Procedimiento inmunocromatográfico y sistema de ensayo para la determinación de al menos un analito en una solución de ensayo a analizar.

Procedimiento inmunocromatográfico para la determinación de al menos un analito en una solución de ensayo que se debe analizar,

en el cual en una membrana inmunocromatográfica situada sobre un soporte se dispone una zona de ensayo específica para el analito, en donde sobre la membrana (6), y separadas según un principio de separación inmunocromatográfica de las zonas de ensayo específicas (7, 13) para el analito (3, 10), se dispone una zona de control específica (8, 14) para el analito, y en la solución de ensayo (2) que se debe analizar hay presente y se hace reaccionar un anticuerpo (4, 11) contra el analito (3, 10) que se debe investigar, acoplado o marcado con una sustancia que desencadena una reacción cromática, caracterizado por que además de la solución de ensayo (2), se agrega una sustancia de control (12) acoplada o marcada con una sustancia que desencadena una reacción cromática, por que la membrana inmunocromatográfica (6) se sumerge durante 1 a 20 minutos en la solución de ensayo que se debe analizar, por que el analito (3, 10) y el anticuerpo (4, 11) marcado en exceso, así como eventualmente el producto de reacción del analito y el anticuerpo marcado, son captados por la membrana inmunocromatográfica (6) desde la solución de ensayo (2), y se hacen pasar por la zona de ensayo específica (7, 13) y la zona de control específica (8, 14), así como por una zona de control no específica (15), que contiene un anticuerpo contra la sustancia de control (12), por que para la valoración del procedimiento se determina, en primer lugar, la validez del resultado experimental comparando o midiendo la intensidad del color de la o las zonas de control específicas (8, 14) y/o de la zona de control no específica (15) con una carta de color, y/o por la intensidad del color de la zona de ensayo específica mediante dispositivos de medición fotométrica, y por que para la determinación cuantitativa del al menos un analito (3, 10) que se debe investigar se miden por fotometría la intensidad de la zona de ensayo (7, 14) y la de la zona de control específica (8, 14), y se comparan con una curva de calibración.

Procedimiento inmunocromatográfico y sistema de ensayo para la determinación de al menos un analito en una solución de ensayo a analizar

Descripción

La presente invención se refiere a un procedimiento inmunocromatográfico para la determinación de al menos un analito en una solución de ensayo que se debe analizar, en el cual sobre una membrana inmunocromatográfica fijada a un soporte se dispone una zona de ensayo especifica para el analito, en donde sobre la membrana, según un principio de separación inmunocromatográfica, se dispone una zona de control específica para el analito, que está separada de la zona de ensayo especifica para el analito, y en la solución de ensayo que se debe analizar se dispone y hace reaccionar un anticuerpo contra el analito que se debe analizar, en donde dicho anticuerpo está acoplado o marcado con una sustancia que desencadena una reacción de color, así como a un sistema de ensayo para la determinación de al menos un analito en una solución de ensayo que se debe analizar.

Se conoce un gran número de procedimientos ¡nmunocromatográficos, así como sistemas de ensayo con los que se pueden determinar analitos, en especial analitos biológicos, y la mayoría de estos procedimientos y sistemas de ensayo exigen tiempos prolongados de trabajo, o permiten una detección cualitativa, semicuantitativa o cuantitativa de una muestra que se debe analizar. De manera particular, se conocen múltiples procedimientos y sistemas de ensayo en los que se utiliza una técnica de capa fina, en la que se ponen en contacto tiras de ensayo o placas de ensayo y membranas inmunocromatográficas aplicadas sobre las placas de ensayo o tiras de ensayo, con un eluyente en el que se transporta la muestra que se debe analizar para, seguidamente, someterlo a una valoración por comparación óptica directa o a una valoración cualitativa, cuantitativa o también semicuantitativa, mediante curvas de calibración.

Adicionalmente, el documento WO 3/58242 da a conocer, por ejemplo, un sistema provisto de un sistema de calibración interna para un ensayo de flujo. En este sistema o procedimiento se utiliza una membrana porosa que se encuentra en interacción fluida con los conjugados de ensayo, los cuales contienen un miembro de fijación específico para una muestra detectable. La membrana porosa define una zona de detección y una zona de calibración, en donde la zona de calibración comprende dos o múltiples regiones de calibración que contienen diferentes cantidades de un aglutinante, y que están configuradas para unirse con los conjugados de la muestra. Como resultado, se generan señales de calibración que se pueden comparar fácilmente de forma visual, cuantitativa o similar con una señal de detección para determinar la presencia o cantidad de un analito en una muestra de ensayo.

