Células y mamíferos no humanos modificados genéticamente.

Un roedor o célula de roedor modificado(a) genéticamente, caracterizado por que el gen que codifica el polipéptido MASP-2 endógeno y/o el gen que codifica el polipéptido MAp19 endógeno está(n) ausente(s) o parcialmente ausente(s) o desorganizados de tal modo que no se produce el polipéptido MASP-2 endógeno de roedor y/o MAp19 endógeno de roedor.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/GB2005/050086.

Solicitante: THE UNIVERSITY OF LEICESTER.

Nacionalidad solicitante: Reino Unido.

Dirección: RESEARCH AND BUSINESS DEVELOPMENT OFFICE, UNIVERSITY ROAD LEICESTER LE1 7RH REINO UNIDO.

Inventor/es: FUJITA,TEIZO, SCHWAEBLE,HANS-WILHELM, STOVER,CORDULA MARGARET.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A01K67/027 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA.A01K CRIA; AVICULTURA, PISCICULTURA, APICULTURA; PESCA; OBTENCION DE ANIMALES, NO PREVISTA EN OTRO LUGAR; NUEVAS RAZAS DE ANIMALES.A01K 67/00 Cría u obtención de animales, no prevista en otro lugar; Nuevas razas de animales. › Nuevas razas de vertebrados.
  • A61K38/00 A […] › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L;   composiciones a base de jabón C11D). › Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00).
  • C12N15/85 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › para células animales.
  • C12N9/64 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.; Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › que provienen de tejido animal, p. ej. renina.

PDF original: ES-2535639_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Células y mamíferos no humanos modificados genéticamente Campo de la invención

La presente Invención se refiere a mamíferos no humanos modificados genéticamente, en particular a roedores modificados genéticamente, tales como ratones, que no producen cantidad alguna de polipéptido endógeno serina- proteasa-2 asociado a la lectina fijadora de manano (MASP-2). La Invención se refiere también a células no humanas modificadas genéticamente, en particular células del tallo embrionario, especialmente células de roedores tales como células de ratón, que no producen cantidad alguna del polipéptido MASP-2 endógeno. La Invención se refiere también a células no humanas modificadas genéticamente, en particular células del tallo embrionario y mamíferos no humanos modificados genéticamente producidos a partir de ellas, y su uso en la producción de mamíferos y células no humanos de los cuales se han delecionado o desorganizado dentro del genoma los genes endógenos MASP-2. Aspectos de la Invención se refieren también a mamíferos y células no humanos modificados genéticamente que no producen cantidad alguna de proteína 19 endógena asociada a lectina fijadora de manano (MAp 19).

Antecedentes de la invención

El sistema del complemento proporciona un mecanismo de acción temprana para iniciar y ampliar la respuesta inflamatoria a la infección microbiana y otras agresiones agudas (Liszewski, M.K. y J.P. Atklnson, 1993, en Fundamental Immunology, tercera edición, editado por W.E. Paul, Raven Press, Ltd., Nueva York). Si bien la activación del complemento proporciona una defensa valiosa de primera línea contra patógenos potenciales, las actividades del complemento que promueven una respuesta inflamatoria protectora pueden representar también una amenaza potencial para el hospedador (Kalll, K.R., et al., Springer Semin. Immunopathol. 15:417- 431, 1994; Morgan, B.P., Eur. J. Clinical Investlg. 24:219-228, 1994). Por ejemplo, los productos proteolítlcos de C3 y C5 reclutan y activan los neutrófilos. Estas células activadas están indiscriminadas en su liberación de enzimas destructoras y pueden causar deterioro oigánlco. Además, la activación del complemento puede causar la deposición de componentes liticos del complemento en las células hospedadoras cercanas así como en las dianas microbianas, dando como resultado lisis de las células hospedadoras.

