Una mezcla de lípidos para preparar un tensioactivo sintético;

estando dicha mezcla de lípidos compuesta principalmente de:

al menos un 95% en peso de fosfolípidos; comprendiendo estos fosfolípidos:

1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPFC) en una cantidad de al menos un 40% en peso, fosfolípidos poliinsaturados en una cantidad superior a un 10% en peso y fosfolípidos saturados o monoinsaturados ácidos en una cantidad superior a un 10% en peso;

estando todas las cantidades calculadas sobre el peso total de la mezcla de lípidos

Mezclas de lípidos novedosas para tensioactivos sintéticos.

Antecedentes de la invención

El tensioactivo pulmonar endógeno reduce la tensión superficial en la interfaz aire-líquido del revestimiento alveolar, evitando que los pulmones colapsen al término de la espiración. La deficiencia de tensioactivos es un trastorno común en bebés prematuros y provoca el síndrome disneico agudo (SDA) que puede tratarse eficazmente con preparaciones que son extractos lipídicos de pulmón de mamífero picado o lavado pulmonar. Dichas preparaciones se conocen como tensioactivos naturales modificados y se componen principalmente de fosfolípidos (FL) como fosfatidilcolina (FC), fosfatidiletanolamina (FE) y fosfatidilglicerol (FG) y las proteínas de tensioactivo hidrófobas B y C (SP-B y SP-C).

Por razones de claridad, se enumeran a continuación los FL a los que se hace referencia en la solicitud de patente que sigue:

- fosfatidilcolina: FC,

- fosfatidiletanolamina: FE,

- fosfatidilglicerol: FG,

- fosfatidilinositol: FI,

- fosfatidilserina: FS,

- esfingomielina: EM,

- 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoglicerol, conocido generalmente como dipalmitoil-fosfatidilglicerol: DPFG,

- 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina, conocido generalmente como dipalmitoil-fosfatidilcolina: DPFC,

- 1-palmitoil-2-oleil-sn-glicero-3-fosfoglicerol, conocido generalmente como palmitoil-oleil-fosfatidilglicerol: POFG,

- 1-palmitoil-2-oleil-sn-glicero-3-fosfocolina conocido generalmente como palmitoil-oleil-fosfatidilcolina: POFC,

- 1,2-dioleil-sn-glicero-3-fosfoglicerol conocido generalmente como dioleil-fosfatidilglicerol: DOFG,

- 1-palmitoil-2-linoleil-sn-glicero-3-fosfocolina, conocido generalmente como palmitoil-linoleil-fosfatidil colina: PLFC,

- 1-estearoil-2-araquidonoil-sn-glicero-3-fosfocolina, conocido generalmente como estearoil-araquidonoil-fosfocolina (EAFC),

- 1-palmitoil-2-araquidonoil-sn-glicero-3-fosfocolina (PAFC),

- 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina, conocido generalmente como dipalmitoil-fosfatidiletanolamina: DPFE,

- 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina, conocido generalmente como diestearoil-fosfatidiletanolamina: DEFE,

- 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfo-L-serina, conocido generalmente como dipalmitoil-fosfatidilserina: DPFS.

Las fracciones de glicerol de los fosfolípidos se esterifican principalmente con ácidos grasos de cadena larga (C₁₄-C₂₀), que a su vez pueden ser saturados (por ejemplo ácido mirístico, palmítico y esteárico), monoinsaturados (por ejemplo ácido oleico) o poliinsaturados (por ejemplo ácido linoleico y araquidónico).

Se conocen los fosfolípidos que contienen como residuos tipificadores fracciones neutras o zwitter-iónicas como glicerol (FG), inositol (FI) y serina (FS) como fosfolípidos ácidos. Otros ejemplos de fosfolípidos ácidos son DPFG, POFG y DPFS.

