Un método para identificar un compuesto capaz de tratar un trastorno respiratorio que comprende analizar la capacidad del compuesto o agente para modular la expresión de una molécula de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en:

a) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que es al menos un 70 % idéntica a la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3; b) una molécula de ácido nucleico que comprende un fragmento de al menos 300 nucleótidos de la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3; c) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2; d) una molécula de ácido nucleico que codifica un fragmento de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2, en la que el fragmento comprende al menos 100 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO:2; y e) una molécula de ácido nucleico de SEQ ID NO:1 ó 3, o la actividad de un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en: a) un polipéptido que es codificado por una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que es al menos un 70 % idéntica a un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3, o su complemento; b) un fragmento de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2, en el que el fragmento comprende al menos 100 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO:2; y c) un polipéptido de SEQ ID NO:2, identificando así un compuesto capaz de tratar un trastorno respiratorio

Antecedentes de la Invención

Que el fosfato se asocia fuertemente a moléculas, p.ej, a una proteína, se sabe desde finales del siglo diecinueve. Desde entonces, se han encontrado diversos enlaces covalentes del fosfato a las proteínas. Los más comunes implican la esterificación de fosfato a serina, treonina y tirosina y con cantidades más pequeñas unido a lisina, arginina, histidina, ácido aspártico, ácido glutámico y cisteína. La aparición de moléculas fosforiladas, p.ej, proteínas, implica la existencia de una o varias quinasas, p.ej, proteína quinasas, capaces de fosforilar varias moléculas, p.ej, los residuos de aminoácidos en las proteínas, y también de fosfatasas, p.ej, proteína

10 fosfatasas, capaces de hidrolizar varias moléculas fosforiladas, p.ej, los residuos de aminoácidos fosforilados en las proteínas. Las proteína quinasas desempeñan papeles críticos en la regulación de cambios bioquímicos y morfológicos asociados al crecimiento y a la división celular (D'Urso et al. (1990) Science 250:786-791; Birchmeier et al. (1993) Bioessays 15:185189). Por ejemplo, se ha demostrado que estas quinasas participan en la transmisión de señales de los receptores del factor del crecimiento (Sturgill et al. (1988) Nature 344:715-718; Gomez et al. (1991) Nature 353:170-173), en el control de la entrada de células en mitosis (Nurse (1990) Nature 344:503-508; Maller (1991) Curr. Opin. Cell Biol. 3:269-275) y en la regulación del empaquetamiento de actina (Husain-Chishti et al. (1988) Nature 334:718-721). Las proteína quinasas sirven como receptores del factor de crecimiento y son transductores de señales y se han implicado en la transformación celular y en la malignidad (Hunter et al. (1992) Cell 70:375-387; Posada et al. (1992) Mol. Biol. Cell 3:583-592; Hunter et al. (1994) Cell 79:573-582). Las modificaciones en los genes de quinasa y sus productos pueden conducir a una proliferación celular desregulada, que es un distintivo del cáncer. La modulación de estos genes y sus actividades reguladoras pueden permitir el control de la proliferación y de la invasión de células tumorales.

Las proteína quinasas pueden ser divididas en diferentes grupos según la similitud de las secuencias de aminoácidos o la especificidad de los residuos de 30 tirosina o de serina/treonina. También se han descrito un pequeño número de quinasas de especificidad dual. Dentro de la amplia clasificación, las quinasas pueden ser subdivididas además en familias cuyos miembros comparten un grado más alto de identidad de la secuencia de aminoácidos del dominio catalítico y también tienen propiedades bioquímicas similares. La mayor parte de los miembros de la familia de 35 proteína quinasa también comparten rasgos estructurales fuera del dominio catalítico

de la quinasa que reflejan sus papeles celulares particulares. Éstos incluyen dominios reguladores que controlan la actividad de quinasa o la interacción con otras proteínas (Hanks et al. (1988) Science 241:42-52).