El sistema del complemento se ha visto implicado como contribuyente a la patogénesis de numerosos estados de enfermedad agudos y crónicos, que incluyen: infarto de miocardio, revascularizaclón subsiguiente a derrame cerebral, ARDS, lesión de reperfusión, choque séptico, fuga capilar subsiguiente a quemaduras témnlcas, inflamación pos-derivación cardiopulmonar, rechazo de trasplantes, artritis reumatolde, esclerosis múltiple, mlastenla grave, y enfermedad de Alzheimer. En la práctica totalidad de estas afecciones, el complemento no es la causa, pero es uno de los varios factores implicados en la patogénesis. Sin embargo, la activación del complemento puede ser un mecanismo patológico importante y representa un punto eficaz para control clínico en muchos de estos estados de enfermedad. El reconocimiento creciente de la importancia de una lesión tisular mediada por el complemento en una diversidad de estados de enfermedad pone de manifiesto la necesidad de fármacos eficaces inhibidores del complemento. No ha sido aprobado fármaco alguno para uso humano que esté dirigido a e inhiba específicamente la activación del complemento.

En la actualidad, está aceptado generalmente que el sistema del complemento puede ser activado por 3 vías distintas: la vía clásica, la vía de lectina, y la vía alternativa. La vía clásica se desencadena usualmente por fijación de anticuerpo a una partícula extraña (es decir, un antígeno), y requiere por tanto exposición previa a dicho antígeno para la generación del anticuerpo específico. Dado que la activación de la vía clásica está asociada con el desarrollo de una respuesta inmune, la vía clásica forma parte el sistema inmune adquirido. En contraste, tanto la vía de lectina como la vía alternativa son independientes de la inmunidad clonal yforman parte del sistema inmune innato.

El primer paso en la activación de la vía clásica es la fijación de una molécula de reconocimiento específica, C1q, a las IgG e IgM fijadas al antígeno. La activación del sistema del complemento da como resultado la activación secuendal de zimógenos serina-proteasa. C1q está asociada con las proenzimas serina-proteasa C1ry C1s como un complejo denominado C1 y, después de la fijación de C1q a un complejo inmune, la escisión auto-proteolítica del sitio Arg-lie de C1r va seguida por la activación por C1r de C1s, que adquiere con ello la capacidad de escindir C4 y C2. La escisión de C4 en dos fragmentos, designados C4a yC4b permite que los fragmentos C4b formen enlaces covalentes con grupos hidroxilo o amino adyacentes y la generación subsiguiente de la convertasa C3 (C4b2b) por interacción no covalente con el fragmento C2b de C2 activado. La convertasa C3 (C4b2b) activa C3 conduciendo a la generación de la convertasa C5 (C4b2b3b) y la formación del complejo de ataque de la membrana (C5b-9) que puede causar lisis microbiana. Las formas activadas de C3 y C4 (C3b y C4b) se depositan covalentemente en las superficies diana extrañas, que son reconocidas por receptores del complemento en fagocitos múltiples.

Independientemente, el primer paso en la activación del sistema del complemento por la vía de lectina es también la fijación de moléculas de reconocimiento específicas, que va seguida por la activación de se rina-p roteas as asociadas. Sin embargo, más bien que la fijación de cotejos inmunes porClq, las moléculas de reconocimiento en la

vía de lectina son proteínas séricas fijadoras de carbohidratos (lectina fijadora de manano (MBL), ficolina H, ficolina M, y ficolina L) (Lu, J., et al., Biochim. Biophys. Acta 1572:387-4, 22). Ikeda et al. demostraron por primera vez que, al igual que C1q, MBL podría activar el sistema del complemento después de fijación a eritrocitos recubiertos de manano de levadura de una manera dependiente de C4 (Ikeda, K., et al., J. Biol. Chem. 262:7451- 7454, 19 8 7). MBL, un miembro de la familia de proteínas colectinas, es una lectina dependiente de calcio que fija carbohidratos con 3 y4 grupos hidroxi orientados en el plano ecuatorial del anillo de piranosa. Ligandos prominentes para MBL son por tanto D-manosa y N-acetil-D-glucosamina, mientras que los carbohidratos que no se ajustan a este requerimiento estérico tienen afinidad indetectable para MBL (Weis, W.I., et al., Nature 36:127-134,1992). La interacción entre MBL y los azúcares monovalentes es extremadamente débil, con constantes de disociación comprendidas típicamente en el campo 2 mM. MBL consigue la fijación fuerte específica a ligandos glucano por interacción simultánea con residuos monosacáridos múltiples (Lee, R.T., et al., Archiv. Biochem. Biophys. 299:129- 136, 1992). MBL reconoce los patrones de carbohidrato que decoran comúnmente microorganismos tales como bacterias, levadura, parásitos y ciertos virus. En contraste, MBL no reconoce D-galactosa y ácido siálico, los azúcares penúltimo y último que decoran usualmente los glicoconjugados complejos `maduros presentes en las glicoproteínas plasmáticas y de la superficie celular de los mamíferos. Se cree que esta especificidad de fijación contribuye a la protección contra la autoactivación. Sin embargo, MBL se fija de hecho con afinidad alta a agrupaciones de glucanos `precursores ricos en mañosa en las glicoproteínas unidas a N y los glicolípidos secuestrados en el retículo endoplásmico y el Golgi de las células de mamífero (Maynard, Y., et al., J. Biol. Chem. 257:3788-3794, 1982). Por tanto, las células deterioradas son dianas potenciales para la activación de la vía de lectina por fijación de MBL.

