Un péptido constituido por una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 13, 14, 15, 16 ó 17 en el listado de secuencias

Antígeno tumoral

Campo técnico

La presente invención se refiere en general a un nuevo antígeno tumoral, y más particularmente a un péptido que está reconocido por linfocitos T citotóxicos específicos de tumores, un polinucleótido que codifica el péptido o una cadena complementaria del mismo, un vector recombinante que contiene el polinucleótido, un transformante que contiene el vector recombinante, un método para producir el péptido, un anticuerpo contra el péptido, un compuesto que tenga cualquier interacción con éstos, y un método para cribado del compuesto, una composición farmacéutica que utiliza éstos, y un medio de análisis para la diagnosis que utiliza éstos.

Antecedentes de la técnica

El sistema inmunitario, particularmente los linfocitos T citotóxicos (que, en lo sucesivo, pueden abreviarse como CTLs) juega(n) un papel importante en la exclusión del cáncer in vivo. Una infiltración de linfocitos T citotóxicos que exhiben una actividad tóxica contra una célula tumoral ha sido detectada en el sitio del tumor de un paciente de cáncer (Arch. Surg., 126, 200-205, 1990). Un antígeno tumoral que es una molécula diana para los linfocitos T citotóxicos específicos de tumores fue descubierto por primera vez en cánceres de tipo melanoma. Una antígeno tumoral generado en una célula tumoral se descompone en la célula en un péptido (péptido del antígeno tumoral) que está constituido por 8 a 11 aminoácidos, que se fija a una molécula de antígeno leucocitario humano (HLA) que es el complejo de histocompatibilidad mayor que se presenta en la superficie de la célula tumoral.

HLA es un antígeno de la membrana celular, y se expresa en prácticamente la totalidad de las células eucariotas. HLA se clasifica principalmente como un antígeno de clase I o antígeno de clase II. El HLA reconocido junto con un péptido antigénico por los linfocitos T citotóxicos es un antígeno de clase I. Los antígenos de HLA de clase I se clasifican ulteriormente en HLA-A, B, C, etcétera. Se ha informado que HLA tiene polimorfismo genético. El alelo HLA-A24 se encuentra aproximadamente en el 60% de la población japonesa (en una mayoría, igual a 95%, el genotipo es A2402), 20% de los caucasianos, y 12% de los africanos. El alelo HLA-A2 se encuentra aproximadamente en el 40% de los japoneses, 53% de los chinos, 49% de los caucasianos del norte, 38% de los caucasianos del sur, y 23% de los africanos negros.

Un péptido antigénico tumoral capaz de fijarse al HLA tiene un motivo en su secuencia para cada tipo de HLA. Los linfocitos citotóxicos T dañan una célula tumoral por reconocimiento de un complejo constituido por el péptido antigénico del tumor y HLA. Como se utiliza en esta memoria, un antígeno tumoral significa una proteína o péptido contenido en una célula tumoral capaz de inducir un linfocito T citotóxico específico del tumor. Un péptido antigénico del tumor significa un péptido que es generado como resultado de la degradación del antígeno tumoral en una célula tumoral y puede inducir o activar los linfocitos T citotóxicos específicos del tumor por expresarse en la superficie de las células por fijación de una molécula HLA. Adicionalmente, un sitio de la secuencia de aminoácidos capaz de inducir linfocitos T citotóxicos específicos del tumor que existen en un antígeno tumoral se denomina epítope del antígeno tumoral (determinante del antígeno tumoral).

Recientemente, un gran número de genes que codifican antígenos tumorales que pueden ser reconocidos por linfocitos T citotóxicos han sido identificados a partir de cDNA de células tumorales humanas (Science, 254: 1643-1647, 1991; J. Exp. Med., 183: 1185-1192, 1996). Algunos de estos genes están implicados en proliferación celular y transformación maligna, con inclusión de HER/neu (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92: 432-436, 1995), cdk mutante (Science, 269, 1281-1284, 1995), y CASP-8 mutante (J. Exp. Med., 186: 785-793, 1997). Varios otros productos génicos tales como la familia MAGE (antígeno del melanoma) (Cancer Res., 55: 3478-3482, 1995) y SART1 (J. Exp. Med. 187: 277-288, 1998) se expresan preferentemente tanto en células malignas como en los testículos, pero no en otras células normales.

Existen también un gran número de antígenos tumorales específicos del melanoma en un melanocito normal, con inclusión de MART-1/melanA, gp100, y tirosinasa (Oncogene Res., 1: 357-374, 1987). Por consiguiente, los antígenos tumorales humanos son en su mayor parte no realmente antígenos específicos de tumor, sino más bien autoantígenos que se expresan en algunas células o tejidos normales.

Actualmente, en Europa y en los Estados Unidos, se ha desarrollado una terapia de vacuna contra el cáncer que activa los linfocitos T citotóxicos en un paciente de cáncer por administración de un péptido de antígeno tumoral, y se han comunicado los resultados de tests clínicos con respecto al antígeno tumoral específico del melanoma. Por ejemplo, se ha observado regresión del tumor en el 42% de los pacientes de melanoma que recibieron la inyección subcutánea del péptido del antígeno del melanoma gp100 e inyección intravenosa de interleuquina-2 (IL-2) (Nature Medicine, 4: 321-1998). Así, por utilización de un antígeno tumoral como vacuna, puede conseguirse un tratamiento eficaz contra el cáncer.

Sin embargo, prácticamente la totalidad de los antígenos tumorales identificados se derivan del melanoma, y solamente han sido publicados unos cuantos documentos acerca de antígenos tumorales derivados del cáncer epitelial y del adenocarcinoma, que existen con altas tasas de incidencia.

