Estrategia general para la selección de bibliotecas de anticuerpos.

Un método para el aislamiento de entidades de replicación marcadas específicamente,

comprendiendo dicho método

a) proporcionar en una mezcla de reacción un conjunto de entidades de replicación que despliegan variantes de una molécula receptora sobre su superficie y que tienen una primera o segunda enzima unida a dicha superficie, comprendiendo la mezcla de reacción una tercera enzima capaz de descomponer el exceso de producto de dicha primera y/o segunda enzima, siendo la primera enzima una peroxidasa, siendo la segunda enzima una oxidasa y siendo la tercera enzima una catalasa,

b) añadir a la mezcla de la etapa a) moléculas de ligando que están unidas a dicha primera enzima si dichas entidades están unidas a dicha segunda enzima, o dichos ligandos están unidos a dicha segunda enzima si dichas entidades están unidas a dicha primera enzima,

c) añadir a la mezcla de reacción un sustrato para la segunda enzima, siendo utilizado el sustrato por dicha segunda enzima en una reacción enzimática para producir un producto que es utilizado por dicha primera enzima para convertir un cosustrato de dicha primera enzima en una molécula marcadora reactiva que se une físicamente a la correspondiente entidad de replicación, marcando específicamente de este modo la entidad de replicación, y

d) aislar las entidades de replicación marcadas específicamente, y

e) en el que el cosustrato de dicha primera enzima es una tiramida conjugada con una molécula marcadora mediante un enlazador escindible, preferiblemente un puente disulfuro o una secuencia peptídica que puede ser escindida por una proteasa, preferiblemente una biotina-tiramida con un puente disulfuro escindible de la siguiente estructura:**Fórmula**

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2012/005162.

Solicitante: MERCK PATENT GMBH.

Nacionalidad solicitante: Alemania.

Dirección: FRANKFURTER STRASSE 250 64293 DARMSTADT ALEMANIA.

Inventor/es: BECKER, STEFAN, KOLMAR, HARALD, HEISELER,TIM, MAASS,ALEXANDER.

Fecha de Publicación: 15 de Mayo de 2019.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
G01N33/532 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Producción de compuestos inmunoquímicos marcados.
G01N33/542 G01N 33/00 […] › con inhibición estérica o modificación de la señal, p. ej. extinción de fluorescencia.

PDF original: ES-2742303_T3.pdf

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