El documento WO 3/8822 describe un procedimiento para la medición de un analito de Interés en una muestra líquida, en el que sobre una tira de ensayo se aplica una muestra líquida tamponada en un punto inicial de la tira de ensayo y después de un tránsito, se analiza en la tira de ensayo, que está provista de una zona de ensayo y una zona de control, la cantidad de partículas de analito que se han fijado en la muestra liquida.

El documento WO 27/27231 A1 da a conocer un sistema de ensayo diagnóstico para la detección precisa de un analito de ensayo sobre un amplio Intervalo de concentraciones posibles.

Una característica de este sistema es que tiene la capacidad de indicar si un analito se encuentra dentro del intervalo de una concentración en exceso o en el intervalo del "efecto Hook" (gancho). En este caso, la concentración del analito se puede determinar usando una parte de una curva de respuesta a la dosis.

El documento EP 17115 A2 describe un procedimiento y un dispositivo para analizar y medir al menos un analito en una muestra única, en el que sobre un soporte sólido que posee múltiples receptores se fijan de manera selectiva diferentes analitos a los receptores con el fin de poder llevar a cabo un análisis diferencial entre los diversos analitos.

El documento WO 97/38312 describe un dispositivo de diagnóstico en el que, sobre una matriz portadora está dispuesto un reactivo marcado de fijación específico para un analito, en donde el reactivo marcado de fijación específico puede moverse libremente en el Interior de la matriz portadora cuando ésta se encuentra en estado húmedo o mojado; adicionalmente, tiene un hilo de absorción que posee un reactivo específico, no marcado, para el mismo analito, en donde para la detección del analito la muestra de ensayo, que se ha aplicado en el dispositivo de ensayo, puede movilizar el reactivo de fijación marcado para el analito que, a continuación, permea hacia el hilo de absorción, en donde el analito unido al reactivo es captado por medio del hilo de absorción de tal forma que se puede observar la presencia del analito.

El documento WO 23/23371 A describe un procedimiento para agregar una línea de señal no evidente a un procedimiento de diagnóstico rápido, en el cual un soporte contiene una marca, así como, además, una matriz que define una trayectoria de flujo axial, fijados al soporte. Por último, el soporte tiene una zona de captación de la muestra, una zona de marcado y una reglón de observación, en donde la marca en el soporte es detectable a través de una ventana de observación.

En el documento WO 23/31539 se da a conocer un procedimiento y un dispositivo para llevar a cabo un ensayo de flujo lateral, en el cual se lleva a cabo un análisis sobre una tira de ensayo que contiene una zona de aplicación, en la que se puede incorporar la muestra, una zona de medición del analito que contiene un agente de fijación del analito, una zona de control y una segunda zona de medición que contiene un segundo agente de control, en donde durante la actuación de la tira de ensayo el analito, que se ha incorporado en la zona de aplicación, difunde hacia la zona de medición del analito y el agente de fijación de control difunde hacia las primera y segunda zonas de medición de control.

Por último, el documento GB 23914 A describe un dispositivo de detección de un analito para muestras liquidas, en el cual sobre una membrana, a lo largo de la que se puede mover el liquido, se aplican en primer lugar múltiples partículas detectables, que están asociadas con una región de muestra del dispositivo y que se han aplicado en ese líquido, que se mueven a lo largo del soporte, en donde sobre el soporte hay inmovilizado un primer agente de fijación que puede formar un complejo con la especie del analito. Adicionalmente, en el soporte existen una región de valor umbral así como una región de detección para detectar un complejo que se ha formado entre el primer agente de fijación, que se encuentra inmovilizado sobre el soporte, y la especie del analito. Finalmente, el documento EP 987551 A2 da a conocer un procedimiento para determinar la concentración de un analito en un ¡nmunoensayo tipo sándwich con flujo lateral, que desencadena un efecto de gancho a dosis elevadas. En este procedimiento, la concentración de un analito en un medio de ensayo líquido se determina utilizando una tira de ensayo inmunocromatográfica, en donde la tira de ensayo contiene al menos dos bandas de captación y, eventualmente, una o múltiples bandas de recolección que capturan anticuerpos anti-analito marcados para ponera disposición una señal detectable. Las señales de la marca se detectan de forma cuantitativa en cada una de las bandas con el fin de proporcionar un patrón de señales, que es exclusivo para la concentración del analito en un líquido de ensayo. A continuación, los patrones de las señales se combinan matemáticamente para ofrecer una curva de respuesta a la dosis monótona.

