PROMOTORES DE PLATANO Y MELON PARA LA EXPRESION DE TRANSGENES EN PLANTAS.
Molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en:
(a)la secuencia presentada como SEQ ID NO:4; y
(b)secuencias que son al menos un 90% idénticas a la secuencia de SEQ ID NO:4 y que se caracterizan por la expresión constitutiva de un gen al que dichas secuencias están operativamente unidas
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US00/07293.
Solicitante: AGRITOPE, INC.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 16160 SW UPPER BOONES FERRY RD.,PORTLAND, OR 97224-7744.
Inventor/es: CLENDENNEN,STEPHANIE,K, KELLOGG,JILL,A, PHAN,CHAU,B, MATHEWS,HELENA,V, WEBB,NANCY,M.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 9 de Diciembre de 2009.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K14/415 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de vegetales.
- C12N15/82B
- C12N9/02D
- C12N9/88 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Liasas (4.).
Clasificación PCT:
- A01H5/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA. › A01H NOVEDADES VEGETALES O PROCEDIMIENTOS PARA SU OBTENCION; REPRODUCCION DE PLANTAS POR TECNICAS DE CULTIVO DE TEJIDOS. › Angiospermas,es decir, plantas con flores, caracterizadas por sus partes vegetales; Angiospermas caracterizadas de forma distinta que por su taxonomía botánica.
- C12N15/05 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Células vegetales.
- C12N15/09 C12N 15/00 […] › Tecnología del ADN recombinante.
- C12N15/11 C12N 15/00 […] › Fragmentos de ADN o de ARN; sus formas modificadas (ADN o ARN no empleado en tecnología de recombinación C07H 21/00).
- C12N15/63 C12N 15/00 […] › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
- C12N15/82 C12N 15/00 […] › para células vegetales.
- C12N5/14 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células vegetales.
Clasificación antigua:
- A01H5/00 A01H […] › Angiospermas,es decir, plantas con flores, caracterizadas por sus partes vegetales; Angiospermas caracterizadas de forma distinta que por su taxonomía botánica.
- C12N15/05 C12N 15/00 […] › Células vegetales.
- C12N15/09 C12N 15/00 […] › Tecnología del ADN recombinante.
- C12N15/11 C12N 15/00 […] › Fragmentos de ADN o de ARN; sus formas modificadas (ADN o ARN no empleado en tecnología de recombinación C07H 21/00).
- C12N15/63 C12N 15/00 […] › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
- C12N15/82 C12N 15/00 […] › para células vegetales.
- C12N5/14 C12N 5/00 […] › Células vegetales.
Fragmento de la descripción:
Promotores de plátano y melón para la expresión de transgenes en plantas.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a promotores asociados a frutas de plátano novedosos, a un promotor de actina de melón y a un promotor de fusión de actina de melón/asociado a frutas de plátano. La invención también se refiere a construcciones de ácido nucleico heterólogos, vectores, kits y métodos de transformación que emplean tales promotores. La invención se refiere además a plantas y células vegetales transgénicas transformadas con construcciones de ácido nucleico heterólogos que comprenden los promotores y a métodos para seleccionar promotores de plantas en diversos tipos de tejido vegetal usando un ensayo de expresión transitoria.
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Antecedentes de la invención
Las secuencias reguladoras de la transcripción o los promotores que regulan la expresión génica en plantas son elementos esenciales de la ingeniería genética de plantas. Varios ejemplos de promotores útiles para la expresión de genes heterólogos en plantas están ahora disponibles (Zhu, et al., 1995; Ni, et al., 1995).
La mayoría de los promotores son de aproximadamente 500-1500 bases. Los promotores para expresar una secuencia génica heteróloga en plantas pueden derivarse de ADN de plantas, por ejemplo, la proteína de choque térmico 80 de la coliflor (hsp 80, Brunke y Wilson. 1993; patente estadounidense número 5.612.472), u otras fuentes, por ejemplo, virus de plantas, por ejemplo, el promotor del virus del mosaico de la coliflor 35S o bacterias que infectan plantas, por ejemplo, el promotor de nopalina sintasa (nos) (Rogers, 1991), el promotor de octopina sintasa (ocs) (Leisner y Gelvin, 1988) y el promotor de manopina sintasa (mas) de Agrobacterium.
