud completa del inserto (DNA96850-2705) contenido en ATCC-PTA 479; o

(vii) tiene por lo menos un 89% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos con el ácido nucleico de (iv), (v) o (vi) y codifica un polipéptido capaz de inducir un paso de hemoglobina adulta a hemoglobina fetal en una línea de células eritroblásticas,

en el que dicha identidad de secuencia se determina utilizando el programa informático ALIGN-2

Polipéptidos secretados y transmembrana y ácidos nucleicos que los codifican.

Campo de la invención

La presente invención se refiere en general a la identificación y aislamiento de ADN nuevo y a la producción recombinante de polipéptidos nuevos.

Antecedente de la invención

Las proteínas extracelulares tienen funciones importantes en, entre otras cosas, la formación, diferenciación y mantenimiento de organismos multicelulares. El destino de muchas células individuales, por ejemplo, proliferación, migración, diferenciación, o interacción con otras células, está gobernada habitualmente por la información recibida de otras células y/o el medio inmediato. Esta información es transmitida frecuentemente mediante polipéptidos secretados (por ejemplo, factores mitogénicos, factores de supervivencia, factores citotóxicos, factores de diferenciación, neuropéptidos, y hormonas) que, a su vez, es recibida e interpretada por diversos receptores de células o proteínas unidas a membrana. Estos polipéptidos secretados o moléculas de señalización pasan normalmente a través del mecanismo secretor de las células para alcanzar su sitio de acción en el medio extracelular.

Las proteínas secretadas tienen varias aplicaciones industriales, incluyendo productos farmacéuticos, de diagnóstico, bionsensores y biorreactores. La mayoría de los fármacos de proteínas disponibles actualmente, tales como agentes trombolíticos, interferones, interleuquinas, eritropoyetinas, factores estimulantes de colonias, y varias otras citoquinas, son proteínas secretoras. Sus receptores, que son proteínas de membrana, también tienen potencial como agentes terapéuticos o de diagnóstico. Se están realizando esfuerzos tanto a nivel de industria como académica para identificar nuevas proteínas secretadas nativas. Muchos esfuerzos se centran en el cribado de bibliotecas de ADN recombinante de mamífero para identificar las secuencias codificantes de proteínas secretadas nuevas. En la literatura se describen ejemplos de procedimientos de cribado y técnicas [véase, por ejemplo, Klein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 93: 7108-7113 (1996); Patente de Estados Unidos No. 5.536.637)].

Las proteínas unidas a membrana y receptores pueden tener funciones importantes en, entre otras cosas, la formación, diferenciación y mantenimiento de organismos multicelulares. El destino de muchas células individuales, por ejemplo, proliferación, migración, diferenciación, o interacción con otras células, está gobernada habitualmente por la información recibida de otras células y/o el medio inmediato. Esta información es transmitida frecuentemente mediante polipéptidos secretados (por ejemplo, factores mitogénicos, factores de supervivencia, factores citotóxicos, factores de diferenciación, neuropéptidos, y hormonas) que, a su vez, es recibida e interpretada por diversos receptores de células o proteínas unidas a membrana. Entre dichas proteínas unidas a membrana y receptores de células se incluyen; pero no se limitan a, receptores de citoquina, quinasas receptoras, fosfatasas receptoras, receptores implicados en las interacciones célula-célula, y moléculas de adhesina celula, como selectinas e integrinas. Por ejemplo, la transducción de señales que regulan el crecimiento y la diferenciación celular está regulada en parte por la fosforilación de varias proteínas celulares. Las proteínas tirosina quinasas, enzimas que catalizan ese proceso, también pueden actuar como receptores de los factores de crecimiento. Entre los ejemplos se incluyen el receptor del factor de crecimiento de fibroblastos y el receptor del factor de crecimiento nervioso.

Las proteínas unidas a membrana y las moléculas receptoras tienen varias aplicaciones industriales, incluyendo como agentes farmacéuticos y de diagnóstico. Las inmunoadhesinas receptoras, por ejemplo, se pueden utilizar como agentes terapéuticos para bloquear las interacciones receptor-ligando. Las proteínas unidas a membrana también se pueden utilizar para cribar el péptido potencial o pequeñas moléculas inhibidoras de la interacción receptor/ligando pertinente.

Se están realizando esfuerzos tanto a nivel de industria como académica para identificar nuevas proteínas unidas a membrana o receptores nativos. Muchos esfuerzos se centran en el cribado de bibliotecas de ADN recombinante de mamífero para identificar las secuencias codificantes de nuevas proteínas unidas a membrana o receptores.

