Modificación direccionada del genoma de rata.
Un método para la modificación direccionada de un locus genómico de interés en una célula de rata pluripotente,
que comprende:
(a) introducir en la célula de rata pluripotente un vector objetivo grande (LTVEC) que comprende un ácido nucleico inserto flanqueado por un brazo de homología 5' complementario a una primera secuencia de ácidos nucleicos en el locus genómico de interés y un brazo de homología 3' complementario a una segunda secuencia de ácidos nucleicos en el locus genómico de interés, en donde la suma total de los brazos de homología 5' y 3' es al menos 10 kb; y
(b) identificar una célula de rata pluripotente modificada genéticamente que comprende una modificación genética direccionada en el locus genómico de interés,
en donde la modificación genética direccionada puede transmitirse a través de la línea germinal;
en donde la célula de rata pluripotente que se usará para la modificación direccionada del locus genómico de interés se puede obtener mediante el cultivo de células madre embrionarias de rata aisladas en una capa de células alimentadoras que no está modificada para expresar el factor inhibidor de la leucemia (LIF) con un medio que comprende aproximadamente 50 U/mL hasta aproximadamente 150 U/mL LIF y una combinación de inhibidores que consiste en un inhibidor de la vía MEK y un inhibidor de GSK3;
en donde la célula de rata pluripotente carece de expresión de c-Myc;
en donde la célula de rata pluripotente forma colonias esféricas, de flotación libre en cultivo; y
en donde la célula de rata pluripotente modificada tiene un cariotipo normal.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2014/034412.
Solicitante: REGENERON PHARMACEUTICALS, INC..
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 777 OLD SAW MILL RIVER ROAD TARRYTOWN, NY 10591 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: YANCOPOULOS, GEORGE, D., VALENZUELA, DAVID, M., AUERBACH,WOJTEK, LAI,KA-MAN VENUS, LEE,JEFFREY D, MUJICA,ALEXANDER O.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N15/85 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › para células animales.
- C12N9/22 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Ribonucleasas.
PDF original: ES-2699578_T3.pdf
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