Procedimiento para la resolución diastereoisomérica de ácido 5-metiltetrahidrofólico.

Un procedimiento para la separación de una mezcla de diastereoisómeros de ácido (6R,

S)-5- metiltetrahidrofólico o una de sus sales de metal alcalino que comprende la reacción de la mezcla en agua con al menos una base orgánica elegida entre el grupo que consiste en 1-feniletilamina, 1-p-nitrofeniletilamina, 1-pclorofeniletilamina, 1-p-metilfeniletilamina, 1-p-metoxifeniletilamina, 1-(1-naftil)etilamina, 1-(2-naftil)etilamina, bien en una configuración (R,S)- o (R)- o (S)-, para obtener la sal de amina correspondiente, y la recuperación de un diastereoisómero, siendo este último el diastereoisómero natural correspondiente (6S) sustancialmente puro.

DESCRIPCION

Procedimiento para la resolución diastereoisomérica de ácido 5-metiltetrahidrofólico La presente invención se refiere a un procedimiento para la resolución diastereoisomérica de ácido 5metiltetrahidrofólico. La invención describe también una sal cristalina de ácido 5-metiltetrahidrofólico y se dirige además a un procedimiento para la transformación de los diastereoisómeros únicos de sales de 5metiltetrahidrofólico obtenidas por el procedimiento de la invención en el correspondiente ácido libre o en una sal de metal alcalinotérreo.

El ácido 5-metiltetrahidrofólico, es decir ácido (6R, S) -N-[4-[[ (2-amino-1, 4, 5, 6, 7, 8-hexahidro-metil-4-oxo-5-metilpteridinil) metil]amino]benzoil]-L-glutámico -de ahora en adelante 5-MTHF-y sus derivados tienen dos centros asimétricos, uno que pertenece al resto ácido L-glutámico y un segundo centro quiral sobre el carbono en la posición 6 del resto pteridinilo.

La configuración del isómero natural corresponde al ácido (6S) -N-[4-[[ (2-amino-1, 4, 5, 6, 7, 8-hexahidro-5-metil-4-oxopteridinil) metil]amino]benzoil]-L-glutámico, que tiene la siguiente fórmula:

** (Ver fórmula) **

Este diastereoisómero natural, que se encuentra habitualmente en los alimentos, es la forma endógena esencial utilizada y almacenada en el cuerpo humano mientras que el diastereoisómero no natural no es eficaz terapéuticamente ya que se metaboliza poco y lentamente y por ello se excreta tal como es. De acuerdo con esto, es evidente la necesidad de administrar el diastereoisómero natural.

Sin embargo, a la vista de las dificultades para separar los diastereoisómeros eficazmente, el ácido 5metiltetrahidrofólico se usa como una mezcla de diastereoisómeros y como un isómero natural, principalmente en la forma de sales de calcio, como fármaco o un nutrimento para el tratamiento de -por ejemplo-anemias megaloblásticas por carencia de ácido fólico, como un antídoto para mejorar la tolerancia a los antagonistas del ácido fólico, específicamente aminopterina y metotrexato en la terapia contra el cáncer ("rescate antifolato") , para mejorar el efecto terapéutico de pirimidinas fluoradas y para el tratamiento de enfermedades autoinmunes como psoriasis y artritis reumatoide, para mejorar la tolerancia a ciertos antiparasitarios, como trimetoprimasulfametoxazol, y para reducir la toxicidad de dideazatetrahidrofolatos en quimioterapia.

Con el fin tanto de sintetizar como aislar el diastereoisómero natural de varios derivados del ácido fólico, bien sustituido o reducido, entre los cuales es probable que 5-MTHF sea el más estudiado, se han descrito varios métodos en las últimas décadas.

Dada la naturaleza anfótera de estos derivados del ácido fólico y también en vista del hecho de que los isómeros a separar son ya diastereoisómeros, estos métodos de resolución pueden clasificarse básicamente dependiendo de si se aprovechan sus características ácidas o básicas de tales derivados o de la diferente solubilidad de los correspondientes tetrahidrofolatos como ácidos libres.

Entre los procedimientos que explotan las características ácidas de los derivados del ácido fólico, el documento EP 0537842 describe -inter alia-un procedimiento para la separación de 6 (R, S) -5-MTHF y ácido 6 (R, S) -5formiltetrahidrofólico al precipitar -en agua-una mezcla de sus sales inorgánicas, preferiblemente sales de metal alcalino o metal alcalinotérreo, y posterior tratamiento con un ácido fuerte, ajustando finalmente el pH próximo a la neutralidad.