PRO6030

Se están realizando esfuerzos tanto a nivel industrial como académico para identificar nuevas proteínas receptoras transmembrana nativas. Muchos de los esfuerzos se están centrando en el cribado de genotecas de ADN recombinante de mamíferos para identificar las secuencias codificantes de proteínas receptoras transmembrana novedosas, denominadas en la presente como polipéptidos PRO6030.

Descripción resumida de la invención

PRO6030

Se ha identificado un clon de ADNc (denominado en la presente invención como DNA96850-2705) que codifica un polipéptido nuevo, denominado en la presente solicitud como "PRO6030".

En una realización, la presente invención proporciona una molécula de ácido nucleico aislada, tal como se define en las reivindicaciones, que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido PRO6030.

En un aspecto específico, la presente invención proporciona una molécula de ácido nucleico aislada, tal como se define en las reivindicaciones, que comprende ADN que codifica un polipéptido PRO6030 sin la secuencia señal N-terminal y/o la metionina de iniciación, o es complementaria a dicha molécula de ácido nucleico codificante. El péptido señal se ha identificado con dudas como que se extiende desde aproximadamente el aminoácido de posición 1 hasta aproximadamente el aminoácido de posición 26 en la secuencia de la figura 2. Cabe indicar, sin embargo, que el extremo C-terminal del péptido señal puede variar, pero muy probablemente en no más de aproximadamente 5 aminoácidos en cualquier cara del extremo C-terminal del péptido señal tal como se ha identificado inicialmente en la presente invención, donde el extremo C-terminal del péptido señal se puede identificar según el criterio utilizado habitualmente en la técnica para identificar ese tipo de elemento de la secuencia de aminoácidos (por ejemplo, Nielsen et al., Prot. Eng. 10: 1-6 (1996) y von. Heinje et al., Nucl. Acids. Res. 14: 4683-4690 (1986)). Además, también se reconoce que, en algunos casos, la escisión de la secuencia señal de un polipéptido secretado no es completamente uniforme, dando lugar a más de una especie secretada. La presente invención contempla estos polipéptidos, y los polinucleótidos que los codifican. Por tanto, para los objetivos de la presente invención, el péptido señal del polipéptido PRO6030 mostrado en la figura 2, se extiende desde los aminoácidos 1 a X de la figura 2, donde X es cualquier aminoácidos desde 21 a 31 de la figura 2. Por lo tanto, las formas maduras del polipéptido PRO6030 que están comprendidas por la presente invención, incluyen aquellas que comprenden los aminoácidos X a 322 de la figura 2, donde X es cualquier aminoácido desde 21 a 31 de la figura 2 y variantes de las mismas tal como se describe a continuación. También se contemplan las moléculas de ácido nucleico aisladas que codifican estos polipéptidos.

Otro aspecto de la presente invención proporciona una molécula de ácido nucleico aislada, tal como se define en las reivindicaciones, que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido PRO6030 al que se ha eliminado o desactivado el dominio transmembrana, o es complementaria a dicha secuencia de nucleótidos codificante, donde el dominio transmembrana se ha identificado con dudas como que se extiende desde aproximadamente el aminoácido de posición 142 hasta aproximadamente el aminoácido de posición 158 en la secuencia de la figura 2. Por lo tanto, se contemplan los dominios extracelulares solubles de los polipéptidos PRO6030 descritos la presente invención.

En otra realización, la presente invención proporciona un polipéptido PRO6030 aislado tal como se define en las reivindicaciones.

En un aspecto específico, la presente invención proporciona un polipéptido PRO6030 de secuencia nativa aislado, que en ciertas realizaciones, incluye una secuencia de aminoácidos que comprende residuos desde aproximadamente 1 o aproximadamente 27 a aproximadamente 322 de la figura 2.

En un aspecto específico, la presente invención proporciona un polipéptido...

1. Ácido nucleico aislado que:

(i) codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 2, con o sin la secuencia señal y/o la metionina de iniciación, opcionalmente con el dominio transmembrana eliminado o desactivado;

(ii) codifica un polipéptido que consiste en los aminoácidos 1 a Y del polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 2, opcionalmente sin la secuencia señal, donde Y es cualquier aminoácido entre los residuos 136 y 146, ambos incluidos;

(iii) codifica un polipéptido que tiene por lo menos un 89% de identidad en la secuencia de aminoácidos con el polipéptido de (i) y que es capaz de inducir un paso de hemoglobina adulta a hemoglobina fetal en una línea de células eritroblásticas;