Uso de un compuesto proteico derivado de la glicoproteína (gG) de HSV para la elaboración de una composición farmacéutica útil para la inducción de migración celular mediada por quimioquinas.

La invención describe el uso de un compuesto proteico derivado de la glicoproteína (gG) de HSV (HSV-1 y HSV-2) inductor de la migración celular mediada por quimioquina para la elaboración de un medicamento o composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad o desorden causada por un déficit de la migración celular, preferentemente del sistema inmune. Además, forman parte de la invención composiciones terapéuticas que comprenden dichos compuestos y sus aplicaciones terapéuticas

Uso de un compuesto proteico derivado de la glicoproteína (gG) de HSV para la elaboración de una composición farmacéutica útil para la inducción de migración celular mediada por quimioquinas.

Sector de la técnica

Biomedicina y biotecnología. Desarrollo de principios terapéuticos activos. Desarrollo de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de enfermedades humanas que cursan con alteraciones de la migración de células del sistema inmune.

Estado de la técnica

Durante la evolución, los virus han desarrollado numerosas estrategias para modular el sistema inmune. Entre ellas se encuentra la de inhibir la función de las quimioquinas. Las quimioquinas son una familia de citoquinas básicas de 8-10 kDa que inducen la migración de leucocitos y la infiltración de tejidos infectados o dañados (Baggiolini, M. (1998) Chemokines and leukocyte traffic. Nature, 392: 565-568) jugando un papel fundamental en la defensa contra patógenos y en las enfermedades inflamatorias. Las quimioquinas se localizan en la superficie celular mediante su interacción con glicosaminoglicanos (GAGs), interacción necesaria para la presentación correcta de las quimioquinas a los leucocitos y su función in vivo (Cinamon, G., Shinder, V. and Alon, R. (2001) Shear forces promote lymphocyte migration across vascular endothelium bearing apical chemokines. Nat. Immunol. 2: 515-522; Proudfoot, A.E., Handel, T.M., Johnson, Z., Lau, E.K., LiWang, P., Clark-Lewis, I., Borlat, F., Wells, T.N., and Kosco-Vilbois, M.H. (2003) Glycosaminoglycan binding and oligomerization are essential for the in vivo activity of certain chemokines. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100: 1885-1890; Rot, A. (1992) Endothelial cell binding of NAP-1/IL-8: role in neutrophil emigration. Immunol. Today, 13: 291-294). El sistema de las quimioquinas es complejo, con más de 50 quimioquinas humanas identificadas clasificadas en cuatro clases (C, CC, CXC y CX3C) y alrededor de 20 receptores. El papel crítico de las quimioquinas en la defensa anti-viral y en la respuesta inmune en general se refleja en el descubrimiento de muchos mecanismos virales para modular la actividad de las quimioquinas (Alcami A. (2003). Viral mimicry of cytokines, chemokines and their receptors. Nat. Rev. Immunol., 3: 36-50; Alcami, A., Symons, J.A., Collins, P.D., Williams, T.J. and Smith, G.L. (1998) Blockade of chemokine activity by a soluble chemokine binding protein from vaccinia virus. J. Immunol., 160: 624-633; Lalani, A.S., Barrett, J.W. and McFadden, G. (2000) Modulating chemokines: more lessons from viruses. Immunol. Today, 21: 100-106; Lalani, A.S., Graham, K., Mossman, K., Rajarathnam, K., Clark-Lewis, I., Kelvin, D. and McFadden, G. (1997) The purified myxoma virus gamma interferon receptor homolog M-T7 interacts with the heparin-binding domains of chemokines. J. Virol. 71: 4356-4363; Murphy, P.M. (2001) Viral exploitation and subversion of the immune system through chemokine mimicry. Nat. Immunol., 2: 116-122; van Berkel, V., Barrett, J., Tiffany, H.L., Fremont, D.H., Murphy, P.M., McFadden, G., Speck, S.H. and Virgin, H.I. (2000) Identification of a gammaherpesvirus selective chemokine binding protein that inhibits chemokine action. J. Virol., 74: 6741-6747). Tanto poxviruses como herpesviruses codifican para proteínas secretadas con capacidad de unión e inhibición de las quimioquinas (viral chemokine-binding protein, vCKBP). Las vCKBPs no poseen homología de secuencia con los receptores celulares de quimioquinas o entre sí, por lo que cada una representa una nueva estructura capaz de unir quimioquinas (Lalani, A.S., Barrett, J.W. and McFadden, G. (2000) Modulating chemokines: more lessons from viruses. Immunol. Today, 21: 100-106; Murphy, P.M. (2001) Viral exploitation and subversion of the immune system through chemokine mimicry. Nat. Immunol., 2: 116-122).

