Un anticuerpo, que comprende una cadena pesada y una cadena ligera,

donde:

a) la cadena pesada comprende:

1) una secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 2; o

2) una secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 13; y

b) la cadena ligera comprende:

1) una secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 4; o

2) una secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 14; y donde el anticuerpo se une a un ligando de osteoprotegerina (OPGL) e inhibe la unión del OPGL a un receptor de diferenciación y activación de osteoclasto (ODAR)

Anticuerpos del OPGL.

Campo del invento

El presente invento se refiere a anticuerpos que se unen a un ligando de osteoprotegerina (OPGL). También se describen las composiciones y los métodos de tratamiento de enfermedades óseas, tales como la osteoporosis, la pérdida de hueso provocada por la artritis, la enfermedad de Paget y la osteopenia.

Antecedentes del invento

El tejido óseo sostiene el cuerpo e incluye minerales (como calcio y fósforo), una matriz de proteínas colagenosas y no colagenosas, y células. El tejido óseo vivo registra un equilibrio dinámico entre la formación ósea, denominada deposición, y la disminución ósea, denominada reabsorción. Tres tipos de células que se encuentran en los huesos (osteocitos, osteoblastos y osteoclastos) participan en este equilibrio. Los osteoblastos promueven la formación de tejido óseo, mientras que los osteoclastos están asociados con la reabsorción. La reabsorción, o la disolución de la matriz ósea y los minerales, es un proceso rápido y eficiente en comparación con la formación ósea, y puede liberar cantidades importantes de minerales de los huesos. Los osteoclastos participan en la regulación de la remodelación normal del tejido esquelético y en la reabsorción inducida por las hormonas. Por ejemplo, la reabsorción se estimula por la secreción de la hormona paratiroidea en respuesta a una reducción de las concentraciones de iones de calcio en los líquidos extracelulares. Por lo contrario, la inhibición de la reabsorción es una función de la calcitonina. Por otra parte, los metabolitos de vitamina D alteran la sensibilidad del hueso a la hormona paratiroidea y a la calcitonina.

El ligando de osteoprotegerina (OPGL), que pertenece a la familia de las citoquinas TNF, promueve la formación de osteoclastos al unirse al activador del receptor del NF-KB (RANK, también denominado receptor de diferenciación y activación de osteoclastos-ODAR, por sus siglas en inglés). La osteoprotegerina (OPG), por otra parte, inhibe la formación de osteoclastos aislando el OPGL e impidiendo la asociación del OPGL con el ODAR. De este modo, la cantidad de OPGL asociada con ODAR se correlaciona con el equilibrio entre la deposición y reabsorción óseas.

Tras la madurez esquelética, la cantidad de hueso del esqueleto refleja el equilibrio (o el desequilibrio) de la formación y reabsorción óseas. La masa ósea máxima se alcanza tras la madurez esquelética, antes de cumplir los cuarenta años. Entre los cuarenta y los cincuenta años, el equilibrio varía y domina la reabsorción ósea. La inevitable reducción de masa ósea con el paso de los años comienza antes en las mujeres que en los hombres, y se ve claramente intensificada tras la menopausia en algunas mujeres (principalmente las de ascendencia caucásica y asiática).

Por lo general, por osteopenia se entiende cualquier reducción de la masa ósea por debajo de los niveles normales. Esto se puede deber a una reducción del ritmo de síntesis ósea, a un incremento del ritmo de destrucción ósea o a ambas cosas. Una forma frecuente de osteopenia es la osteoporosis primaria, también denominada osteoporosis postmenopáusica o senil. Esta forma de osteoporosis es consecuencia de la pérdida universal de hueso con la edad y, por lo general, se debe a un incremento de la reabsorción ósea con un ritmo normal de formación ósea. Muchas mujeres de raza blanca de los Estados Unidos desarrollan una osteoporosis sintomática. Existe una relación directa entre la osteoporosis y la incidencia de las fracturas de cadera, femorales, cervicales e intertrocantéricas en las mujeres a partir de los 45 años. Los hombres mayores pueden desarrollar una osteoporosis sintomática entre los 50 y los 70 años. En determinadas circunstancias, la osteoporosis puede ser consecuencia de un aumento de los niveles o de la actividad del OPGL. Por ello, sería útil tener moléculas que puedan regular la actividad del OPGL en la osteoclastogénesis.