Normalmente, se administran tensioactivos a los bebés prematuros en forma de suspensiones acuosas mediante instilación en los pulmones a través de la tráquea. Se pueden administrar también a adultos aquejados por varias patologías que involucren una insuficiencia pulmonar severa como síndrome disneico agudo en el adulto (SDAA). Para alcanzar propiedades óptimas desde el punto de vista biofísico y farmacológico/terapéutico, una preparación de tensioactivos debería: i) reducir eficazmente la tensión superficial; ii) presentar una buena velocidad de dispersión; iii) presentar una baja viscosidad para que pueda prepararse una suspensión concentrada en un medio acuoso con óptimas propiedades de administración y distribución a nivel alveolar, al ser administrada en pequeñas cantidades mediante instilación intratraqueal. La capacidad de los tensioactivos de reducir la tensión superficial, así como también otros parámetros como la velocidad de dispersión, puede evaluarse in vitro a través de la utilización de varios métodos, por ejemplo, el "método de la burbuja cautiva" según lo descrito en Schurch, S., Bachofen, H. Goerke, J., Possmayer, H. (1989) "A captive bubble method reproduces the in situ behaviour of lung surfactant monolayers" J. Appl. Physiol., 67: 2389-2396.

Uno de los componentes lipídicos más importantes de las preparaciones de tensioactivos es la 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPFC) ya que forma una película monomolecular en la interfaz aire-líquido durante la compresión, probablemente al someterse a una transición de fase (solidificación) durante compresión superficial, estabilizando así un sistema de alvéolos con diferentes tamaños.

En general, se reconoce también que los fosfolípidos ácidos son de suma importancia para alcanzar una buena actividad ya que favorecen la dispersión de la DPFC.

Por otra parte, las altas concentraciones de un FL saturado como la DPFC pueden afectar otras propiedades de la suspensión lipídica, como la viscosidad de la preparación.

La posibilidad de preparar una suspensión concentrada en pequeñas cantidades es una característica de particular importancia para la administración de tensioactivos a recién nacidos de bajo peso mediante instilación endotraqueal.

Los tensioactivos naturales modificados disponibles para uso terapéutico tienen una concentración comprendida generalmente entre 25 y 50 mg/ml. Sólo uno de ellos, "Curosurf ®", se encuentra disponible a una concentración superior, esto es 80 mg/ml.

Las preparaciones de tensioactivos obtenidas de tejidos animales presentan, de todos modos, algunos inconvenientes, como su disponibilidad en cantidades limitadas, la complejidad de la producción y los procesos de esterilización, y los significativos costos de producción: consecuentemente, se han realizado muchos esfuerzos para preparar los tensioactivos sintéticos.

Según Wilson (Expert Opin Pharmacother 2001, 2, 1479-1493), los tensioactivos sintéticos se dividen en:

tensioactivos "artificiales" desprovistos de proteínas de tensioactivos, compuestos simplemente por mezclas de compuestos sintéticos, fundamentalmente fosfolípidos y otros lípidos que se formulan para imitar la composición lipídica y el comportamiento del tensioactivo natural; y

tensioactivos "reconstituidos" que son tensioactivos artificiales a los que se les han añadido proteínas de tensioactivos aisladas de animales o fabricadas a través de tecnología recombinante, como los descritos en el documento WO 95/32992, o análogos de proteínas de tensioactivos sintéticos como los descritos en los documentos WO 89/06657, WO 92/22315 y WO 00/47623.

El desarrollo de tensioactivos reconstituidos se ha centrado en gran medida en los análogos de proteínas de tensioactivos y se le ha prestado menos atención a la composición lipídica.

No hay demasiada información disponible acerca de la composición y la concentración de la mezcla de lípidos de tensioactivos sintéticos en desarrollo.

En un estudio distribuido al azar multinacional enmascarado fundamental de fase III, se administraron 5,8 ml/kg o 175 mg/kg de Surfaxin® para comparar sus propiedades con relación a Exosurf® para prevenir el SDR (Moya F. et al. Abstract n.º 2643 de the Annual Meeting de the Paediatric Academy Societies, San Francisco, 1 a 4 de mayo de 2004). De los valores obtenidos, puede extrapolarse que se administró el Surfaxin® a una concentración de 30 mg/ml.