La presente invención tiene como objetivo poner a disposición un procedimiento sencillo y especialmente rápido con el que sea posible determinar la ausencia, la presencia o una concentración excesiva de un analito, concretamente el efecto gancho, sin que se deban realizar al mismo tiempo complicados procedimientos de cálculo ni se deban utilizar membranas inmunocromatográficas extremadamente complejas.

Para resolver estas tareas, el procedimiento según la Invención se distingue esencialmente por que, además de la solución de ensayo, se agrega una sustancia de control acoplada o marcada con una sustancia que desencadena una reacción cromática, por que la membrana inmunocromatográfica se sumerge durante 1 a 2 minutos en la solución de ensayo que se debe analizar, por que el analito y el anticuerpo marcado en exceso así como, eventualmente, el producto de reacción del analito y el anticuerpo marcado son capturados por la membrana inmunocromatográfica... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento inmunocromatográfico para la determinación de al menos un analito en una solución de ensayo que se debe analizar, en el cual en una membrana ¡nmunocromatográfica situada sobre un soporte se dispone una zona de ensayo específica para el analito, en donde sobre la membrana (6), y separadas según un principio de separación ¡nmunocromatográfica de las zonas de ensayo específicas (7, 13) para el analito (3, 1), se dispone una zona de control específica (8, 14) para el analito, y en la solución de ensayo (2) que se debe analizar hay presente y se hace reaccionar un anticuerpo (4, 11) contra el analito (3, 1) que se debe investigar, acoplado o marcado con una sustancia que desencadena una reacción cromática, caracterizado por que además de la solución de ensayo (2), se agrega una sustancia de control (12) acoplada o marcada con una sustancia que desencadena una reacción cromática, por que la membrana ¡nmunocromatográfica (6) se sumerge durante 1 a 2 minutos en la solución de ensayo que se debe analizar, por que el analito (3, 1) y el anticuerpo (4, 11) marcado en exceso, así como eventualmente el producto de reacción del analito y el anticuerpo marcado, son captados por la membrana ¡nmunocromatográfica (6) desde la solución de ensayo (2), y se hacen pasar por la zona de ensayo específica (7, 13) y la zona de control específica (8, 14), así como por una zona de control no específica (15), que contiene un anticuerpo contra la sustancia de control (12), por que para la valoración del procedimiento se determina, en primer lugar, la validez del resultado experimental comparando o midiendo la intensidad del color de la o las zonas de control específicas (8, 14) y/o de la zona de control no específica (15) con una carta de color, y/o por la Intensidad del color de la zona de ensayo específica mediante dispositivos de medición fotométrica, y por que para la determinación cuantitativa del al menos un analito (3, 1) que se debe investigar se miden por fotometría la intensidad de la zona de ensayo (7, 14) y la de la zona de control específica (8, 14), y se comparan con una curva de calibración.

2. Procedimiento inmunocromatográfico según la reivindicación 1, caracterizado por que se determinan cuantitativamente tanto la cantidad del anticuerpo (4, 11) contra el analito (3, 1), que está acoplado o marcado con una sustancia que desencadena una reacción cromática, como la cantidad del anticuerpo contra el analito que se fija sobre la membrana ¡nmunocromatográfica (6).

3. Procedimiento inmunocromatográfico según las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado por que en la dirección de tránsito (9) de la solución de ensayo (2) por la membrana ¡nmunocromatográfica (6), se disponen en primer lugar la o las zonas de ensayo específicas (7, 13) y, a continuación, se encuentran la o las zonas de control específicas (8, 14) y, eventualmente, la zona de control no específica (15).

4. Procedimiento inmunocromatográfico según las reivindicaciones 1, 2 o 3, caracterizado por que se analizan simultáneamente múltiples analitos (3, 1) que se deben investigar.

5. Procedimiento inmunocromatográfico según la reivindicación 4, caracterizado por que en la investigación simultánea de múltiples analitos (3, 1) que se deben investigar, se disponen sobre una membrana ¡nmunocromatográfica múltiples zonas de ensayo (7, 13) y de control (8, 14) específicas, situadas por parejas de manera adyacente o sucesiva y adaptadas a los analitos (3, 1) que se deben investigar.

6. Procedimiento inmunocromatográfico según las reivindicaciones 4 o 5, caracterizado por que las zonas de ensayo (7, 13) y de control (8, 14) adaptadas a los múltiples analitos (3, 1) que se deben investigar simultáneamente, están dispuestas sobre múltiples tiras de ensayo situadas de manera adyacente y que, eventual mente, se pueden separar entre sí.

7. Procedimiento inmunocromatográfico según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado por que la membrana ¡nmunocromatográfica (6) se sumerge durante 2 a 15 minutos en la solución de ensayo (2) que se debe analizar.