Procedimiento para determinar poder antioxidante en agua mineromedicinal.

Se ha desarrollado un procedimiento para determinar el poder antioxidante en aguas Minero-medicinales (M-m). Estas aguas son conocidas por sus virtudes terapéuticas sobre ciertas enfermedades crónicas e inflamatorias. Además, tienen efectos revitalizadores sobre células y tejidos, contribuyendo a la reparación de la piel, reactivando el metabolismo, eliminando toxinas por sudoración y facilitando la diuresis, atenuando las afecciones articulares como procesos reumáticos y postoperatorios del aparato locomotor y controlando el estrés, en definitiva, mejorando la calidad de vida. A pesar de que se han desarrollado multitud de métodos para determinar el poder antioxidante de alimentos y bebidas, lamentablemente la mayoría de ellos se basan en la detección de compuestos fenólicos y otros componentes antioxidantes que no existen en el agua, y además muchos de ellos han sido diseñados para aplicarse en medios lipídicos, lo que hacía imposible su determinación en el agua

Procedimiento para determinar poder antioxidante en agua mineromedicinal.

Sector de la técnica

- Sector según el área de la técnica: farmacéutico, alimentación, bebidas

- Sector según el área de aplicación de la invención: determinación del poder antioxidante de aguas minero-medicinales de aplicación en hidrología médica

Estado de la técnica

El oxígeno está asociado a las condiciones de vida aerobia (Davis, J. Kelvin (1995). Oxidative stress: the paradox of aerobic life. Biochem. Soc. Symp. 61:1-31) y representa la fuerza motriz para el mantenimiento del metabolismo y viabilidad celular, al mismo tiempo que entraña un peligro potencial debido a que es responsable de la formación de radicales libres (RL) y especies reactivas de oxígeno (ROS). Concentraciones excesivas de RL y ROS tienen serios efectos adversos sobre los seres vivos, pudiendo producirse la peroxidación de las membranas lipídicas, la hidroxilación de las bases de los ácidos nucléicos y la oxidación de los grupos sulfidrilo y otros puntos sensibles de las proteínas.

La generación de estas sustancias prooxidantes se encuentra controlada mediante mecanismos celulares de defensa antioxidantes, reductores o secuestrantes, que aparecen distribuidos de forma estratégica en diferentes orgánulos subcelulares con objeto de minimizar el daño que se produciría por un exceso de RL y ROS. Este mecanismo de defensa antioxidante está compuesto por antioxidantes enzimáticos, entre los que se encuentran superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y glutation peroxidasa (GPx), y antioxidantes no enzimáticos, entre los que se encuentran las vitaminas A, C y E. No obstante, cuando los mecanismos de defensa antioxidante llegan a ser insuficientes para contrarrestar la excesiva producción de RL y ROS se originan alteraciones celulares que van a conducir a una situación de estrés oxidativo.

En definitiva, los antioxidantes tanto endógenos como aquellos que se incorporan en nuestro organismo en forma de alimentos, especialmente frutas y verduras, se encargan de contrarrestar el potencial citotóxico de los RL disminuyendo la reactividad de éstos al desproveerlos del electrón desapareado y transformarlos así a especies más estables y menos reactivas (Fridowich I. (1978). The biology of oxygen radicals. Science 201, 875-880; Halliwell B, Gutteridge JMC. (1989) Free Radicals in Biology and Medicine. Oxford University Press. New York.; Cadenas, E. (1989) Biochemistry of oxygen toxicity. Ann. Rev. Biochem. 58, 79-110.; Sáez GT, Bannister W, Bannister JV. (1990) Free radicals and thiol compounds. The role of glutathione agaisnt free radical toxicity. In: CRC handbook of physiologycal functions of glutathione. (Viña, J. ed.) CRC Press Inc. Florida. pp 237-254.). Numerosos estudios han mostrado que el consumo de antioxidantes puede reducir la incidencia de ciertas patologías y mejorar las perturbaciones ocasionadas en el organismo por el paso de los años (envejecimiento), de ahí la importancia del estudio del poder antioxidante de los alimentos (especialmente frutas y verduras) y las bebidas (zumos, vinos, cerveza, té, café, etc) y del agua.

Basados en esta capacidad antioxidante se han desarrollado distintos métodos de evaluación de la que se denomina actividad antioxidante global, generalmente basados en la evaluación de la capacidad de captura de radicales libres o en la evaluación de su capacidad reductora. Desafortunadamente muchos de estos métodos han sido desarrollados para aplicarse en medios lipídicos y, por tanto, no son adecuados para otros tipos de productos.

Entre la metodología utilizada para determinar actividad antioxidante total se pueden citar:

a) Ensayo TRAP (del inglés total radical-trapping parameter Wayner DDM, Burton GW, Ingold K. (1985). Quantitative measure of the total, peroxyl radical-trapping capacity of human blood plasmas by controlled peroxidation. FEBS Lett. 187, 33-37.). Actualmente casi no se emplea.

b) Captura del anión superóxido (Kanner J, German JB. (1987). Initiation of lipid peroxidation in biological systems. Crit. Rev Food Sci Nutr. 25: 317-364.). No se ha encontrado buena correlación con la capacidad preventiva de la oxidación lipídica.

c) Método del radical 2,2-diphenil-1-picrilhidracil (DPPH) (Kaneda H, Kobayashi N, Furusho S, Sahara H, Koshino S. (1995). Reducing activity and flavor stability of beer. Master Brew. Assoc. Am., Tech. Q. 32: 90-94.). Limitado por su reproducibilidad inter-ensayos.

