Formas cristalinas de inhibidores de cinasas.

El compuesto dihidrógeno citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2-hidroxietil)-1H-pirazol-4-il]tieno[3,

2-c]piridin-3- il}fenil)-N'-(3-fluorofenil)urea en una forma cristalina sólida.

Formas cristalinas de inhibidores de cinasas Campo de ¡a invención

La presente invención se refiere a formas cristalinas de sales citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2-hidrox¡et¡l)-1H-p¡razol- 4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-f)uorofen¡l)urea, a procedimientos para la preparación de las formas cristalinas, a formulaciones farmacéuticas de las mismas y a métodos de tratamiento del cáncer.

Antecedentes de ia invención

La mitosis es un proceso por el cual una copia completa de un genoma duplicado es segregada por los microtúbulos del huso acromático en dos células hijas. Se ha encontrado que las Aurora-cinasas, reguladoras clave de la mitosis, necesarias para la estabilidad del genoma, se hiperexpresan en tumores humanos. Existe por ello una necesidad en técnicas terapéuticas de composiciones que inhiban las Aurora-cinasas, de composiciones que comprendan los inhibidores y de métodos para tratar enfermedades en cuyo transcurso las Aurora-cinasas no están reguladas o están hiperexpresadas

La fosforilación reversible de proteínas es uno de los principales mecanismos bioquímicos que median en la señalización de células eucariotas. Esta reacción está catalizada por proteínas cinasas que transfieren el grupo g-fosfato del ATP a grupos hidroxilo en las proteínas diana. Existen 518 enzimas de este tipo en el genoma humano, de las cuales -90 catalizan selectivamente la fosforilación de grupos hidroxilo de la tirosina. Las tirosina cinasas citosólicas residen en el interior de las células, mientras que las tirosina cinasas de receptores (RTKs) poseen dominios extracelulares e intracelulares y funcionan como receptores de la superficie celular que abarcan toda la membrana. Como tales, las RTKs median en las respuestas celulares a señales del entorno y facilitan una amplia gama de procesos celulares incluyendo la proliferación, la migración y la supervivencia.

Las vías de señalización de las RTKs normalmente están muy reguladas, a pesar de lo cual se ha mostrado que una hiperactivación de las mismas promueve el crecimiento, la supervivencia y la metástasis de células cancerosas. Una señalización desregulada de las RTKs se produce por hiperexpresión o mutación de genes y se ha correlacionado con la progresión de diversos cánceres humanos.

La familia de receptores de VEGF (VEGFR) consiste en tres RTKs, KDR (receptor que contiene el dominio de inserción de cinasa; VEGFR2), FLT1 (tirosina cinasa tipo Fms; VEGFR1) y FLT4 (VEGFR3). Estos receptores median en la función biológica de los factores de crecimiento del endotelio vascular (VEGF-A, -B, -C, -D, -E y el factor de crecimiento de la placenta (P1GF)), una familia de glicoproteínas homodímeras que se unen a los receptores de VEGF con diferentes afinidades.

El KDR es el principal mediador de los efectos mitógenos, angiogénicos y potenciadores de la permeabilidad de VEGF-A, denominado en lo sucesivo VEGF. Hay muchos tipos diferentes de células que son capaces de producir VEGF, sin embargo, su actividad biológica está limitada predominantemente a la vasculatura a través de la expresión selectiva de KDR en las células endoteliales. No resulta sorprendente entonces que el eje VEGF/KDR sea un mediador primario de la angiogénesis, el medio por el cual se forman nuevos vasos sanguíneos a partir de vasos preexistentes.

El FLT1 se une a VEGF, VEGF-B y al factor de crecimiento placentario. El FLT1 se expresa sobre la superficie de células musculares lisas, monocitos y células madre hematopoyéticas además de células endoteliales. La activación de la señalización de FLT1 da como resultado la movilización de células progenitoras endoteliales derivadas de la médula que son reclutadas por los tumores en donde contribuyen a la formación de nuevos vasos sanguíneos.

El FLT4 media en la señalización de VEGF-C y VEGF-D, que median en la formación de vasos linfáticos asociados a tumores (linfangiogénesis). Los vasos linfáticos comprenden una de las rutas por las cuales las células cancerosas se diseminan desde los tumores sólidos durante la metástasis. La familia de receptores de PDGF (PDGFR) consiste en cinco RTKs, PDGFR-a y -b, CSFIR, KIT y FLT3.

