Métodos y composiciones para modificar un locus objetivo.
(12/02/2020) Un método para la modificación en serie de un locus objetivo en una célula, que comprende:
(a) proporcionar la célula que comprende el locus objetivo, en donde el locus objetivo
comprende un polinucleótido que codifica un primer marcador de selección unido operativamente a un primer promotor y que comprende un primer sitio de reconocimiento para un primer agente de nucleasa, en donde el primer sitio de reconocimiento de nucleasa está ubicado en una región codificante del primer marcador de selección o cualquier región no codificante de proteína del primer marcador de selección, opcionalmente en donde el locus objetivo está en el genoma de la célula o está ubicado en un vector en la célula;
(b) introducir en la…
Modificación genética de ratas.
(16/10/2019) Un método para generar una línea de células madre embrionarias (ES) de rata, que comprende:
(a) cultivar in vitro una primera capa de células alimentadoras que no se modifica para expresar el factor inhibidor de leucemia (LIF) y un embrión de rata en etapa de mórula o blastocisto,
en donde la zona pelúcida del embrión de rata en etapa de mórula o blastocisto se ha eliminado, y
en donde las condiciones de cultivo mantienen la pluripotencia de una célula ES de rata y comprenden un medio que comprende aproximadamente 50 U/mL a aproximadamente 150 U/mL de LIF, y una combinación de inhibidores que consiste en un inhibidor de MEK y un inhibidor de GSK3; y
(b) transferir una excrecencia de una masa amorfa…
Métodos y composiciones para generar o mantener células pluripotentes.
Sección de la CIP Química y metalurgia
(26/06/2019). Ver ilustración. Solicitante/s: REGENERON PHARMACEUTICALS, INC.. Clasificación: C12N5/00, C12N5/074.
Un método para fabricar una población de células madre pluripotentes inducidas humanas (hiPSCs),
comprendiendo el método el cultivo in vitro de una población de células no pluripotentes, que se transforman para expresar un estado pluripotente, en un medio de baja osmolaridad que comprende un medio base y complementos,
en el que el medio de baja osmolaridad comprende:
(a) un polipéptido de factor de inhibición de leucemia (LIF);
(b) un inhibidor de glucógeno sintasa quinasa 3 (GSK3); y
(c) un inhibidor de MEK;
en el que el medio de baja osmolaridad tiene una osmolaridad de 200 mOsm/kg a 250 mOsm/kg.
PDF original: ES-2741387_T3.pdf
Producción de animales hembra xy fértiles a partir de células es xy.
Secciones de la CIP Necesidades corrientes de la vida Química y metalurgia
(17/04/2019). Solicitante/s: REGENERON PHARMACEUTICALS, INC.. Clasificación: A01K67/027, C12N9/02, C12N15/873.
Un método para preparar un ratón XY fenotípicamente hembra fértil en una generación F0, que comprende:
(a) mantenerr una célula ES de ratón XY donante en un medio que comprende
(i) un medio base que presenta una osmolalidad de no más de 322 mOsm/kg,
y (ii) suplementos adecuados para mantener las células ES de ratón en cultivo;
(b) introducir la célula ES de ratón XY donante de la etapa (a) en un embrión de ratón hospedador en la etapa de premórula;
(c) gestar el embrión hospedador; y
(d) obtener una descendencia de ratón en la generación F0 que comprende un ratón XY fenotípicamente hembra F0, en el que, al alcanzar la madurez sexual, el ratón XY fenotípicamente hembra F0 es fértil.
PDF original: ES-2727738_T3.pdf
Métodos y composiciones para la modificación genética dirigida mediante el uso de pares de ARN guías.
(20/03/2019) Un método para hacer una modificación bialélica a un locus genómico diana en un genoma dentro de una célula, que comprende:
(I) introducir en una población de células:
(a) una proteína Cas;
(b) un primer ARN guía que se hibrida con una primera secuencia de reconocimiento de ARN de CRISPR dentro del locus genómico diana;
(c) un segundo ARN guía que se hibrida con una segunda secuencia de reconocimiento de ARN de CRISPR dentro del locus genómico diana; y
(d) un vector de transformación que comprende un inserto de ácido nucleico flanqueado por un brazo de homología 5' que se hibrida con una secuencia diana 5' dentro del locus genómico diana y un brazo de homología 3' que se hibrida con una secuencia diana 3' dentro del locus genómico diana,…
Métodos y composiciones para la modificación dirigida de un genoma.
(18/02/2019) Un método in vitro para modificar un genoma en un locus genómico de interés en una célula madre embrionaria (ES) de ratón, que comprende:
poner en contacto las células ES de ratón con una proteína Cas9, un ARN de CRISPR que se hibrida a una secuencia objetivo en el locus genómico de interés, un ARNtracr, y un vector de direccionamiento grande (LTVEC) que tiene un tamaño de al menos 10 kb y comprende un inserto de ácido nucleico flanqueado por:
(i) un brazo de homología 5' que es homólogo a una secuencia objetivo 5' en el locus genómico de interés; y
(ii) un brazo de homología 3' que es homólogo a una secuencia objetivo 3' en…
Modificación direccionada del genoma de rata.