La glicoproteína G (gG) presente en algunos herpesvirus alfa tiene esa capacidad (Bryant, N.A., Davis-Poynter, N., Vanderplasschen, A., and Alcami, A. (2003) Glycoprotein G isoforms from some alphaherpesviruses function as broad-spectrum chemokine binding proteins. EMBO J., 22: 833-846; Costes B, Ruiz-Arguello MB, Bryant NA, Alcami A, Vanderplasschen A. (2005) Both soluble and membrane-anchored forms of Felid herpesvirus 1 glycoprotein G function as a broad-spectrum chemokine-binding protein. J. Gen. Virol. 86: 3209-3214). Los miembros de la subfamilia herpesvirus alpha tienen un rango de hospedador variable y la capacidad de establecer infecciones latentes de forma primaria pero no exclusiva en ganglios sensoriales (Roizman, B. and Pellet, P.E. (2001) The family herpesviridae: and introduction. In Knipe, D.M. and Howley, P.M. (eds.), Fields Virology. Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia, Vol. 2, pp. 2381-2397). Esta subfamilia incluye patógenos animales como los herpesvirus equino 1 y 3 (EHV-1 y EHV-3) y los herpesvirus bovino 1 y 5 (BHV-1 y BHV-5) y patógenos humanos como HSV-1 y HSV-2, que replican en mucosa oral y genital y el virus varicela zoster (VZV). Algunas de las glicoproteínas de los herpesvirus alfa presentes en la partícula viral juegan un papel fundamental en la morfogénesis viral, unión a la célula y tropismo celular. La función de la glicoproteína G (gG), sin embargo, se desconocía hasta que se descubrió que la gG codificada por los herpesvirus alfa constituye una nueva familia de proteínas virales con capacidad de unión a quimioquinas (Bryant, N.A., Davis-Poynter, N., Vanderplasschen, A., and Alcami, A. (2003) Glycoprotein G isoforms from some alphaherpesviruses function as broad-spectrum chemokine binding proteins. EMBO J., 22: 833-846). La gG de EHV-1, EHV-3, BHV-1 y BHV-5 tiene actividad de unión a un amplio abanico de quimioquinas con alta afinidad, inhibe la interacción de quimioquinas con los receptores celulares y su actividad de inducir migración celular, a pesar de carecer de similitud de secuencia con los receptores de quimioquinas celulares. Debido a que las quimioquinas juegan un papel crítico en la activación de la respuesta inflamatoria, induciendo la migración de las células inmunes a los tejidos infectados o dañados, la capacidad de gG de inhibir quimioquinas postuló el papel antiinflamatorio de la gG. Sin embargo, no se observó tal actividad en la gG de HSV-1 y HSV-2 -que tiene muy baja similitud de secuencia con las gG de los virus equinos y bovinos- con las quimioquinas usadas en esta invención (CCL1, CCL2, CCL11, CCL17, CCL20, CXCL1, CXCL10, CXCL21, CX3CL1 (ver más adelante en la presente invención; Bryant et al., 2003). En este sentido, recientemente se ha demostrado que la gG del herpesvirus felino es capaz de unir quimimoquinas (B. Costes, M. B. Ruiz-Argüello, N. A. Bryant, A. Alcami and A. Vanderplasschen. 2005. Both soluble and membrane-anchored forms of feline herpesvirus 1 glycoprotein G function as a broad spectrum chemokine binding protein. J. Gen. Virol. 86, 3209-3214).