El Surfaxin®, presentado también como tensioactivo KL4, es un tensioactivo sintético que contiene péptidos que se prepara mezclando los fosfolípidos dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPFC) y 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfoglicerol (POFG) en una proporción 3:1 en peso con ácido palmítico (AP), 15% en peso en comparación con los fosfolípidos, en un solvente orgánico.

En un estudio previo, se utilizó también a dos concentraciones: 26,6 mg/ml y 35 mg/ml expresadas como concentración de fosfolípidos (Am J Respir Crit Care Med 1996, vol. 153, pp. 404-410).

Técnica previa

En la técnica previa, aparece información acerca de la composición lipídica de tensioactivos artificiales y/o reconstituidos en los siguientes documentos:

Suzuki et al. (Eur J Respir Dis...

1. Una mezcla de lípidos para preparar un tensioactivo sintético; estando dicha mezcla de lípidos compuesta principalmente de:

al menos un 95% en peso de fosfolípidos; comprendiendo estos fosfolípidos:

1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPFC) en una cantidad de al menos un 40% en peso, fosfolípidos poliinsaturados en una cantidad superior a un 10% en peso y fosfolípidos saturados o monoinsaturados ácidos en una cantidad superior a un 10% en peso;

estando todas las cantidades calculadas sobre el peso total de la mezcla de lípidos.

2. Una mezcla de lípidos según la reivindicación 1 que contiene además un lípido neutro en una cantidad de hasta un 5% en peso del peso total de la mezcla de lípidos.

3. Una mezcla de lípidos según la reivindicación 2 en la que el lípido neutro se selecciona del grupo compuesto por triacilglicerales, colesterol, ésteres de colesterol y ácidos grasos.

4. Una mezcla de lípidos según las reivindicaciones 1 a 3 en la que la cantidad de DPFC está comprendida entre un 40% y un 65% en peso.

5. Una mezcla de lípidos según la reivindicación 4 en la que la cantidad de DPFC está comprendida entre un 45% y un 55% en peso.

6. Una mezcla de lípidos según cualquiera de las reivindicaciones precedentes en la que la cantidad de fosfolípido poliinsaturado es superior a un 20% en peso.

7. Una mezcla de lípidos según la reivindicación 6 en la que la cantidad de fosfolípido poliinsaturado está comprendida entre un 30% y un 40% en peso.

8. Una mezcla de lípidos según cualquiera de las reivindicaciones precedentes en la que la cantidad de fosfolípidos ácidos está comprendida entre un 15% y un 30% en peso.

9. Una mezcla de lípidos según cualquiera de las reivindicaciones precedentes en la que el fosfolípido poliinsaturado se selecciona del grupo compuesto por 1-palmitoil-2-linoleil-sn-glicero-3-fosfocolina (PLFC), 1-palmitoil-2-araquidonoil-sn-glicero-3-fosfocolina (PAFC) y 1-estearoil-2-araquidonoil-sn-glicero-3-fosfocolina (EAFC), fosfatidiletanolamina aislada del huevo (FE del huevo) o una mezcla de fosfolípidos obtenida por aislamiento hepático (FL hepático).

10. Una mezcla de lípidos, según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el fosfolípido ácido se selecciona del grupo compuesto por 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoglicerol (DPFG), 1-palmitoil-2-oleil-sn-glicero-3-fosfoglicerol (POFG), 1,2-dioleil-sn-glicero-3-fosfoglicerol (DOFG), 1-palmitoil-2-oleil-sn-glicero-3-fosfocolina (POFC) y 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfo-L-serina (DPFS).

11. Una mezcla de lípidos según la reivindicación 10 en la que el fosfolípido ácido se selecciona de DPFG, POFG y una mezcla de las mismas.

