PÉPTIDOS SOPORTADOS Y DE UNIÓN A VEGF PARA TRATAR ENFERMEDADES DE LA PIEL.

Péptidos soportados y de unión a VEGF para tratar enfermedades de la piel Campo de la invención [0001] La presente invención proporciona péptidos y péptidos soportados para tratar enfermedades proliferativas tal como se define en las reivindicaciones. En las formas de realización particularmente preferidas, la presente invención proporciona péptidos y péptidos soportados para tratar enfermedades de la piel tales como rosácea. Antecedentes de la invención [0002] La angiogénesis es el desarrollo del suministro de la sangre a una zona dada de tejido. La 15 angiogénesis es parte del desarrollo embriónico normal y de la revascularización de las bases de las heridas, y análogamente se debe a la estimulación del crecimiento del vaso por células inflamatorias o malignas. La angiogénesis es también el proceso a través del cual los tumores o dolencias inflamatorias derivan un suministro de sangre a través de la generación de microvasos. 20 [0003] La angiogénesis está regulada en tejidos cancerosos normales y malignos mediante el equilibrio de estímulos angiogénicos e inhibidores angiogénicos que se producen en el tejido diana y en sitios distantes (Véase, Fidler y col., [1998]; y McNamara y col., [1998]). El factor A de crecimiento endotelial vascular (VEGF, conocido también como factor de permeabilidad vascular, VPF) es un estimulante primario de la angiogénesis. VEGF es una citocina multifuncional que está inducida por hipoxia y mutaciones oncogénicas y se puede producir por una amplia 25 variedad de tejidos (véase, Kerbel y col., [1998]; y Mazure y col., [1996]).   [0004] El reconocimiento de VEGF como un estímulo primario de la angiogénesis en dolencias patológicas ha conducido a algunos intentos de bloquear la actividad de VEGF. Se han propuesto anticuerpos receptores inhibidores contra VEGF, construcciones de receptores solubles, estrategias de sentido contrario, aptámeros del ARN contra VEGF e inhibidores del receptor VEGF de la tirosina cinasa (RTK) de bajo peso molecular para su uso en la interferencia con la señalización de VEGF (Véase, Siemeister y col., [1998]). De hecho, se han mostrado anticuerpos monoclonales contra VEGF para inhibir el crecimiento del tumor xenográfico y la formación de ascites en ratones (Véase, Kim y col., [1993]; Asano y col., [1998]; Mesiano y col., [1998]; Luo y col., [1998a] y [1998b]; y Borgstrom y col., [1996] y [1998]). [0005] Los RTK comprenden una numerosa familia de receptores transmembrana para factores de crecimiento de polipéptidos con diversas actividades biológicas La función intrínseca de RTKS se activa tras la unión del ligando, lo que da como resultado la fosforilación del receptor y de múltiples sustratos celulares, y posteriormente, una variedad de respuestas celulares (Véase, Ullrich & Schlessinger, Cell 61: 203-212 [1990]). [0006] La angiogénesis, que implica VEGF y los RTK no solo está implicada en el desarrollo del cáncer, ya que muchas otras enfermedades o dolencias que afectan diferentes sistemas fisiológicos son dependientes de la angiogénesis, tales como la artritis y las placas ateroescleróticas (hueso y ligamentos), la retinopatía diabética, el glaucoma neovascular, la degeneración macular, el herpes ocular, el tracoma y la neovascularización del injerto de córnea (ojo), la psoriasis, el escleroderma, la rosácea, el hemangioma y la cicatrización hipertrófica (piel), las adherencias vasculares y el angiofibroma (sistema sanguíneo). [0007] VEGF es un factor angiogénico de importancia principal para la vascularización de la piel (Detmar [2000]). La expresión de VEGF está regulada en exceso en la epidermis hiperplásica de la psoriasis (Detmar y Yeo y col. [1995]), (Detmar y Yeo y col. [1995]), en la cicatrización de heridas y en otras enfermedades de la piel caracterizadas por la potenciación de la angiogénesis (Detmar [2000], más arriba). Se informó que la expresión en exceso de VEGF en la epidermis de ratones transgénicos daba como resultado una potenciación de la vascularización de la piel con números iguales de vasos sanguíneos tortuosos y permeables (Véase, por ejemplo, Brown y col., [1998]). También, la síntesis crónica de VEGF en la piel de ratones conduce al primer modelo de murino histológicamente equivalente de psoriasis humana (Xia y col., [2003]) que es reversible mediante la unión de agentes específicos para VEGF. [0008] Piossek y col., 1999, J. Biol. Chem., Vol. 274, No. 9, pp. 