El CSF-1R está codificado por el homólogo celular del oncogén retrovírico v-fms y es un importante regulador del desarrollo de los macrófagos. Los macrófagos son componentes frecuentes del estroma tumoral y se ha mostrado que modifican la matriz extracelular de una manera beneficiosa para el crecimiento y la metástasis del tumor.

El KIT es expresado por células progenitoras hematopoyéticas, mastocitos, células germinales y por las células marcapasos en el intestino (células intersticiales de Cajal). Contribuye a la progresión del tumor mediante dos mecanismos generales, a saber, la estimulación autocrina por su ligando, el factor de células madre (SCF), y a través de mutaciones que dan como resultado una actividad cinasa independiente del ligando.

El FLT3 se expresa normalmente sobre las células madre hematopoyéticas en donde su interacción con el ligando de FLT3 (FL) estimula la supervivencia, la proliferación y la diferenciación de las células madre. Además de su hiperexpresión en varias células de leucemia, el FLT3 muta con frecuencia a formas malignas hematológicas en

aproximadamente un tercio de los pacientes con leucemia mieloide aguda (LMA) que contiene mutaciones activantes.

Por ello es deseable la identificación de pequeños compuestos eficaces que inhiban específicamente la transducción de señales y la proliferación celular mediante la modulación de la actividad de tirosina cinasas para regular y modular una proliferación, diferenciación o metabolismo celular anormal o inapropiado. En particular, sería beneficiosa la identificación de métodos y compuestos que inhiban específicamente la función de una tirosina cinasa que sea esencial para los procesos angiogénicos o la formación de una hiperpermeabilidad vascular que conduzca a edema, ascites, efusiones, exudados y extravasación macromolecular y deposición de la matriz, así como trastornos asociados.

Se han identificado compuestos que inhiben proteínas cinasas tales como las Aurora-cinasas y las familias de cinasas de VEGFR y PDGFR, que incluyen N-(4-(4-am¡no-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-il]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-¡l}fen¡l)- N'-(3-fluorofenil)urea. Estos compuestos, y los métodos para prepararlos, se describen en el documento de solicitud de patente de EE UU. n° 12/632183 (de aquí en adelante "la solicitud *183").

Ahora se ha descubierto que las sales citrato de N-(4-(4-am¡no-7-[1-(2-h¡drox¡etil)-1H-p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3- il}fen¡l)-N'-(3-fluorofenil)urea se pueden convertir en formas cristalinas, que se pueden utilizar ventajosamente como ingredientes farmacéuticos activos en la terapia del cáncer. Para ese propósito, estas formas cristalinas se convierten en formulaciones farmacéuticas.

Una forma cristalina es la forma en la que la posición relativa de las moléculas entre sí se organiza según una estructura tridimensional de capas cristalinas. Los polimorfos son diferentes formas cristalinas del mismo compuesto, como resultado de una disposición diferente de las moléculas en el estado sólido. Los polimorfos difieren entre sí en sus propiedades físicas, pero no en su composición química.

El polimorfismo es particularmente interesante en el desarrollo de formas de dosificaciones farmacéuticas adecuadas. Ciertas formas polimórficas pueden mostrar estabilidad y capacidad de almacenamiento superiores, para dar como resultado un producto farmacéutico con mayor vida útil. Además, ciertas formas polimórficas se fabrican más fácilmente con alta pureza en grandes cantidades. Un hecho clave es que los polimorfos de un ingrediente farmacéuticamente activo pueden tener diferentes solubilidades en agua y tasas de disolución, lo que puede tener consecuencias terapéuticas debido a las diferencias potenciales de biodisponibilidad entre los polimorfos de un mismo compuesto.

La presente invención proporciona formas cristalinas de sales citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2-hidrox¡et¡l)-1H-p¡razol- 4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡din-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-fluorofen¡l)urea que tienen propiedades beneficiosas en una o varias de las siguientes características: la capacidad de ser formuladas en una forma de dosificación farmacéutica, una vida útil adecuada en forma de dosificación farmacéutica y/o la capacidad de ser administradas de manera efectiva en una forma de dosificación farmacéutica.

Compendio de la Invención

En una realización, la Invención proporciona dihidrógeno citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2-hidrox¡et¡l)-1H-p¡razol-4- ¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-fluorofenil)urea... [Seguir leyendo]

1. El compuesto dihidrógeno citrato de N-(4-{4-am¡no-7-[1-(2-hidrox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3- il}fen¡l)-N'-(3-fluorofenil)urea en una forma cristalina sólida.