Además, los documentos US 5 194 611 y US 5 382 581 que describen sales de ácido N5-metil-5, 6, 7, 8tetrahidrofólico con ciclohexilamina, diisopropilamina, bencilamina, amoniaco, etanolamina, trietanolamina, 2-dimetilaminoetanol, terc-butilamina, lisina, o arginina, describen un procedimiento para la preparación y separación de tales sales, en presencia de una mezcla de disolventes que contienen agua y al menos un disolvente totalmente miscible en agua, -estando el disolvente preferiblemente en una cantidad de 50-95%-, en los diastereoisómeros únicos (6R) y (6S) , siendo este último posiblemente transformado en las correspondientes sales de metal alcalino o alcalinotérreo.

El documento US 5 457 202 se refiere a un procedimiento para la resolución de ácido (6R, S) -5-metiltetrahidrofólico que comprende tomar el ácido o una de sus sales solubles en agua, en agua y añadir una solución de N-etil-2aminoetilpirrolidina o uno de sus isómeros ópticos en agua, precipitando posteriormente la sal resultante. Calentando

la mezcla de reacción a 40-90ºC, da como resultado la sal de la disolución del ácido 6S, que de este modo se separa de la sal del ácido 6R. La sal del ácido 6S precipita de nuevo al enfriar la disolución. La suspensión de esta última en agua y la adición de una disolución de hidróxido sódico da como resultado la sal de sodio que puede convertirse con, por ejemplo, un hidróxido de un metal alcalinotérreo o cloruro en una sal de metal alcalinotérreo como la sal de calcio. Sin embargo, los rendimiento de (6S) -5-MTHF son pobres, también teniendo en cuenta las repetidas cristalizaciones requeridas, y el procedimiento no representa una alternativa comercial o industrialmente eficaz.

El documento IT 1254954 describe un procedimiento para la preparación del diastereoisómero (6S) de ácido folínico que comprende, en presencia de disolventes orgánicos, preferiblemente metiletilcetona y acetona, la salificación de la mezcla racémica de dicho ácido o del ácido 5-N-formil-5, 6, 7, 8-tetrahidropteroico, con S- (alfa) -metil-p-nitrobencilamina o (S) - (-) -alfa-feniletilamina y la posterior cristalización de la sal que contiene la forma correspondiente ópticamente activa.

Entre los procedimientos que explotan las características básicas de los derivados de ácido fólico, el documento US 5 006 655 describe un procedimiento para la preparación de ácido 5, 10-metenil- (6R) -, 5-formil- (6S) -, o 5-metil- (6S) tetrahidrofólico o una de sus sales que comprende la cristalización fraccionada de ácido 5, 10-metenil- (6R, S) tetrahidrofólico o una de sus sales, que está presente en al menos una concentración del 70% en peso, en presencia de disolventes orgánicos.

El documento US 5 324 836 describe un procedimiento para la preparación de ácido (6S) -y (6R) -tetrahidrofólico y sus sales de adición con ácidos sulfónicos o con ácido sulfúrico que comprende las etapas de hacer reaccionar ácido (6R, S) -tetrahidrofólico con un ácido sulfónico o ácido sulfúrico y la cristalización fraccionada de la sal de adición resultante, preferiblemente en presencia de un inhibidor de oxidación.

El documento US 6 858 731 describe un procedimiento para preparar y concentrar sales de los ésteres de ácido tetrahidrofólico (6S, S) , o (6S, R) , y ácido tetrahidrofólico (6S, S) , o (6S, R) que comprende preparar o disolver diastereoisómeros de sales de adición de ésteres de ácido tetrahidrofólico con ácidos sulfónicos aromátidos en disolventes orgánicos y cristalizarlos.

Entre los procedimientos que aprovechan la diferente solubilidad de los tetrahidrofolatos correspondientes como ácidos libres, el documento US 5 489 684 describe un procedimiento para la preparación de ácido (6S) -5, 6, 7, 8tetrahidrofólico que tiene una pureza diastereoisomérica de al menos 75%, que comprende la cristalización directa a partir de una disolución acuosa de una sal de metal alcalino de la mezcla diastereoisomérica (6R, S) de ácido 5, 6, 7, 8-tetrahidrofólico a la que se le adiciona un ácido fuerte no oxidante o ácido acético a 5-80ºC, ajustando el pH a 4, 8-5, 3.