Las ficolinas poseen un tipo de dominio de lectina diferente de MBL, denominado el dominio de tipo fibrinógeno. Las ficolinas fijan residuos azúcar de una manera independiente de Ca++. En los humanos, se han identificado tres clases de ficolinas, ficolina L, ficolina M y ficolina H. Las dos ficolinas del suero ficolina Lyficolina H tienen en común una especificidad para N-acetil-D-glucosamina; sin embargo, la ficolina H se fija también a N-acetil-D-galactosamina. La diferencia en especificidad de azúcares de ficolina L, ficolina H y MBL significa que las diferentes lectinas pueden ser complementarias y estar dirigidas a glicoconjugados diferentes, aunque solapantes. Este concepto está respaldado por un informe reciente según el cual, de las lectinas conocidas en la vía de lectina, únicamente ficolina L se fija específicamente... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un roedor o célula de roedor modificado(a) genéticamente, caracterizado por que el gen que codifica el polipéptido MASP-2 endógeno y/o el gen que codifica el polipéptido MAp19 endógeno está(n) ausente(s) o parcialmente ausente(s) o desorganizados de tal modo que no se produce el polipéptido MASP-2 endógeno de roedor y/o MAp19 endógeno de roedor.

2. Un roedor o célula de roedor modificado(a) genéticamente según la reivindicación 1, caracterizado por que el gen que codifica el polipéptido MASP-2 está desorganizado del genoma de tal modo que no se produce el polipéptido MASP-2 endógeno de roedor.

3. Un roedor o célula de roedor modlficado(a) genéticamente según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que (I) el mismo puede obtenerse o se obtiene por deleclón deliberada de prácticamente todas las secuencias endógenas del gen MASP-2 y/o MAp19 y/o (¡I) están presentes en el genoma uno o más marcadores seleccionabas, en donde el o los marcadores seleccionabas es/son uno o más marcadores seleccionares seleccionados de un grupo que comprende un gen de resistencia a neomlclna, un gen de resistencia a puromlclna, y un gen de resistencia a higromicina.

4. Un roedor o célula de roedor modlficado(a) genéticamente según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que es un ratón o célula de ratón.

5. Una célula de roedor modificada genéticamente según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizada por que la célula de roedor es una célula del tallo embrionario.

6. Un roedor modificado genéticamente de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, derivado de un roedor modificado genéticamente de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

7. Un roedor modificado genéticamente de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, derivado de una célula de roedor modificada genéticamente de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

8. Una célula de roedor modificada genéticamente de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 derivada de un roedor modificado genéticamente de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

9. Un roedor o célula de roedor modlficado(a) genéticamente, caracterizado por que los exones 1, 11 y 12 del gen MASP-2 endógeno están deleclonados del genoma.

