Medición de la longitud de telómeros en muestras fijadas en formalina, embebidas en parafina (FFPE) por PCR cuantitativa.

Un método para medir la longitud de telómero en un tejido embebido en parafina fijado en formalina que comprende:



(a) extraer el ácido nucleico telomérico diana de un tejido embebido en parafina, fijado en formalina utilizando un método de extracción suave que no aísla los fragmentos de ADN en una columna y que retiene una mayoría de los fragmentos de ácido nucleico diana teloméricos que son de al menos 50 pb,

(b) combinar en una reacción en cadena de la polimerasa el ácido nucleico telomérico diana extraído de la etapa (a) que comprende sustancialmente una primera y una segunda cadena complementarias, un primer cebador telomérico en el que el primer cebador telomérico es capaz de hibridarse con la primera cadena del ácido nucleico telomérico diana y de ser extendido por ADN polimerasa para formar un cebador telomérico extendido, y un segundo cebador telomérico, en el que el segundo cebador telomérico es capaz de hibridarse con el primer cebador telomérico extendido y de ser extendido por ADN polimerasa pero no es capaz de hibridarse con el ácido nucleico telomérico diana y que se extiende mediante ADN polimerasa;

(c) calentar la reacción en cadena de la polimerasa a una temperatura suficiente para generar monocadenas de ácido nucleico y reducir la temperatura a una temperatura comprendida entre 49 °C y 60 °C para dejar que los cebadores se hibriden con sus dianas y se extiendan, y

(d) repetir la etapa (c) durante al menos 4 ciclos,

(e) calentar la reacción en cadena de la polimerasa a una temperatura suficiente para generar una monocadena de ácidos nucleicos y reducir la temperatura de 55 °C a 65 °C para dar cabida a que se hibriden los cebadores con sus dianas y se extiendan durante otros 20 a 40 ciclos más,

(f) identificar el ciclo de replicación en el que se pasa la señal de PCR umbral, y

(g) determinar la longitud de telómero media.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2012/030581.

Solicitante: GERON CORPORATION.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 149 COMMONWEALTH DRIVE MENLO PARK, CA 94025 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: WANG,HUI, PIROT,ZHU ZHEN, GO,NING F.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
  • G01N33/50 SECCION G — FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Análisis químico de material biológico, p. ej. de sangre, de orina; Investigación o análisis por métodos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas con grupos coordinadores; Investigación o análisis inmunológico (procedimientos de medida, de investigación o análisis diferentes de los procedimientos inmunológicos en los que intervienen enzimas o microorganismos, composiciones o papeles reactivos a este efecto; procedimientos para preparar estas composiciones, procedimientos de control sensibles a las condiciones del medio en los procedimientos microbiológicos o enzimáticos C12Q).
  • G01N33/574 G01N 33/00 […] › para el cáncer.

PDF original: ES-2656958_T3.pdf

 

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