Se han identificado diversos factores que pueden contribuir a la osteoporosis postmenopáusica y senil. Entre ellos se incluyen la alteración de los niveles hormonales típica del envejecimiento y un consumo insuficiente de calcio atribuido al descenso de la absorción intestinal de calcio y otros minerales. Determinados tratamientos han incluido la terapia hormonal o suplementos dietéticos, en un intento de retardar el proceso. Más recientemente, han surgido los agentes antireabsortivos, como los bifosfonatos, y los moduladores selectivos de los receptores de estrógenos (SERM) para la prevención y el tratamiento de la reducción de la masa ósea. Así pues, puede resultar útil combinar estos tratamientos con moléculas que puedan regular la actividad del OPGL para el tratamiento de determinados trastornos osteopénicos.

Tsukii et al. (Biochemical and Biophysical Research Communications (1998), vol. 246, páginas 336-341) revelan un anticuerpo policlonal dirigido contra el ODF murino (= OPGL, RANKL) que resulta efectivo para inhibir la osteoclastogénesis y la reabsorción ósea in vitro. No se reveló una eficacia in vivo, es decir, un efecto prolongado (durante varias semanas).

Exposición del invento

El presente invento se define en las reivindicaciones siguientes:

En determinadas realizaciones, el invento proporciona un anticuerpo, compuesto de una cadena pesada y una cadena ligera, donde la cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 2 y la cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 4.

En determinadas realizaciones, el invento proporciona un anticuerpo, compuesto de una cadena pesada y una cadena ligera, donde la cadena pesada comprende una región variable compuesta por la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 13 y donde la cadena ligera comprende una región variable compuesta por la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 14.

En determinadas realizaciones, el invento proporciona un anticuerpo, compuesto de una cadena pesada y una cadena ligera, donde la cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 2 o un fragmento de la misma.

En determinadas realizaciones, el invento proporciona un anticuerpo, compuesto de una cadena pesada y una cadena ligera, donde la cadena pesada comprende una región variable compuesta por la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 13 o un fragmento de la misma.

En determinadas realizaciones, el invento proporciona un anticuerpo, compuesto de una cadena pesada y una cadena ligera, donde la cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 4 o un fragmento de la misma.

En determinadas realizaciones, el invento proporciona un anticuerpo, compuesto de una cadena pesada y una cadena ligera, donde la cadena ligera comprende una región variable compuesta por la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 14 o un fragmento de la misma.

En determinadas realizaciones, el invento proporciona un anticuerpo, compuesto de una cadena pesada y una cadena ligera, (a) donde la cadena pesada comprende una primera región variable y donde la primera región variable comprende una secuencia que se corresponde, al menos en un 90%, con la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 13, y (b) donde la cadena ligera comprende una segunda región variable y donde la segunda región variable comprende una secuencia que se corresponde, al menos en un 90%, con la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 14, y (c) donde el anticuerpo interactúa con un ligando de osteoprotegerina (OPGL).

En determinadas realizaciones, la primera región variable comprende una secuencia que se corresponde, al menos en un 95%, con la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 13, y la segunda región variable comprende una secuencia que se corresponde, al menos en un 95%, con la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 14.

En determinadas realizaciones, la primera región variable comprende una secuencia que se corresponde, al menos en un 99%, con la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 13. 13, y la segunda región variable comprende una secuencia que se corresponde, al menos en un 99%, con la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 14.

En determinadas realizaciones, el hallazgo ofrece una cadena pesada, compuesta de la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO:2 o un fragmento de la misma. En determinadas realizaciones, el invento proporciona una cadena pesada, compuesta de una región variable y una región...

1. Un anticuerpo, que comprende una cadena pesada y una cadena ligera, donde:

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, donde la cadena pesada y la cadena ligera están conectadas mediante un enlace flexible para formar un anticuerpo de cadena simple.

3. El anticuerpo de la reivindicación 2, que es un anticuerpo Fv de cadena simple.

4. El anticuerpo de la reivindicación 1, que es un anticuerpo Fab.

5. El anticuerpo de la reivindicación 1, que es un anticuerpo Fab'.

6. El anticuerpo de la reivindicación 1, que es un anticuerpo (Fab')₂.

7. El anticuerpo de la reivindicación 1, que es totalmente humano.

8. Un método de detección del nivel de OPGL en una muestra biológica que conlleva contactar con la muestra con el anticuerpo de la reivindicación 1.

9. Un anticuerpo de la reivindicación 1, que comprende una cadena pesada y una cadena ligera, donde la cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13 y la cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14.

