Análisis de expresión génica en células individuales.

Un método para preparar una biblioteca de ADNc a partir de una pluralidad de células individuales,

comprendiendo el método las etapas de:

(i) liberar ARNm de cada célula individual para proporcionar una pluralidad de muestras de ARNm individuales, en las que el ARNm en cada muestra de ARNm individual es de una única célula;

(ii) sintetizar una primera cadena de ADNc a partir del ARNm en cada muestra de ARNm individual con un cebador de síntesis de una primera cadena de ADNc (CDS) que comprende una secuencia de un cebador de amplificación (APS) en 5' y una secuencia complementaria de ARN (RCS) que es al menos parcialmente complementaria a uno o más ARNm en una muestra de ARNm individual, en donde el RCS comprende oligo (dT), hexámeros aleatorios o una secuencia semi-aleatoria no auto-complementaria, e incorporar un marcador al ADNc para proporcionar una pluralidad de muestras de ADNc marcadas, en donde el ADNc en cada muestra de ADNc marcada es complementario al ARNm de una única célula; y

en donde el marcador incorporado es un marcador distinto o una combinación distinta de marcadores, de manera que cada muestra de ADNc tiene una etiqueta o combinación de etiquetas diferente;

(iii) agrupar las muestras de ADNc marcadas; y

(iv) amplificar las muestras de ADNc agrupadas para generar una biblioteca de ADNc que comprende ADNc bicatenario

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E15190426.

Solicitante: ILLUMINA, INC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 5200 Ilumina Way San Diego, CA 92122 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: LINNARSSON,STEN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12N15/11 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Fragmentos de ADN o de ARN; sus formas modificadas (ADN o ARN no empleado en tecnología de recombinación C07H 21/00).
  • C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
  • C40B50/06 C […] › C40 TECNOLOGIA COMBINATORIA.C40B QUIMICA COMBINATORIA; BIBLIOTECAS, p. ej. QUIMIOTECAS, BIBLIOTECAS IN SILICO. › C40B 50/00 Procedimientos de creación de bibliotecas, p. ej. síntesis combinatoria. › Procedimientos bioquímicos, p. ej. empleando enzimas o microorganismos enteros viables.

PDF original: ES-2706227_T3.pdf

 

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