2. El compuesto dihidrógeno citrato de N-(4-{4-am¡no-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-il]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3- il}fen¡l)-N'-(3-fluorofenil)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma I, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en una cualquiera o varias de las siguientes posiciones: 11,80, 14,59, 15,95, 21,38, 26,12° 28, ± 0,2° 28.

3. El compuesto según la reivindicación 2, en el que la forma cristalina es la Forma I, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en cada una de dichas posiciones.

4. El compuesto según la reivindicación 2, en el que la forma cristalina es la Forma I, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en cada una de dichas posiciones: 7,56, 7,96, 11,80, 12,42, 13,44, 14,59, 15,66, 15,95, 16,69, 21,38, 22,40, 22,82, 23,98, 24,50, 24,99, 26,12° 28, ± 0,2° 28.

5. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que la forma cristalina es un monohidrato.

6. Un procedimiento para la preparación de dihidrógeno citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2-hidrox¡et¡l)-1H-p¡razol- 4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡rid¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-fluorofen¡l)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma I según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, que comprende:

a) proporcionar una mezcla que comprende (i) N-(4-[4-am¡no-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]pir¡d¡n-3- il}fen¡l)-N'-(3-fluorofenil)urea, agua, acetona y ácido cítrico;

b) hacer que la Forma I cristalina de dihidrógeno citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-il]t¡eno[3,2-

c) p¡rid¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-fluorofen¡l)urea exista en la mezcla, comprendiendo adicionalmente aislar el dihidrógeno citrato de N-(4-{4-am¡no-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-f)uorofen¡l)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma I.

7. El compuesto hidrógeno citrato de N-(4-{4-am¡no-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-¡l]tieno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-

il}fen¡l)-N'-(3-fluorofenll)urea en una forma cristalina sólida.

8. El compuesto hidrógeno citrato de N-(4-{4-am¡no-7-[1-(2-h¡droxiet¡l)-1H-p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-

¡l}fenll)-N'-(3-fluorofenil)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma II, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en una cualquiera o varias de las siguientes posiciones: 8,65, 15,18, 24,47, 28,02° 28, ± 0,2° 28.

9. El compuesto según la reivindicación 8, en el que la forma cristalina es la Forma II, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en cada una de dichas posiciones.

10. El compuesto según la reivindicación 8, en el que la forma cristalina es la Forma II, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en cada una de dichas posiciones: 5,71, 6,30, 7,27, 8,65, 9,80, 13,06, 14,31, 15,18, 15,92, 16,68, 17,71,20,17, 21,98, 23,30, 24,47, 26,11,28,02° 28, ±0,2° 28.

11. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 7-10, en el que la forma cristalina es un hidrato.

12. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1-5 y 7-11 y uno o varios excipientes farmacéuticamente aceptables.

13. Un procedimiento para la preparación de hidrógeno citrato de N-(4-[4-amino-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-pirazol-4- ¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-f)uorofen¡l)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma II según cualquiera de las reivindicaciones 7-11, que comprende:

a) proporcionar una mezcla que comprende (i) N-(4-[4-am¡no-7-[1-(2-h¡drox¡etil)-1H-p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3- ¡l}fenil)-N'-(3-f!uorofen¡l)urea, agua, tetrahidrofurano y ácido cítrico;

b) hacer que la Forma II cristalina de hidrógeno citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-il]t¡eno[3,2-

c) p¡r¡d¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-f!uorofen¡l)urea exista en la mezcla, comprendiendo adicionalmente aislar el hidrógeno citrato de N-(4-{4-am¡no-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-f)uorofen¡l)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma II.

14. Un compuesto o una composición farmacéutica seleccionada a partir de

(a) dihidrógeno citrato de N-(4-{4-am¡no-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡rid¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3- f!uorofenil)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma I, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en una cualquiera o varias de las siguientes posiciones: 11,80, 14,59,

15,95, 21,38, 26,12° 28, ± 0,2° 28,

(b) una composición farmacéutica que comprende dihidrógeno citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2-hidrox¡et¡l)- 1H-p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-f)uorofen¡l)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma I, caracterizada al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en una cualquiera o varias de las siguientes posiciones: 11,80, 14,59, 15,95, 21,38, 26,12° 26, ± 0,2° 26 y uno o varios excipientes farmacéuticamente aceptables,

(c) hidrógeno citrato de N-(4-{4-am¡no-7-[1-(2-h¡drox¡etil)-1H-p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3- fluorofenil)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma II, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en una cualquiera o varias de las siguientes posiciones: 8,65, 15,18, 24,47, 28,02° 26, ±0,2° 26 y

(d) una composición farmacéutica que comprende hidrógeno citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2-hidrox¡et¡l)-1H- p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡rid¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-fluorofen¡l)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma II, caracterizada al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en una cualquiera o varias de las siguientes posiciones: 8,65, 15,18, 24,47, 28,02° 26, ± 0,2° 26 y uno o varios excipientes farmacéuticamente aceptables, para uso en el tratamiento del cáncer en un mamífero.