5612-5619, describen péptidos derivados del receptor II del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) que inhiben VEGF. [0009] Bae y col., 2000, J. Biol. Chem. Vol. 275, No. 18, pp. 13588-13596, describen péptidos contra VEGF ricos en arginina que inhiben el crecimiento tumoral y la metástasis mediante el bloqueo de la angiogénesis. [0010] El documento WO 01/79479 describe procedimientos de dirección selectiva para cribar una biblioteca de 2   ligando con el fin de identificar los ligandos unidos a diana. Entre los péptidos dados a conocer están los péptidos que se unen a VEGF identificados mediante ciclos de selección por afinidad. [0011] El documento WO 02/48189 describe bibliotecas combinatorias de proteínas que tienen la estructura de armazón de los dominios similares a lectina de tipo C. [0012] Fernandez-Carneado y col., 2001, Biopolymers, Vol. 55, pp. 451-458, describen el rediseño de proteínas mediante genomanipulación usando injerto molecular en las superficies de las moléculas en armazones de proteínas sintéticas ensamblados en moldes. [0013] Ye y Ding, 1999, Acta Biophysica Sinica, Vol. 15, No. 4, pp. 751-757, describen técnicas para genomanipular proteínas novedosas mediante injerto en sitios activos en armazones naturales. [0014] El inhibidor de la proteasa de Bowman-Birk (BBI) es la designación de una familia de inhibidores de la 15 enzima tripsina y quimotripsina de bajo peso molecular que se encuentra en soja y otras diversas semillas, principalmente semillas de leguminosa y materiales vegetales. BBI comprende una familia de proteínas unidas a disulfuro con peso molecular de aproximadamente 8 kD (Véase por ejemplo, Chou y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 71: 1748-1752 [1974]; Yavelow y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 5395-5399 [1985]; y Yavelow y col., Cancer Res. (Suppl.) 43: 2454s-2459s [1983]). BBI tiene una estructura pseudosimétrica de dos dominios tricíclicos 20 conteniendo cada uno un bucle de unión natural independiente, los bucles naturales contienen sitios de unión para la tripsina y la quimotripsina (Véase, Liener, en Summerfield y Bunting (eds), Advances in Legume Science, Royal Bot. Gardens, Kew, Inglaterra). Estos sitios de unión tienen una estructura de bucle clásica, que es un motivo unido en una variedad de inhibidores de la serina proteinasa (Bode y Huber, Eur. J. Biochem., 204: 433-451 [1992]). 25 [0015] Comúnmente, como en uno de los inhibidores de la soja, uno de los bucles naturales inhibe la tripsina y el otro inhibe la quimotripsina (Véase, Chen y col., J. Biol. Chem., 267: 1990-1994 [1992]; Werner y Wemmer, Biochem., 31: 999-1010 [1992]; Lin y col., Eur. J. Biochem., 212: 549-555 [1993]; y Voss y col., Eur. J. Biochem., 242: 122-131 [1996]) considerado en otros organismos (por ejemplo., Arabidopsis), ambos bucles son específicos de tripsina. [0016] STI inhibe la actividad proteolítica de la tripsina mediante la formación de un complejo estequiométrico estable (Véase, por ejemplo, Liu, Chemistry and Nutritional Value of Soybean Components, En: Soybeans, Chemistry, Technology and Utilization, pp. 32-35, Aspen Publishers, Inc., Gaithersburg, Md., [1999]). STI consta de 181 restos de aminoácidos con dos puentes disulfuro y está conformado aproximadamente en forma de esfera 35 (Véase, por ejemplo, Song y col., J. Mol. Biol., 275:347-63 [1998]). El bucle inhibidor de la tripsina se encuentra en el primer puente disulfuro. El inhibidor de la tripsina de soja de tipo Kunitz (STI) ha jugado un papel clave en el estudio inicial de las proteinasas. Que se ha usado como sustrato principal en la bioquímica y cinética de trabajo que condujo a la definición del mecanismo de acción normalizado de los inhibidores de la proteinasa. 40 [0017] Eglina C es una pequeña proteína monomérica que pertenece a la familia de inhibidores de la quimotripsina de la patata de los inhibidores de la serina proteasa. Las proteínas que pertenecen a esta familia son usualmente pequeñas (60-90 restos de aminoácidos de longitud) y no contienen enlaces disulfuro. Eglina C, sin embargo, es muy resistente a la desnaturalización mediante la acidificación o el calor, sin tener en cuenta la falta de enlaces disulfuro para ayudar a estabilizar su estructura terciaria. La proteína se produce naturalmente en la sanguijuela 45 Hirudo medicinalis. Resumen de la invención [0018] La presente invención proporciona péptidos y péptidos soportados... