Métodos para detectar un contaminante biológico.

Un método para detectar un contaminante biológico en una muestra de ensayo que comprende las etapas de:



a) combinar ingredientes para preparar una mezcla de reacción, en donde los ingredientes comprenden (i) una muestra de ácido nucleico derivada de una muestra de ensayo, (ii) oligonucleótidos y (iii) una ADN polimerasa, en donde los oligonucleótidos comprenden:

- un cebador oligonucleotídico directo específico para amplificar una secuencia polinucleotídica de amplificación de la diana (TAP) del contaminante biológico;

- un cebador oligonucleotídico inverso específico para amplificar la secuencia de TAP del contaminante biológico; - una sonda oligonucleotídica de detección específica para la secuencia de TAP del contaminante biológico;

- una sonda de detección única (UDP) para una secuencia polinucleotídica de control de amplificación de plásmido (PACP) de un plásmido de control positivo de amplificación (PAC), conteniendo el plásmido la secuencia de TAP y una secuencia de PACP; y

- un conjunto de cebadores y una sonda para detectar polinucleótidos de control de extracción de ácidos nucleicos (NACP);

b) someter a la mezcla de reacción a reacción en cadena de la polimerasa (PCR);

c) durante la PCR, monitorizar la producción de (i) TAP), (ii) polinucleótidos de control de extracción de ácido nucleico (NACP) y PACP; y

d) comparar la producción de TAP con la producción de NACP y PACP, en donde la presencia de TAP, la presencia de NACP y la ausencia de PACP producidos durante la PCR significa que la muestra de ensayo contiene un contaminante biológico y no contiene un plásmido de control positivo de amplificación,

en donde se lleva a cabo una reacción PCR de control positivo en paralelo por separado con parámetros idénticos y con componentes idénticos, excepto por que está presente el plásmido de PAC en lugar de una muestra de ácido nucleico procedente de una muestra de ensayo,

en donde la presencia de TAP, NACP y PACP producidos durante la reacción PCR de control positivo significa que la PCR está funcionando adecuadamente y la ausencia de uno cualquiera o más de TAP, NACP o PACP significa que el control positivo ha fallado.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2016/024216.

Solicitante: REGENERON PHARMACEUTICALS, INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 777 Old Saw Mill River Road Tarrytown, NY 10591 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: MONPOEHO,SERGE, MINK,SHELDON, VESCIO,PAUL.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/6876
  • C12Q1/70 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen virus o bacteriófagos.

PDF original: ES-2804845_T3.pdf

 

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