Las quinasas reguladas por señales extracelulares / proteína quinasas activadas por mitógenos (ERK/MAPK por sus siglas en inglés “extracellular signalregulated kinases/mitogen-activated protein kinases”) y las quinasas dirigidas a ciclina (CDK “cyclin-directed kinases”) representan dos grandes familias de quinasas de serina-treonina (véase Songyang et al. (1996) Mol. Cell. Biol. 16: 6486-6493). Ambos tipos de quinasas funcionan en el crecimiento celular, la división celular y la diferenciación celular como respuesta a estímulos extracelulares. Los miembros de la familia ERKMAPK son participantes críticos en las rutas intracelulares de señalización. Los activadores corriente arriba así como los componentes de ERKMAPK se fosforilan después del contacto de las células con factores de crecimiento u hormonas o como respuesta a agentes agresores celulares, por ejemplo, calor, luz ultravioleta y citoquinas inflamatorias. Estas quinasas transportan mensajes que han sido transmitidos desde la membrana plasmática al citoplasma por quinasas corriente arriba en el núcleo donde fosforilan los factores de transcripción y efectúan la modulación de la transcripción de genes (Karin et al. (1995) Curr. Biol. 5: 747-757). Los sustratos de la familia ERKMAPK incluyen c-fos, c-jun, APF2, y miembros de la

20 familia de ETS ELK1, Sap1a, y c-Ets-1 (citado en Brott et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 963-968). Las rutas de transducción de la señalización que emplean a miembros de la familia ERK/MAPK de serina/treonina quinasas están ampliamente conservadas entre eucariotas. La multiplicidad de estas rutas permite que la célula responda a estímulos extracelulares divergentes iniciando una amplia serie de respuestas en los límites desde el crecimiento celular a la apoptosis. Las rutas de ERK/MAPK consisten en un módulo de señalización nuclear principal y tres capas en donde las ERK/MAPK están reguladas por las quinasas MAPK/ERK (MEK) y las MEK, por su parte, están reguladas por quinasas de quinasa MAPK (MAPKKK). Las rutas ERK/MAPK activadas por estrés mamíferas han sido implicadas en numerosas funciones fisiológicas importantes, incluyendo el crecimiento y la proliferación celular, las respuestas inflamatorias y la apoptosis. Por ejemplo, la activación de la ruta de señalización de ERK1,2 por un factor de crecimiento mitogénico, un promotor tumoral o por la transformación suprime la expresión del gen de decorina en fibroblastos, que a su vez,

puede promover la proliferación y la migración de células normales y malignas (Laine et al. (2000) Biochem. J. 349: 19-25). Las CDK regulan las transiciones entre etapas sucesivas del ciclo celular. La actividad de estas moléculas es controlada por acontecimientos de fosforilación y por la asociación con ciclina. La actividad de las CDK está negativamente regulada por la asociación de pequeñas moléculas inhibitorias (Dynlacht (1997) Nature 389:148-152). Los objetivos de la CDK incluyen varios activadores transcripcionales tales como p110Rb, p107, y factores de transcripción, tales como p53, E2F, y ARN polimerasa II, así como varias proteínas citoesqueléticas y proteínas de señalización citoplásmica

10 (citado en Brott et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 963-968). Las proteína quinasas desempeñan papeles críticos en el crecimiento celular, en particular en la transducción de señales para la proliferación celular, diferenciación, y apoptosis. Por lo tanto, los nuevos polinucleótidos y proteínas de proteína quinasa son útiles para modular el crecimiento celular, la diferenciación y/o el desarrollo.

15 En este sentido, Baytel et al. (1998), Biochimica and Biophysica Acta, describen la clonación de un gen humano que codifica el protooncogén de Pim-2 humano y sugieren que es una serina treonina quinasa que puede estar implicada en procesos cancerosos del sistema hematopoyético y en la apoptosis. Además, Ishida et al. (2000) describen en la base de datos del EMBL, número de entrada AB042425, el

20 gen humano y la secuencia de la proteína de un homólogo del protooncogén de pim-2.