15. El compuesto o la composición farmacéutica para uso según la reivindicación 14, en donde la Forma I cristalina de dihidrógeno citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3- fluorofenil)urea o la composición farmacéutica, o la Forma II cristalina de hidrógeno citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2- h¡drox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡rid¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-fluorofen¡l)urea o la composición farmacéutica se administra a través de una vía oral, parenteral, sublingual, bucal, ¡ntranasal, pulmonar, tópica, transdérmica, intradérmica, ocular, ótica, rectal, vaginal, intragástrica, intracraneal, intrasinovial o intraarticular.

16. El compuesto o la composición farmacéutica para uso según la reivindicación 14, en donde el cáncer es síndrome mielodisplásico, leucemia mieloide aguda, cáncer colorrectal, cáncer de pulmón de células no pequeñas y cáncer de ovario.

17. Dihidrógeno citrato de N-(4-{4-am¡no-7-[1-(2-h¡drox¡etil)-1H-p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3- fluorofenil)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma I, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en una cualquiera o varias de las siguientes posiciones: 11,80, 14,59,

15.95, 21,38, 26,12° 26, ± 0,2° 26 o hidrógeno citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-il]t¡eno[3,2- c]p¡rid¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-fluorofen¡l)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma II, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en una cualquiera o varias de las siguientes posiciones: 8,65, 15,18, 24,47, 28,02° 26, ± 0,2° 26 para uso en el tratamiento del cáncer en un mamífero disolviendo dicho dihidrógeno citrato de N-(4-{4-am¡no-7-[1-(2-h¡droxiet¡l)-1H-p¡razol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3- fluorofenil)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma I, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en una cualquiera o varias de las siguientes posiciones: 11,80, 14,59,

15.95, 21,38, 26,12° 26, ± 0,2° 26 o hidrógeno citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-il]t¡eno[3,2- c]p¡rid¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-fluorofen¡l)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma II, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en una cualquiera o varias de las siguientes posiciones: 8,65, 15,18, 24,47, 28,02° 26, ± 0,2° 26 en un disolvente farmacéuticamente aceptable o una mezcla de disolventes, y administrando la solución resultante en una cantidad terapéuticamente eficaz a un sujeto que padece la enfermedad.

18. Dihidrógeno citrato de N-(4-{4-am¡no-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-pirazol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3- fluorofeniljurea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma I, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en una cualquiera o varias de las siguientes posiciones: 11,80, 14,59,

15.95, 21,38, 26,12° 26, ± 0,2° 26 o hidrógeno citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-p¡razol-4-il]t¡eno[3,2- c]p¡r¡din-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-fluorofen¡l)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma II, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en una cualquiera o varias de las siguientes posiciones: 8,65, 15,18, 24,47, 28,02° 26, ± 0,2° 26 para uso en el tratamiento del cáncer en un mamífero mediante la dispersión de dicho dihidrógeno citrato de N-(4-{4-am¡no-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-pirazol-4-¡l]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3- il}fenil)-N'-(3-fluorofenil)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma I, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en una cualquiera o varias de las siguientes posiciones: 11,80, 14,59, 15,95, 21,38, 26,12° 26, ± 0,2° 26 o hidrógeno citrato de N-(4-{4-amino-7-[1-(2-h¡drox¡et¡l)-1H-pirazol-4- il]t¡eno[3,2-c]p¡r¡d¡n-3-¡l}fen¡l)-N'-(3-fluorofenil)urea en una forma cristalina sólida, en donde la forma cristalina es la Forma II, caracterizado al menos por un pico de difracción de rayos X en polvo en una cualquiera o varias de las siguientes posiciones: 8,65, 15,18, 24,47, 28,02° 26, ± 0,2° 26 en un vehículo polímero farmacéuticamente aceptable, y la administración de la solución resultante en una cantidad terapéuticamente eficaz a un sujeto que padece la enfermedad.