Además, el documento US 6 271 374 describe ácido (6S) -tetrahidrofólico cristalino que tiene un pureza mayor de 98% y un procedimiento para su preparación que comprende la cristalización de ácido (6S) -o (6R, S) -tetrahidrofólico en agua o en una mezcla de agua y un disolvente orgánico miscible en agua.

En el documento US 5 698 693 se ha propuesto otra resolución donde se describe una separación mediante cromatografía quiral o cristalización fraccionada llevada a cabo sobre los -ésteres de derivados de ácido (6R, S) 5, 6, 7, 8-tetrahidrofólico, posteriormente desprotegido.

La cromatografía en fase quiral se describe en cambio en el documento EP 0627435 refiriéndose a la resolución de mezclas diastereoisoméricas de algunos tetrahidrofolatos.

Sin embargo, cualquiera de estos procedimientos muestran la necesidad de cristalizaciones repetidas, o requieren disolventes orgánicos o sus mezclas con agua, o muestran bajos rendimientos o pureza diastereoisomérica o reactivos caros.

Por lo tanto, es un objetivo general... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para la separación de una mezcla de diastereoisómeros de ácido (6R, S) -5metiltetrahidrofólico o una de sus sales de metal alcalino que comprende la reacción de la mezcla en agua con al menos una base orgánica elegida entre el grupo que consiste en 1-feniletilamina, 1-p-nitrofeniletilamina, 1-pclorofeniletilamina, 1-p-metilfeniletilamina, 1-p-metoxifeniletilamina, 1- (1-naftil) etilamina, 1- (2-naftil) etilamina, bien en una configuración (R, S) -o (R) -o (S) -, para obtener la sal de amina correspondiente, y la recuperación de un diastereoisómero, siendo este último el diastereoisómero natural correspondiente (6S) sustancialmente puro.

2. Un procedimiento según la reivindicación anterior, que comprende la recuperación de al menos un diastereoisómero por cristalización.

3. Un procedimiento según la reivindicación anterior, en el que la sal cristalizada del diastereoisómero se recristaliza al menos una vez.

4. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que al menos un diastereoisómero se transforma en el ácido libre o en una sal de metal alcalinotérreo.

5. Un procedimiento según la reivindicación anterior, en el que el ácido libre se transforma en una sal de metal alcalino o alcalinotérreo.

6. Un procedimiento según la reivindicación 4 ó 5, en el que la sal de metal alcalinotérreo es una sal de calcio.

7. Un procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 4-6, en el que la sal de metal alcalinotérreo se transforma en el ácido libre.

8. Un compuesto cristalino que es una sal de ácido (6S) -5-metiltetrahidrofólico con al menos una base orgánica elegida entre el grupo que consiste en 1-feniletilamina, 1-p-nitrofeniletilamina, 1-p-clorofeniletilamina, 1-pmetilfeniletilamina, 1-p-metoxifeniletilamina, 1- (1-naftil) etilamina, 1- (2-naftil) etilamina, bien en una configuración (R, S) -o (R) -o (S) -.

9. El compuesto según la reivindicación anterior, que se elige entre el grupo que consiste en (R, S) -1feniletilamina 5-metil- (6S) -tetrahidrofolato; (R) -1-feniletilamina 5-metil- (6S) -tetrahidrofolato; (S) -1-feniletilamina 5metil- (6S) -tetrahidrofolato.

10. Uso del compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 8-9, para la separación de una mezcla de diastereoisómeros del ácido (6R, S) -5-metiltetrahidrofólico o una de sus sales de metal alcalino que comprende la reacción de la mezcla en agua con al menos una base orgánica que se elige entre el grupo que consiste en 1feniletilamina, 1-p-nitrofeniletilamina, 1-p-clorofeniletilamina, 1-p-metilfeniletilamina, 1-p-metoxifeniletilamina, 1- (1naftil) etilamina, 1- (2-naftil) etilamina, bien en una configuración (R, S) -o (R) -o (S) -, para obtener la sal de amina correspondiente, y la recuperación de un diastereoisómero, siendo este último el diastereoisómero natural correspondiente (6S) sustancialmente puro.