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende al menos un péptido seleccionado entre el grupo que consiste en YNLYGWT (SEQ ID NO: 1), TLWPTFW (SEQ ID NO: 2), NLWPHFW (SEQ ID NO: 3), SLWPAFW (SEQ ID NO: 4), APWNSHI (SEQ ID NO: 5), APWNLHI (SEQ ID NO: 6), TLWPSYW (SEQ ID NO: 7), XXLWPXWC (SEQ ID NO: 15; X representa cualquier resto aminoácido), TLWKSYW (SEQ ID NO: 17) y ACXLWPXXWC (SEQ ID NO: 18; X representa cualquier resto aminoácido), en la que dicho péptido se une a un factor de crecimiento endotelial vascular y se expresa en un armazón resistente a la proteasa que es un inhibidor de la proteasa. 10 2. La composición de la Reivindicación 1, en la que dicho inhibidor de la proteasa se selecciona entre el grupo que consiste en el inhibidor de Bowman-Birk, el inhibidor de la tripsina de soja y el inhibidor de la quimotripsina Eglina. 3. La composición de la Reivindicación 2, en la que dicho armazón es el inhibidor de Bowman-Birk. 4. La composición de la Reivindicación 1, en la que dicha composición comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en las SEQ ID NOS: 22-24, tal como se muestra en la figura 13. 20 5. La composición de la Reivindicación 1, en la que dicho armazón comprende la secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia de ácidos nucleicos que se muestra en la SEQ ID NO: 19, tal como se muestra en la figura 9. 6. La composición de la Reivindicación 5, en la que dicho armazón comprende las secuencias de aminoácidos CTKSNPPQC (SEQ ID NO: 20) y CALSYPAQC (SEQ ID NO: 21). 7. La composición de la Reivindicación 6, en la que dichas secuencias de aminoácidos CTKSNPPQC (SEQ ID NO: 20) y CALSYPAQC (SEQ ID NO: 21) se sustituyen por al menos un péptido seleccionado entre el grupo que consiste en YNLYGWT (SEQ ID NO: 1), TLWPTFW (SEQ ID NO: 2), NLWPHFW (SEQ ID NO: 3), SLWPAFW (SEQ ID NO: 4), APWNSHI (SEQ ID NO: 5), APWNLHI (SEQ ID NO: 6), TLWPSYW (SEQ ID NO: 7) y TLWKSYW (SEQ ID NO: 17). 8. Una composición que comprende al menos un polipéptido seleccionado entre el grupo que consiste en TLWPSYW (SEQ ID NO: 7) y TLWKSYW (SEQ ID NO: 17), en la que dicho péptido se une a un factor de crecimiento endotelial vascular. 9. Una composición cosmética o farmacéutica que comprende una composición de acuerdo con cualquier reivindicación anterior. 40 10. La composición de la Reivindicación 9, en la que dicha composición es capaz de modular la angiogénesis. 11. Una composición de acuerdo con cualquier reivindicación anterior para su uso en un procedimiento de tratamiento médico. 12. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para su uso en un procedimiento de tratamiento mediante la modulación de la angiogénesis, cuyo procedimiento comprende aplicar dicha composición a un sujeto en una zona en la que se desea la modulación de la angiogénesis. 50 13. Una composición para su uso en un procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 12, en el que el procedimiento comprende la unión de dicho péptido a un factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF).   14. Una composición para su uso en un procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 13, en el que dicho factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) es VEGF-A. 15. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para su uso en un procedimiento de tratamiento de un trastorno de la piel. 16. Una composición para su uso en un procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 15, en el que 60 dicho trastorno de la piel es un trastorno de la piel angiogénico seleccionado entre el grupo que consiste en: psoriasis, acné, rosácea, verrugas, eczema, hemangiomas y linfangiogénesis, síndrome de Sturge-Weber, neurofibromatosis, esclerosis tuberosa, enfermedad inflamatoria crónica y artritis. 41   17. Una composición para su uso en un procedimiento de acuerdo con la Reivindicación 16, en el que dicho trastorno de la piel es rosácea. 18. Uso de una composición tal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 en la preparación de un medicamento para tratar un trastorno de la piel. 19. Uso de acuerdo con la Reivindicación 18, en el que el trastorno de la piel se selecciona entre el grupo que consiste en: psoriasis, acné, rosácea, verrugas, eczema, hemangiomas y linfangiogénesis, síndrome de Sturge- Weber, neurofibromatosis, esclerosis tuberosa, enfermedad inflamatoria crónica y artritis. 20. Uso de acuerdo con la Reivindicación 19, en el que el trastorno de la piel es rosácea. 42   43   44     46   47   48   49     51   52   53