12. Una mezcla de lípidos según las reivindicaciones 1 a 11 en la que la proporción entre fosfolípidos saturados e insaturados (monoinsaturados y poliinsaturados) está comprendida entre 65:35 y 40:60 en peso.

13. Una mezcla de lípidos según las reivindicaciones 1 a 11 en la que la proporción entre los fosfolípidos ácidos y los otros fosfolípidos está comprendida entre 10:90 y 30:70 en peso.

14. Un tensioactivo reconstituido que comprende una mezcla de lípidos de las reivindicaciones 1 a 13 en combinación con una o más proteínas de tensioactivos seleccionadas entre SP-A, SP-B, SP-C, SP-D, sus análogos sintéticos o recombinantes.

15. Un tensioactivo reconstituido según la reivindicación 14 en el que la proteína de tensioactivo está presente en una cantidad de alrededor de un 0,1% a un 5% en peso de la mezcla total.

16. Un tensioactivo reconstituido según las reivindicaciones 14 y 15 en el que la proteína de tensioactivo es un análogo sintético o recombinante de SP-C de fórmula general (I), según el código de aminoácidos de una letra:

(I)F_eG_fIPZZPVHLKR(X_aB)_n(X_bB)_n(X_cB)_mX_dGALLBoxGL

caracterizado por lo siguiente:

X es un aminoácido seleccionado del grupo compuesto por I, L y nL (norleucina);

B es un aminoácido seleccionado del grupo compuesto por K, I, W, F, Y y ornitina;

Z es S opcionalmente sustituido con grupos acilo que contienen de 12 a 22 átomos de carbono enlazados a la cadena lateral a través de un enlace de éster;

O es un aminoácido seleccionado del grupo compuesto por M, I, L, nL;

a es un número entero de 1 a 19;

b es un número entero de 1 a 19;

c es un número entero de 1 a 21;

d es un número entero de 0 a 20;

e es 0 ó 1;

f es 0 ó 1;

n es 0 ó 1;

m es 0 ó 1;

donde

- n+m =q 0;

- f > e,

- (XaB)n(XbB)n(XcB)mXd es una secuencia que tiene un máximo de 22 aminoácidos, preferentemente de 10 a 22.

17. Un tensioactivo reconstituido según la reivindicación 16 en el que el análogo de SP-C tiene la fórmula (II):

(II)IPSSPVHLKRLBLLLLLLLLILLLILGALLBoxGL

en la que

B es un aminoácido seleccionado del grupo compuesto por K, W, F, Y y ornitina; y

O es un aminoácido seleccionado del grupo compuesto por M, I, L y nL.

18. Un tensioactivo reconstituido según la reivindicación 17 en el que el análogo de SP-C tiene la siguiente composición de aminoácidos:

IPSSPVHLKRLKLLLLLLLLILLLILGALLMGL

19. Una formulación farmacéutica que comprende un tensioactivo reconstituido de las reivindicaciones 14 a 18.

20. Una formulación farmacéutica según la reivindicación 19 en forma de suspensión en una solución acuosa de cloruro de sodio al 0,9%, siendo la concentración de tensioactivo (expresada como contenido de fosfolípidos) superior a 30 mg/ml.

21. Una formulación farmacéutica según la reivindicación 20 en la que la concentración de tensioactivo es superior a 40 mg/ml.

22. Una formulación farmacéutica según la reivindicación 21 en la que la concentración de tensioactivo es superior a 50 mg/ml.

23. Una formulación farmacéutica según la reivindicación 22 en la que la concentración de tensioactivo está comprendida entre 50 mg/ml y 80 mg/ml.

24. Una formulación farmacéutica según las reivindicaciones 19 a 23 caracterizada por una viscosidad comprendida entre 5 y 20 mPa•s (centipoises).

25. Una formulación farmacéutica según la reivindicación 24 caracterizada por una viscosidad comprendida entre 6 y 15 mPa•s (centipoises).