10. Un anticuerpo de la reivindicación 1, que comprende una cadena pesada y una cadena ligera, donde la cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 y donde la cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 4.

11. Un anticuerpo de la reivindicación 1, que comprende una cadena pesada y una cadena ligera, donde la cadena pesada comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 y donde la cadena ligera comprende la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 4.

12. Un anticuerpo de la reivindicación 1 que comprende una cadena pesada y una cadena ligera, donde la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID IMO:2 del residuo 20 al residuo 467, y donde la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4 del residuo 21 al residuo 235.

13. Un anticuerpo de la reivindicación 1 que comprende una cadena pesada y una cadena ligera, donde la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID IMO:2 del residuo 20 al residuo 467, y donde la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:4 del residuo 21 al residuo 235.

14. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13.

15. El uso de un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13 o una composición farmacéutica de la reivindicación 14, para la fabricación de un medicamento para su administración con al menos un anticuerpo terapéutico seleccionado entre un anticuerpo anti-Her2, un anticuerpo anti-CDC20, un anticuerpo anti-EGFR, un anticuerpo que se une a la glicoproteína tipo mucina de la proteína de la superficie celular, trastuzumab, rituximab, ibritumomab tiuxetan, epratuzumab, IMC-C225, yodo 131 tositumomab y alemtuzumab.

16. Un anticuerpo de una de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13 o una composición farmacéutica de la reivindicación 14 para su uso en el tratamiento en la pérdida de hueso.

17. Un anticuerpo o una composición farmacéutica de la reivindicación 16 para su uso en el tratamiento de la pérdida de hueso asociada al menos con una de las enfermedades seleccionadas entre la osteoporosis, la enfermedad de Paget, osteomielitis, hipercalcemia, osteopenia, osteonecrosis, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune, artritis reumatoide y cáncer.

18. Uso de un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13 o una composición farmacéutica de la reivindicación 14 para la fabricación de un medicamento para tratar la pérdida de hueso.

19. El uso de la reivindicación 18, donde la pérdida de hueso está asociada al menos con una de las enfermedades seleccionadas entre la osteoporosis, la enfermedad de Paget, osteomielitis, hipercalcemia, osteopenia, osteonecrosis, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad autoinmune, artritis reumatoide y cáncer.

20. El uso de un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13 o una composición farmacéutica de la reivindicación 14 para la fabricación de un medicamento para su administración al menos con un agente terapéutico seleccionado entre un factor morfogénico óseo, un factor de crecimiento de transformación beta (TGF-ß), una hormona paratiroidea, un análogo de una hormona paratiroidea, una proteína relacionada con una hormona paratiroidea, un análogo de una proteína relacionada con una hormona paratiroidea, una prostaglandina, un bifosfonato, un alendronato, flúor, calcio y un factor de crecimiento fibroblástico (FEF) para el tratamiento de la pérdida de hueso.

21. El uso de un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13 o una composición farmacéutica de la reivindicación 14 para la fabricación de un medicamento para su administración al menos con un agente terapéutico seleccionado entre un inhibidor de la interleucina-1 (IL-1), IL-1 ra, anakinra, un inhibidor del TNFa, un receptor del TNFa soluble, etanercept, un anticuerpo anti-TNFa, infliximab, un anticuerpo D2E7, un fármaco antiinflamatorio no esteroideo (NSAID), un inhibidor de COX-2, celecoxib, rofecoxib y leflunomida, para el tratamiento de la pérdida de hueso asociada con una enfermedad inflamatoria.

22. El uso de un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13 o una composición farmacéutica de la reivindicación 14 para la fabricación de un medicamento para su administración al menos con un agente terapéutico seleccionado entre un inhibidor de la interleucina-1 (IL-1), IL-1 ra, anakinra, un inhibidor del TNFa, un receptor del TNFa soluble, etanercept, un anticuerpo anti-TNFa, infliximab, un anticuerpo D2E7, metotrexato, una forma soluble de CTLA4 y un modulador del receptor glucocorticoide, para el tratamiento de la pérdida de hueso asociada con una enfermedad autoinmune.

23. El uso de un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13 o una composición farmacéutica de la reivindicación 14 para la fabricación de un medicamento para su administración al menos con un agente terapéutico seleccionado entre un inhibidor de la interleucina-1 (IL-1), IL-1 ra, anakinra, un inhibidor del TNFa, un receptor del TNFa soluble, etanercept, un anticuerpo anti-TNFa, infliximab, un anticuerpo D2E7, un fármaco antiinflamatorio no esteroideo (NSAID), un inhibidor de COX-2, celecoxib, rofecoxib, leflunomida, metotrexato, una forma soluble de CTLA4 y un modulador del receptor de glucocorticoide, para el tratamiento de la pérdida de hueso asociada con la artritis reumatoide.