Resumen de la Invención

La presente invención está basada, en parte, en el descubrimiento de un nuevo miembro de la familia de proteína quinasa, denominado en este documento "2150" que 25 está implicado en los trastornos respiratorios. Este es un miembro de la familia de proteína quinasa que también ha sido descrito en la base de datos del EMBL con el número de entrada AB042425 como un homólogo del protooncogén pim-2. La secuencia de nucleótidos de un cADN que codifica 2150 se muestra en SEQ ID NO:1, y la secuencia de aminoácidos de un polipéptido 2150 se muestra en SEQ ID NO:2.

30 Además, la secuencia de nucleótidos de la región de codificación está representada en SEQ ID NO:3. De acuerdo con esto, los rasgos esenciales de la invención son aquellas realizaciones que se reivindican.

Breve Descripción de los Dibujos

La figura 1 representa un gráfico de la hidropatía de 2150 humana. Los residuos relativamente hidrófobos son mostrados encima de la línea horizontal de 5 puntos, y los residuos relativamente hidrófilos están debajo de la línea horizontal de puntos. Los residuos de cisteína (cys) son indicados por líneas verticales cortas justo debajo del rastro de hidropatía. Se señalan los números correspondientes a la secuencia de aminoácidos del 2150 humano. Los polipéptidos de la invención incluyen fragmentos que incluyen: todo o parte de una secuencia hidrófoba, p.ej, una secuencia 10 por encima de la línea de puntos, p.ej,...

1. Un método para identificar un compuesto capaz de tratar un trastorno respiratorio que comprende analizar la capacidad del compuesto o agente para

5 modular la expresión de una molécula de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en: a) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que es al menos un 70 % idéntica a la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3;

10 b) una molécula de ácido nucleico que comprende un fragmento de al menos 300 nucleótidos de la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3; c) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2; d) una molécula de ácido nucleico que codifica un fragmento de un polipéptido que

15 comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2, en la que el fragmento comprende al menos 100 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO:2; y e) una molécula de ácido nucleico de SEQ ID NO:1 ó 3,

o la actividad de un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en:

20

a) un polipéptido que es codificado por una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que es al menos un 70 % idéntica a un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3, o su complemento;

25 b) un fragmento de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2, en el que el fragmento comprende al menos 100 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO:2; y c) un polipéptido de SEQ ID NO:2,

30 identificando así un compuesto capaz de tratar un trastorno respiratorio.

2. Un método para identificar un sujeto que tiene un trastorno respiratorio o que está en peligro de desarrollar un trastorno respiratorio que comprende: a) poner en contacto una muestra obtenida del sujeto que comprende moléculas de ácido nucleico con una sonda de hibridación que comprende al menos 30 nucleótidos contiguos de SEQ ID NO:1 ó 3; y b) detectar la presencia de una molécula de ácido nucleico en la muestra que se

5 hibrida a la sonda;

en la que la presencia de una molécula de ácido nucleico que se hibrida a la sonda identifica a un sujeto que tiene un trastorno respiratorio o que está en peligro de desarrollar un trastorno respiratorio.

10

3. Un método para identificar a un sujeto que tiene un trastorno respiratorio o que está en peligro de desarrollar un trastorno respiratorio que comprende:

a) poner en contacto una muestra obtenida del sujeto que comprende moléculas de

15 ácido nucleico con un primer y un segundo cebador de amplificación, comprendiendo el primer cebador al menos 10 nucleótidos contiguos de SEQ ID NO:1 ó 3 y comprendiendo el segundo cebador al menos 10 nucleótidos contiguos del complemento de SEQ ID NO:1 ó 3; y b) incubar la muestra en condiciones que permitan la amplificación del ácido nucleico;

20 en el que la presencia de la amplificación de ácido nucleico en la muestra identifica a un sujeto que tiene un trastorno respiratorio o que está en peligro de desarrollar un trastorno respiratorio.