La expresión de genes heterólogos o secuencias seleccionadas de genes en plantas transgénicas ha implicado normalmente el uso de promotores constitutivos, que dirigen la expresión de un producto en toda la planta en todo momento y en la mayoría de los tejidos (por ejemplo, hsp80), el promotor de ubiquitina del tomate (Picton, et al., 1993) y el promotor E4 de la frambuesa (patentes estadounidenses números 5.783.393; y 5.783.394).
Se conoce un número limitado de promotores inducibles y/o específicos de tejido. Los promotores que proporcionan expresión específica de fruta incluyen los promotores E4 y E8 del tomate (Cordes, et al., 1989: Bestwick, et al., 1995; patente estadounidense número 5.859.330). Otro promotor específico de fruta es el promotor del gen 2A11 del tomate. Se ha demostrado que las secuencias de ácido nucleico colocadas bajo el control regulador de la región no codificante en 5' del gen 2A11 del tomate (Van Haaren, 1993) se transcriben preferentemente en tejido de fruta en desarrollo. Se ha notificado que la regulación específica de fruta del promotor de actinidina del kiwi se conserva en plantas de petunia transgénicas (Lin, et al., 1993).
La pectato liasa (PEL) se ha identificado anteriormente como asociada a fruta y maduración en el plátano (Dominguez-Puigjaner et al., 1997; Medina-Suarez...
Reivindicaciones:
1. Molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en:
2. Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 1, en la que la secuencia de (b) tiene actividad promotora en plantas monocotiledóneas y dicotiledóneas.
3. Promotor híbrido que comprende, en dirección de 5' a 3': un primer segmento de nucleótidos que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en:
hasta e incluyendo la caja TATA fusionada a un segundo segmento de nucleótidos que comprende al menos una parte de la molécula de ácido nucleico según la reivindicación 1 que está en 3' con respecto a la caja TATA.
4. Promotor híbrido según la reivindicación 3, que comprende la secuencia de ácido nucleico presentada como SEQ ID NO:6.
5. Vector de expresión de plantas que comprende la molécula de ácido nucleico según la reivindicación 1 ó 2 o el promotor híbrido según la reivindicación 3 ó 4.
6. Vector de expresión de plantas según la reivindicación 5, en el que dicha molécula de ácido nucleico o dicho promotor híbrido están operativamente unidos a un gen.
7. Vector de expresión de plantas según la reivindicación 6, en el que el gen es heterólogo con respecto al promotor.
8. Vector de expresión de plantas según la reivindicación 6 ó 7, en el que el gen codifica para un marcador seleccionable.
9. Vector de expresión de plantas según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en el que dicho gen está operativamente unido a secuencias control reconocidas por una célula huésped transformada con el vector.
10. Célula vegetal que comprende el vector de expresión de plantas según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9.
11. Célula vegetal según la reivindicación 10, que es dicotiledónea o monocotiledónea.
12. Método para producir una planta transgénica, que comprende: introducir en una célula vegetal el vector de expresión de plantas según una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9 y hacer crecer la célula vegetal transformada para producir una planta transgénica.
13. Método de expresión transitoria para evaluar la expresión de promotores en tejido vegetal, que comprende:
14. Método según la reivindicación 13, en el que dicha preparación significa esterilizar y cortar el tejido vegetal.
15. Método según la reivindicación 13 ó 14, en el que dicha introducción es mediante bombardeo de partículas de un tejido vegetal con una suspensión de ADN y partículas de oro.
16. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 15, en el que dicho tejido vegetal es dicotiledóneo o monocotiledóneo.
17. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 16, en el que dicho tejido vegetal se selecciona del grupo que consiste en ajo, cebolla y trozos de plátano.
18. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 17, en el que el gen codifica para un marcador seleccionable.
19. Método según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 18, en el que dicho gen es ß-glucuronidasa (GUS) y la detección es por medios visuales.
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