(11/02/2019) Un método para la modificación direccionada de un locus genómico de interés en una célula de rata pluripotente, que comprende:
(a) introducir en la célula de rata pluripotente un vector objetivo grande (LTVEC) que comprende un ácido nucleico inserto flanqueado por un brazo de homología 5' complementario a una primera secuencia de ácidos nucleicos en el locus genómico de interés y un brazo de homología 3' complementario a una segunda secuencia de ácidos nucleicos en el locus genómico de interés, en donde la suma total de los brazos de homología 5' y 3' es al menos 10 kb; y
(b) identificar una célula de rata pluripotente modificada genéticamente que comprende…
Métodos y composiciones para modificaciones genéticas objetivo y métodos de uso.
(26/12/2018) Un método para modificar un locus genómico objetivo en un cromosoma Y en una célula, que comprende:
(a) proporcionar la célula que comprende el locus genómico objetivo en el cromosoma Y, en donde el locus genómico objetivo comprende un sitio de reconocimiento para un agente de nucleasa, y en el que la célula está en un cultivo que comprende un medio base DMEM;
(b) la introducción en la célula:
(i) del agente de nucleasa, en el que el agente de nucleasa induce un corte o ruptura de la cadena doble en el sitio de reconocimiento; y
(ii) de un vector de direccionamiento grande que comprende un polinucleótido de inserción flanqueado por los brazos de homología primero y segundo correspondientes…
Direccionamiento mediado por nucleasas con grandes vectores de direccionamiento.
(24/09/2018) Un método para modificar un locus genómico objetivo en una célula madre embrionaria (ES) de ratón, que comprende:
(a) introducción en la célula ES de ratón:
(i) una nucleasa de dedo de zinc (ZFN) que provoca un rompimiento de doble cadena en o cerca de el locus genómico objetivo; y
(ii) un vector de direccionamiento grande (LTVEC) que comprende un ácido nucleico insertado flanqueado por un brazo de homología secuencia arriba y un brazo de homología secuencia abajo,
en el que el ácido nucleico insertado varía de 5 kb a 30 kb de longitud,
en el que la suma total de los brazos de homología secuencia arriba y secuencia abajo tiene una longitud de al menos 10 kb,
en el que los brazos de homología secuencia arriba y secuencia abajo están entre 5 kb y 200 kb de longitud, y en el que el LTVEC varía de 50 kb…
Método para generar un animal no humano homocigótico para una modificación genética.
Secciones de la CIP Química y metalurgia Necesidades corrientes de la vida
(07/02/2018). Solicitante/s: REGENERON PHARMACEUTICALS, INC.. Clasificación: C12N15/85, C12N5/16, C07K14/47, C12N15/87, A01K67/027, C12N5/073.
Un método para generar un embrión de ratón que comprende:
(a) introducir una célula donante de ratón en un embrión de ratón huésped en pre-mórula, en donde las células donantes comprenden células ES o células tipo ES de un ratón endógamo, y
(b) cultivar el embrión de ratón huésped en pre-mórula de (a) hasta el estadio de blastocisto,
en donde al menos el 90 % de las células de un ratón que se desarrolla a partir del blastocisto se derivan de las células donantes.
PDF original: ES-2667169_T3.pdf
Ratones derivados de células ES a partir de inyección de un embrión hospedador diploide.
Secciones de la CIP Química y metalurgia Necesidades corrientes de la vida
(24/01/2018). Solicitante/s: REGENERON PHARMACEUTICALS, INC.. Clasificación: C12N15/85, C12N5/10, C12N5/16, A01K67/027, C12N15/90, A61D19/00.
Un embrión de ratón, que comprende una célula que tiene en su genoma:
a) un gen de recombinasa específica de sitio unido de forma funcional a un promotor Nanog que expresa el gen de recombinasa específica de sitio en una célula de la masa celular interna (ICM) pero no del trofectodermo;
(b) un gen que codifica una toxina, unido de forma funcional a un promotor, en el que el gen de la toxina está presente en un locus que permite la expresión; y
(c) una secuencia de ácido nucleico que evita la expresión del gen que codifica la toxina, en el que la secuencia de ácido nucleico está localizada entre el promotor del gen que codifica la toxina y la secuencia codificante del gen que codifica la toxina y está flanqueada en ambos lados por sitios de reconocimiento de recombinasa de modo que en presencia de la recombinasa específica de sitio se elimina la secuencia de nucleótidos y el promotor para el gen que codifica la toxina dirige la transcripción del gen que codifica la toxina.
PDF original: ES-2665068_T3.pdf
Método para generar un ratón homocigótico para una modificación genética.
(30/04/2014) Un método para generar un embrión de ratón que comprende células que son homocigóticas para una modificación genética, que comprende:
(a) introducir células donantes de ratón en un embrión huésped en pre-mórula, en donde las células donantes comprenden células ES o células tipo ES de un ratón endógamo, y que son homocigóticas para la modificación genética; y
(b) cultivar el embrión huésped en pre-mórula de (a) hasta el estadío de blastocisto en donde al menos el 90 % de las células de un ratón que se desarrolla a partir del blastocisto se derivan de las células donantes.