Tanto HSV-1 como HSV-2 son importantes patógenos humanos. HSV-1 infecta y replica, por lo general, en la mucosa oro-labial y ocular. HSV-2 replica en la mucosa genital. Los virus herpes simplex 1 y 2 (HSV-1 y HSV-2) son patógenos humanos con una alta prevalencia en la población, de tal forma que HSV-1 en adultos se encuentra entre el 60 y el 90% dependiendo de la zona geográfica del mundo. La reactivación de ambos virus ocasiona la producción de partículas virales con la aparición de lesiones que tienen un gran impacto clínico. HSV-1 es el causante de queratitis en la córnea que puede ocasionar ceguera, meningitis y es la principal causa viral de encefalitis debido a su carácter neurotrópico. Tanto HSV-1 como HSV-2 pueden causar encefalitis si la infección tiene lugar en sistema nervioso central. La encefalitis herpética es un proceso encefálico focal localizado en las zonas frontotemporal y parietal del cerebro. La encefalitis subaguda asociada con HSV ha sido identificada en el 2% de los casos estudiados en pacientes con síndrome de la inmunodeficiencia adquirida (SIDA). HSV supone un riesgo para los neonatos ya que la infección durante el tercer trimestre de gestación y/o el parto puede dar lugar a enfermedad diseminada, fallo de múltiples órganos, incluyendo el sistema nervioso central, y muerte del feto o neonato. En ausencia de una terapia antiviral específica la mortalidad supera el 80% en la enfermedad diseminada y el 50% en aquellos pacientes que presentan síntomas únicamente en el CNS. La mayoría de los recién nacidos infectados desarrolla trastornos neurológicos. Un nuevo aspecto de la patología de HSV que ha adquirido especial relevancia en los últimos años es la asociación de infecciones de HSV con enfermedades neurodegenerativas...

1. Uso de un compuesto proteico derivado de la glicoproteína (gG) de HSV perteneciente al siguiente grupo: la proteína gG-1s del HSV-1 (secuencia de aminoácidos SEQ ID NO2) y la proteína gG-2s del HSV-2 (secuencia de aminoácidos SEQ ID NO4), para la elaboración de un medicamento o composición farmacéutica útil para la inducción de migración celular mediada por quimioquinas.

2. Secuencia de nucleótidos útil para la expresión de un péptido caracterizada porque es codificante de un fragmento extracelular de la proteína gG de HSV-1 constituido por la SEQ ID NO1, que codifica para la forma gG-1s del HSV-1 (SEQ ID NO2).

3. Secuencia de nucleótidos útil para la expresión de un péptido caracterizada porque es codificante de un fragmento extracelular de la proteína gG de HSV-2 constituido por la SEQ ID NO3, que codifica para la forma gG-2s del HSV-2 (SEQ ID NO4).

4. Vector de expresión recombinante útil para la expresión de un péptido caracterizado porque comprende una secuencia de nucleótidos según las reivindicaciones 2 y 3.

5. Célula transformada o transfectada útil para la producción de un péptido caracterizada porque comprende una secuencia de nucleótidos según las reivindicaciones 2 y 3 ó un vector según la reivindicación 4.

6. Proteína derivada o fragmento de las gG de HSV, ya sean del tipo HSV-1 o HSV-2, útil como inductora de la migración celular mediada por quimioquinas caracterizada porque pertenece al siguiente grupo: SEQ ID NO2, forma proteica gG-1s del HSV-1, y SEQ ID NO4, forma proteica gG-2s del HSV-2.

7. Composición farmacéutica o medicamento útil para la inducción de migración celular mediada por quimioquinas caracterizada porque comprende una secuencia de aminoácidos perteneciente al siguiente grupo: secuencia de aminoácidos constituida por la SEQ ID NO2, que codifica para la forma gG-1s del HSV-1 y secuencia de aminoácidos constituida por la SEQ ID NO4, que codifica para la forma gG-2s del HSV-2, en cantidad terapéuticamente efectiva junto con, opcionalmente, uno o más adyuvantes y/o vehículos farmacéuticamente aceptables.

8. Uso de la composición farmacéutica según la reivindicación 7 en un método de tratamiento o profilaxis de un mamífero, preferentemente un ser humano, afectado por una enfermedad, desorden o patología que cursa con alteraciones en la migración celular mediada por quimioquinas consistente en la administración de dicha composición terapéutica en dosis adecuada que permita la recuperación de la capacidad de migración celular, preferentemente de células del sistema inmune.

9. Uso de la composición farmacéutica según la reivindicación 8 caracterizado porque la enfermedad con alteraciones en la migración celular pertenece al siguiente grupo: cardiomiopatía isquémica, terapia post-infarto con células de la médula espinal, síndromes coronarios agudos, carcinoma, carcinoma espontáneo bronquio-alveolar o fiebre crónica Q.

10. Procedimiento de identificación de compuestos útiles para el tratamiento de infecciones provocadas por HSV caracterizado porque se utiliza una proteína perteneciente al siguiente grupo: proteína gG-1s de HSV-1 (SEQ ID NO2) y proteína gG-2s de HSV-2 (SEQ ID NO4).