4. Un método para identificar a un sujeto que tiene un trastorno respiratorio o 25 que está en peligro de desarrollar un trastorno respiratorio que comprende:

a) poner en contacto una muestra obtenida del sujeto que comprende polipéptidos con un anticuerpo que se une expresamente a un polipéptido de SEQ ID NO:2; y b) detectar la presencia de un polipéptido en la muestra que se une al anticuerpo;

30

en el que la presencia de la unión del anticuerpo en la muestra identifica a un sujeto que tiene un trastorno respiratorio o que está en peligro de desarrollar un trastorno respiratorio.

35 5. Un método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho trastorno respiratorio es el asma.

6. El uso de un modulador seleccionado del grupo que consiste en:

a) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2, o su

5 fragmento; b) un anticuerpo que modula la actividad del polipéptido de SEQ ID NO:2; y c) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 70 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2,

10 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno respiratorio.

7. El uso de un modulador seleccionado del grupo que consiste en:

a) una molécula de ácido nucleico antisentido que modula la expresión de una

15 molécula de ácido nucleico de comprende una secuencia de nucleótidos que es al menos un 70 % idéntica a la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1 ó 3; b) es un ribozima que modula la expresión de una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que es al menos un 70 % idéntica a la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1 ó 3;

20 c) la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 ó 3, o su fragmento; d) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 70 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2,

25 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno respiratorio.

8. El uso de la reivindicación 6 ó 7, en el que dicho modulador se administra en una formulación farmacéuticamente aceptable.

30 9. El uso de la reivindicación 7, en el que dicho modulador se administra usando un vector de terapia génica.

10. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9, en el que dicho trastorno respiratorio es el asma.

11. Una composición farmacéutica para el uso en el tratamiento de un trastorno respiratorio en un sujeto, que comprende un compuesto que modula la expresión de una molécula de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en:

35

5 a) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que es al menos un 70 % idéntica a la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3; b) una molécula de ácido nucleico que comprende un fragmento de al menos 300 nucleótidos de la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3;

10 c) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2; d) una molécula de ácido nucleico que codifica un fragmento de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2, en la que el fragmento comprende al menos 100 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO:2; y

15 e) una molécula de ácido nucleico de SEQ ID NO:1 ó 3,

o la actividad de un polipéptido seleccionado del grupo que consiste en:

d) un polipéptido que es codificado por una molécula de ácido nucleico que comprende

20 una secuencia de nucleótidos que es al menos un 70 % idéntica a un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3, o su complemento; e) un fragmento de un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2, en el que el fragmento comprende al menos 100 aminoácidos contiguos

25 de SEQ ID NO:2; y f) un polipéptido de SEQ ID NO:2,

y un vehículo adecuado.

30 12. La composición farmacéutica de la reivindicación 11, en la que dicho trastorno respiratorio es el asma.

13. Un método para identificar un compuesto capaz de tratar un trastorno respiratorio según la reivindicación 1, en el que dicho método es un ensayo celular.

14. Un método para identificar un compuesto capaz de tratar un trastorno respiratorio según la reivindicación 1, en el que dicho método es un ensayo de células libres.

35

5 15. Un método para identificar un compuesto capaz de tratar un trastorno respiratorio según la reivindicación 1, en el que dicha molécula de ácido nucleico comprende una secuencia de nucleótidos que es al menos un 80 %, 90 % o 95 % idéntica a la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3.

10 16. Un método para identificar un compuesto capaz de tratar un trastorno respiratorio según la reivindicación 1, en el que dicho polipéptido es codificado por una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que es al menos un 80 %, 90 % o el 95 % idéntica a un ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO:1 o SEQ ID NO:3, o su complemento.