Proceso para la producción de ácido hialurónico en Escherichia coli o Bacillus megaterium.

Proceso para la preparación de ácido hialurónico en Bacillus megaterium,

que comprende las siguientes etapas:

(a) cultivo de células huésped bacterianas de Bacillus megaterium transformadas de manera estable con el sistema de la ARN polimerasa T7, bajo condiciones apropiadas para la producción de ácido hialurónico en presencia de xilosa como inductor, en donde dichas células huésped bacterianas se caracterizan por ser transformadas adicionalmente con:

(i) al menos un vector plásmido episomal que comprende una secuencia que codifica la hialuronano sintasa de la enzima y una secuencia que codifica para la enzima UDP-glucosa deshidrogenasa en tándem, bajo el control del promotor T7 fuerte inducible, preferiblemente bajo el control del promotor T7 fuerte inducible del bacteriófago T7; o

(ii) al menos un vector plásmido episomal que comprende una secuencia que codifica para la enzima hialuronato sintasa, una secuencia que codifica para la enzima UDP-glucosa deshidrogenasa, una secuencia que codifica para la enzima UDP-glucosa pirofosforilasa y una secuencia que codifica para la enzima glucosa 6 fosfato isomerasa, bajo el control del promotor T7 fuerte inducible, preferiblemente bajo el control del promotor T7 fuerte inducible del bacteriófago T7;

(b) recuperación del ácido hialurónico del medio de cultivo,

en donde dichas células huésped bacterianas de Bacillus megaterium transformadas de manera estable con el sistema de la ARN polimerasa T7 y con el vector plásmido (i) o (ii) capaz de producir ácido hialurónico de la etapa a) se preseleccionan en la placa en un gradiente de xilosa.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2011/065641.

Solicitante: FIDIA FARMACEUTICI S.P.A..

Nacionalidad solicitante: Italia.

Dirección: VIA PONTE DELLA FABBRICA 3/A 35031 ABANO TERME (PD) ITALIA.

Inventor/es: CORSA, VINCENZA, NEGRO, ALESSANDRO, BISICCHIA,SONIA.

Fecha de Publicación: 6 de Abril de 2016.

Clasificación Internacional de Patentes:

C08B37/00 QUIMICA; METALURGIA. › C08 COMPUESTOS MACROMOLECULARES ORGANICOS; SU PREPARACION O PRODUCCION QUIMICA; COMPOSICIONES BASADAS EN COMPUESTOS MACROMOLECULARES. › C08B POLISACARIDOS; SUS DERIVADOS (polisacáridos que contienen menos de seis radicales sacáridos unidos entre sí por enlaces glucosídicos C07H; procesos de fermentación o procesos que utilizan enzimas C12P 19/00; producción de celulosa D21). › Preparación de polisacáridos no previstos en los grupos C08B 1/00 - C08B 35/00; Sus derivados (celulosa D21).
C12N15/63 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
C12N15/75 C12N 15/00 […] › para Bacillus.
C12N9/10 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Transferasas (2.) (ribonucleasas C12N 9/22).
C12P19/04 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Polisacáridos, es decir, compuestos que contienen más de cinco radicales sacárido unidos entre ellos por enlaces glucosídicos.
C12P19/26 C12P 19/00 […] › Preparación de hidratos de carbono que contienen nitrógeno.

PDF original: ES-2575252_T3.pdf

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