d) Ensayo FRAP, (del inglés ferric-reducing antioxidant power), (Benzie IFF, Strain H. (1996). The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of "antioxidant power": the FRAP assay. Analytical Biochemistry. 239: 70-76). Mide la capacidad de reducción que no refleja necesariamente la actividad antioxidante.

e) Método ORAC, (del inglés oxygen radical absorbance capacity) (Cao G, Sofic E, Prior RL. (1997). Antioxidant and prooxidant behavior of flavonoids: Structure-activity relationships. Free Radicals Biol. Med. 22: 749-760.) Cada antioxidante analizado presenta comportamientos muy dispares.

f) Método del 3-etilbenzotiazoline-6 sulfonato (ABTS) (Re R,. Pellegrini N, Proteggente A., Pannala A, Yang M, Rice-Evans C. (1999). Antioxidant activity applying and improved ABTS radical cation decolorization assay. Free Radical Biology & Medicine. 26 (9/10): 1231-1237). La capacidad de captura de radicales libres en este método no es un reflejo de su verdadera actividad antioxidante.

g) Método del N,N-dimetil-p-fenilendiamina (DMPD) (Fogliano V, Verde V, Randazzo G, Ritieni A. (1999). Method for measuring antioxidant activity and its application to monitoring the antioxidant capacity of wines. J. Agric. Food Chem. Vol 47, 3: 1935-1940.). Método con alta reproducibilidad inter-ensayo, útil para medios no lipídicos.

La información que relaciona a los antioxidantes con una buena salud es ya conocida y manejada por un amplio sector de la población, que se preocupa por adquirir alimentos con alto contenido de antioxidantes. El efecto beneficioso de los alimentos vegetales, frutas y bebidas se atribuye principalmente a sustancias con actividad antioxidante, como los compuestos polifenólicos, el ácido ascórbico (vitamina C), los carotenoides y la vitamina E (Acuña UM, Atha DE, Ma J, Nee MHY, Kenelly EJ. (2002) "Antioxidant Capacities of Ten Edible North Americans Plants", Phytother. Res. 16:63-65, Baolu Z. (2001) "Free Radical Reaction of Green Tea Polyphenols". En Micronutrients and Health, AOCS. Press, Champaign, Illinois, 60-73, Rice-Evans CA, Miller NJ. (1996) "Antioxidant activities of flavomoids as bioactive components of foods" Biochem. Soc. Trans. 20:790-795). Se ha sugerido que estas sustancias aumentan la defensa antioxidante del organismo contra el "estrés oxidativo" responsable de diferentes tipos de daño celular.

Las aguas Minero-medicinales (M-m) son conocidas por sus virtudes terapéuticas sobre ciertas enfermedades crónicas e inflamatorias. Además, tienen efectos revitalizadores sobre células y tejidos, contribuyendo a la reparación de la piel, reactivando el metabolismo, eliminando toxinas por sudoración y facilitando la diuresis, atenuando las afecciones articulares como procesos reumáticos y postoperatorios del aparato locomotor y controlando el estrés, en definitiva, mejorando la calidad de vida.

Los efectos antioxidantes de determinadas aguas minero-medicinales ricas en azufre y las técnicas hidrológicas que con ellas se prescriben, abren nuevas vías terapéuticas para tratar la inflamación, procesos degenerativos y el propio proceso natural del envejecimiento. Como ejemplos de estudios clínicos se puede citar el efecto de las aguas M-m sulfuradas o de la talasoterapia sobre las faringitis crónicas (Barbieri M, Mora F, Melloni F, Cordone MP, Perottino F, Mora R. Effets des eaux sulfureuses sur les pharyngites chroniques. Revue de la FMF. 5 juillet 2002), ciertas afecciones ORL y pulmonares Suskovic S, Hull Z, Mrksic V, Raspor T. Plucne Bolesti. Efficacy of the inhalation of warm mineral water from Moravci well MT-6 in patients with chronic obstructive lung disease. 1991;43(1-2):109-112 (Kurabayashi H, Kubota K, Machida I, Tamura K, Take H, Shirakura T. Effective physical therapy for chronic obstructive pulmonary disease. Pilot study of exercise in hot spring water. Am J Phys Med Rehabil. 1997;76(3):204-207, Tanizaki Y, Kitani H, Okazaki M, Mifune T, Mitsunobu F, Honke N. Arerugi. Clinical effects of complex spa therapy on patients with steroid-dependent intractable asthma (SDIA). 1993;42(3Pt):219-227, Abramo A, Pollastrini L, Cristalli G....

1. Procedimiento para determinar poder antioxidante en agua mineromedicinal caracterizado por comprender los siguientes pasos

2. Procedimiento para determinar poder antioxidante en agua mineromedicinal según la reivindicación 1 caracterizado por elaborar la curva patrón con 2mM de ácido úrico con los siguientes soluciones decrecientes con diferentes concentraciones de ácido úrico (2,0; 1,0; 0,5; 0,25; 0,125 y 0,063 mM).

3. Procedimiento para determinar poder antioxidante en agua mineromedicinal según las reivindicaciones 1 y 2 caracterizado por elaborar utilizar el reactivo R1 en proporción 4/5.

4. Procedimiento para determinar poder antioxidante en agua mineromedicinal según las reivindicaciones 1 a 3 caracterizado por elaborar utilizar el reactivo R1 en proporción 4/5 con 200 µl de muestra más 50 µl de R1, utilizar 200 µl de la solución resultante añadirle 50 µl del reactivo 2, esperar 3 minutos y añadirle 50 µl de la solución stop.