24. Uso de un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13 o una composición farmacéutica de la reivindicación 14 para la fabricación de un medicamento para su administración al menos con una radioterapia o quimioterapia, para el tratamiento de la pérdida de hueso asociada con el cáncer.

25. Un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13 o una composición farmacéutica de la reivindicación 14 para el tratamiento de la pérdida de hueso mediante la administración de al menos un agente terapéutico seleccionado entre un factor morfogénico óseo, un factor de crecimiento de transformación beta (TGF-hat{a}), una hormona paratiroidea, un análogo de una hormona paratiroidea, una proteína relacionada con una hormona paratiroidea, un análogo de una proteína relacionada con una hormona paratiroidea, una prostaglandina, un bifosfonato, un alendronato, flúor, calcio y un factor de crecimiento fibroblástico (FEF).

26. Un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13 o una composición farmacéutica de la reivindicación 14 para el tratamiento de la pérdida de hueso asociada con una enfermedad inflamatoria mediante su administración con al menos un agente terapéutico seleccionado entre un inhibidor de la interleucina-1 (IL-1), IL-1 ra, anakinra, un inhibidor del TNFa, un receptor del TNFa soluble, etanercept, un anticuerpo anti-TNFa, infliximab, un anticuerpo D2E7, un fármaco antiinflamatorio no esteroideo (NSAID), un inhibidor de COX-2, celecoxib, rofecoxib y leflunomida.

27. Un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13 o una composición farmacéutica de la reivindicación 14 para el tratamiento de la pérdida de hueso asociada con una enfermedad autoinmune mediante su administración con al menos un agente terapéutico seleccionado entre un inhibidor de la interleucina-1 (IL-1), IL-1 ra, anakinra, un inhibidor del TNFa, un receptor del TNFa soluble, etanercept, un anticuerpo anti-TNFa, infliximab, un anticuerpo D2E7, metotrexato, una forma soluble de CTLA4 y un modulador del receptor glucocorticoide.

28. Un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13 o una composición farmacéutica de la reivindicación 14 para el tratamiento de la pérdida de hueso asociada con la artritis reumatoide para su administración con al menos un agente terapéutico seleccionado entre un inhibidor de la interleucina-1 (IL-1), IL-1 ra, anakinra, un inhibidor del TNFa, un receptor del TNFa soluble, etanercept, un anticuerpo anti-TNFa, infliximab, un anticuerpo D2E7, un fármaco antiinflamatorio no esteroideo (NSAID), un inhibidor de COX-2, celecoxib, rofecoxib, leflunomida, metotrexato, una forma soluble de CTLA4 y un modulador del receptor de glucocorticoide.

29. Un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13 o una composición farmacéutica de la reivindicación 14 para el tratamiento de la pérdida de hueso asociada con el cáncer mediante su administración con al menos radioterapia o quimioterapia.

30. El uso de la reivindicación 24, donde el cáncer se selecciona entre cáncer de mama, próstata, tiroides, riñón, pulmón, esófago, recto, vejiga, cervical, de ovarios, hepático, gastrointestinal, mieloma múltiple, linfoma y enfermedad de Hodgkin.

31. El anticuerpo de la reivindicación 29, donde el cáncer se selecciona entre cáncer de mama, próstata, tiroides, riñón, pulmón, esófago, recto, vejiga, cervical, de ovarios, hepático, gastrointestinal, mieloma múltiple, linfoma y enfermedad de Hodgkin.

32. El uso de I reivindicación 24, donde la quimioterapia implica el tratamiento con al menos un agente seleccionado entre antraciclina, taxol, tamoxifeno, doxirrubicina, 5-fluororacilo y un antagonista de la hormona secretora de hormona luteinizante (LHRH).

33. El uso de la reivindicación 29, donde la quimioterapia implica el tratamiento con al menos un agente seleccionado entre antraciclina, taxol, tamoxifeno, doxirrubicina, 5-fluororacilo y un antagonista de la hormona secretora de hormona luteinizante (LHRH).

34. Uso de un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y 9 a 13 o una composición farmacéutica de la reivindicación 14 para la fabricación de un medicamento para su administración con TRAIL.