Composiciones y métodos para el ensamblaje de alta fidelidad de ácidos nucleicos.

Un método de producción de un ácido nucleico objetivo que tiene una secuencia predefinida,

comprendiendo el método:

proporcionar una pluralidad de fragmentos de ácido nucleico bicatenario de extremos romos que tienen una secuencia de reconocimiento de enzimas de restricción en cada extremo; en donde la pluralidad de fragmentos de ácido nucleico bicatenario de extremos romos se generan a partir de una pluralidad de oligonucleótidos monocatenarios inmovilizados sobre un soporte sólido y se amplifican usando un cebador de amplificación que se une a una secuencia de amplificación ubicada en el extremo 5' y/o el extremo 3', en donde el cebador de amplificación es un cebador universal para todos los oligonucleótidos monocatenarios;

producir una pluralidad de fragmentos de ácido nucleico bicatenario de extremos cohesivos, que juntos comprenden la secuencia de ácido nucleico objetivo, a través de la digestión enzimática de la pluralidad de fragmentos de ácido nucleico bicatenario de extremos romos en o cerca de la secuencia de reconocimiento de enzimas de restricción, en donde la pluralidad de fragmentos de ácido nucleico bicatenario de extremos cohesivos tienen cada uno dos salientes diferentes y no complementarios, teniendo los salientes de 3 a 10 bases de longitud;

hibridar la pluralidad de fragmentos de ácido nucleico bicatenario de extremos cohesivos en los salientes, en donde un primer saliente de un primer fragmento de ácido nucleico bicatenario de extremos cohesivos se diseña para que comprenda una región que sea únicamente complementaria a una región en un segundo saliente de un segundo fragmento de ácido nucleico bicatenario de extremos cohesivos; y

ligar la pluralidad de fragmentos de ácido nucleico bicatenario de extremos cohesivos con una ligasa, formando de este modo el ácido nucleico objetivo que tiene una secuencia predefinida.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E15159715.

Solicitante: Gen9, Inc.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 27 Drydock Avenue, 8th Floor Boston, MA 02210 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: SCHINDLER,DANIEL, JACOBSON,JOSEPH, LAWTON,SCOTT S.

Fecha de Publicación: 24 de Abril de 2019.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
C12N15/66 C12N 15/00 […] › Métodos generales para insertar un gen en un vector para formar un vector recombinante, utilizando la escisión y la unión; Utilización de "linkers" no funcionales o de adaptadores, p. ej. "linkers" que contienen la secuencia para una endonucleasa de restricción.
C12P19/34 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Polinucleótidos, p. ej. ácidos nucleicos, oligorribonucleótidos.
C40B50/06 C […] › C40 TECNOLOGIA COMBINATORIA. › C40B QUIMICA COMBINATORIA; BIBLIOTECAS, p. ej. QUIMIOTECAS (bibliotecas combinatorias in silico de ácidos nucleicos, proteínas o péptidos G16B 35/00; química combinatoria in silico G16C 20/60). › C40B 50/00 Procedimientos de creación de bibliotecas, p. ej. síntesis combinatoria. › Procedimientos bioquímicos, p. ej. empleando enzimas o microorganismos enteros viables.

PDF original: ES-2737957_T3.pdf

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