La tasa de supervivencia de 5 años debida a tres métodos de tratamiento principal conocidos para el cáncer (terapia de operación, quimioterapia, y tratamiento por irradiación) era de 41% en 1998 con respecto a todas las clases de cáncer. Sin embargo, hasta ahora es difícil aumentar la tasa de supervivencia, por lo que se desea el desarrollo de un nuevo método de tratamiento, distinto de los tres métodos de tratamiento principales arriba mencionados.

El gen lck codificante de la proteína p56^lck, que es una tirosinaquinasa de membrana de la familia src, tiene un papel esencial en el desarrollo y la función de las células T. Se ha consignado la expresión anormal del gen lck en las células del cáncer de colon y las células pequeñas del carcinoma de pulmón (Oncogene Res., 1: 357-374, 1987) y la expresión aberrante en el cáncer de colon metastásico. Sin embargo, los papeles detallados de la proteína Lck en estas células de cáncer se desconocen todavía, aunque se ha sugerido que la proteína Lck juega un papel importante en el proceso de la transformación neoplástica (Cancer Res., 58: 4660-4666, 1998).

Descripción de la invención

Considerando la situación arriba mencionada, la presente invención pretende desarrollar y proporcionar un nuevo antígeno tumoral que es reconocido por los linfocitos T citotóxicos y es útil para la inmunoterapia específica para pacientes que padecen cánceres de adenocarcinoma y/o epiteliales, tales como cáncer de colon y cáncer de pulmón.

Concretamente, el propósito de la presente invención es desarrollar y proporcionar un péptido que tiene un epítope antigénico que es reconocido por al menos linfocitos T citotóxicos restringidos por HLA-A2402 o restringidos por HLA-A2, y es codificado por el gen lck. Más detalladamente, el propósito de la presente invención es proporcionar un péptido que es reconocido por los linfocitos T citotóxicos restringidos por HLA-A2402 o restringidos por HLA-A2, un polinucleótido que codifica el péptido o una cadena complementaria del mismo, un vector recombinante que contiene el polinucleótido, un transformante que contiene el vector recombinante, un método para producir el péptido, un anticuerpo contra el péptido, un compuesto que interacciona con estas entidades y un método para cribado en busca de dicho compuesto, una composición farmacéutica que utiliza estas entidades, y un medio para la diagnosis que utiliza estas entidades.

Para resolver el problema, el inventor identificó KE4-CTL, que es un linfocito T citotóxico restringido por HLA-A2402 y específico de tumores, que son activados por reconocimiento de HLA-A24 y un péptido antigénico tumoral, y OK-CTL y GK-CTL, que son linfocitos T citotóxicos restringidos por HLA-A2 y específicos de tumores, que son activados por reconocimiento de HLA-A2 y un péptido antigénico tumoral, e identificó posteriormente un antígeno tumoral capaz de activar los linfocitos T citotóxicos específicos de tumores a...

1. Un péptido constituido por una secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 11, 12, 13, 14, 15, 16 ó 17 en el listado de secuencias.

2. Un inductor de linfocitos T citotóxicos, en donde el inductor está constituido por un péptido de acuerdo con la reivindicación 1.

3. El péptido de acuerdo con la reivindicación 1 para el tratamiento del cáncer.

4. Una vacuna contra el cáncer en la cual el agente activo está constituido por un péptido de acuerdo con la reivindicación 1.

5. Un polinucleótido que codifica un péptido de acuerdo con la reivindicación 1, o su cadena complementaria.

6. Un vector recombinante que comprende un polinucleótido que codifica un péptido de acuerdo con la reivindicación 1, o su cadena complementaria.

7. Un transformante transformado con el vector recombinante de acuerdo con la reivindicación 6.

8. Un método para producir un péptido, que comprende el paso de cultivar el transformante de acuerdo con la reivindicación 7.

9. Un anticuerpo que se obtiene a partir de un suero de un animal no humano inmunizado por péptidos de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicho anticuerpo ha sido generado contra un péptido de acuerdo con la reivindicación 1.

10. Un método de cribado para un compuesto que es capaz de aumentar la inducción o activación de linfocitos T citotóxicos por los péptidos de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el método utiliza al menos uno seleccionado del grupo constituido por un péptido de acuerdo con la reivindicación 1, el polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 5, el vector recombinante de acuerdo con la reivindicación 6, el transformante de acuerdo con la reivindicación 7, y el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 9.

11. Una composición farmacéutica que comprende, en una cantidad eficaz para el tratamiento del cáncer, al menos uno seleccionado del grupo constituido por un péptido de acuerdo con la reivindicación 1, el polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 5, el vector recombinante de acuerdo con la reivindicación 6, el transformante de acuerdo con la reivindicación 7, y el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 9.

12. Un método para fabricar un medicamento para el tratamiento del cáncer, caracterizado porque se utilizan un inductor de los linfocitos T citotóxicos de acuerdo con la reivindicación 2, la vacuna contra el cáncer de acuerdo con la reivindicación 4, o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 11.

13. Un método para ensayar un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 y/o un polinucleótido que codifica el péptido utilizando un sistema de reacción antígeno-anticuerpo, sistema de reacción enzimático o sistema de reacción PCR, en donde el método permite detectar el péptido y/o el polinucleótido en un espécimen, o determinar la cantidad del péptido y/o polinucleótido en el mismo para examen clínico.

14. Un kit de reactivos que comprende uno o más seleccionados del grupo constituido por los péptidos de acuerdo con la reivindicación 1, los polinucleótidos de acuerdo con la reivindicación 5, y el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 9.

15. Un kit de reactivos para uso en el método de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el kit de reactivos comprende uno o más seleccionados del grupo constituido por los péptidos de acuerdo con la reivindicación 1, los polinucleótidos de acuerdo con la reivindicación 5, y el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 9.