1. Un método para producir una célula de roedor modificada genéticamente que comprende: transfectar una célula de roedor con un constructo de dlrecclonamlento para integración aguas arriba de, o dentro del gen MASP-2 o MAp19, comprendiendo dicho constructo de dlreccionamiento una secuencia de recombinación de direccionamiento y un marcador seleccionare, seleccionar una célula en la cual está presente el marcador seleccionare y someter a cribado dicha célula respecto a Integración de la secuencia de recombinación, en donde dicha célula modificada genéticamente se caracteriza porque el gen que codifica el polipéptido MASP-2 endógeno y/o el gen que codifica el polipéptido MAp19 endógeno está/están ausentes o parcialmente ausentes o desorganizados de tal modo que el polipéptido MASP-2 endógeno de roedor y/o MAp19 endógeno de roedor no se produce.

11. Un método según la reivindicación 1, caracterizado por que (I) la célula de roedor modificada genéticamente es una célula de ratón y/o (¡I) la célula de roedor modificada genéticamente es una célula del tallo embrionario.

12. El uso de una célula del tallo embrionario de la reivindicación 5, o una célula que puede obtenerse por un método de cualquiera de las reivindicaciones 1 u 11, para la producción de un roedor modificado genéticamente según la reivindicación 1.

13. Un método para producir un roedor modificado genéticamente capaz de expresar uno o más genes exógenos, que comprende reproducir un roedor modificado genéticamente, caracterizado por que el gen que codifica el polipéptido MASP-2 endógeno y/o el gen que codifica el polipéptido MAp19 endógeno está/están ausente(s) o parcialmente ausente(s) o desorganizado^) de tal modo que el polipéptido MASP-2 endógeno de roedor y/o el polipéptido MAp19 endógeno de roedor no se produce(n), con un roedor compatible que codifica y es capaz de expresar uno o más genes exógenos, para obtener progenie heteroclgótlca para el uno o más genes exógenos, y cruzar opcionalmente la progenie heteracigótica para producir progenie homocigótica respecto al uno o más genes exógenos.

14. Un método para producir un roedor o célula de roedor modificado(a) genéticamente capaz de expresar uno o más genes exógenos, que comprende introducir uno o más genes exógenos en la célula de roedor, caracterizado por que el gen que codifica el polipéptido MASP-2 endógeno y/o el gen que codifica el

polipéptido endógeno MAp19 está/están ausentes o parcialmente ausentes o desorganizados según las reivindicaciones 1 a 5 u 8.

15. Un método según la reivindicación 14, caracterizado por que la célula de roedor es una célula del tallo embrionario, en donde se introducen uno o más genes exógenos por transfección o la célula de roedores un oocito (célula huevo), en donde los uno o más genes exógenos se introducen por microinyección de DNA.

16. Un método según cualquiera de las reivindicaciones 14 ó 15, caracterizado porque los uno o más genes exógenos se insertan en el genoma del roedor o la célula de roedor.

17. Un método según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16, caracterizado por que el roedor modificado genéticamente es un ratón, en donde el gen o genes exógenos es un gen MASP-2 humano o MAp19 humano.

18. Un método según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, caracterizado por que el gen o genes exógenos son un gen humano o genes humanos.

19. Un método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en el que los exones 1, 11, y 12 del gen MASP-2 endógeno están delecionados y/o el exón 5 del gen MAp19 endógeno está delecionado.

2. Un roedor o célula de roedor modificado(a) genéticamente, caracterizado por que es capaz de expresar uno o más genes exógenos y por que el gen que codifica el polipéptido MASP-2 endógeno y/o el gen que codifica el polipéptido MAp19 endógeno está/están ausentes o parcialmente ausentes o desorganizados de tal manera que el polipéptido MASP-2 endógeno de roedor y/o el polipéptido MAp19 endógeno de roedor no se produce, que puede obtenerse por un método de cualquiera de las reivindicaciones 14 a 19.

21. Un método para producción de un anticuerpo dirigido contra una proteína MASP-2 humana y/o una proteína MAp19 humana, que comprende administrar una proteína MASP-2 humana y/o una proteína MAp19 humana a un roedor respectivo modificado genéticamente según la reivindicación 1 ó 2.

22. El método de la reivindicación 21, en donde el roedor modificado genéticamente es un ratón.

23. Un roedor o célula de roedor modificado(a) genéticamente según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el exón 5 del gen MASP-2 endógeno está delecionado.

24. Un roedor o célula de roedor modificado(a) genéticamente según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado por que carece de una respuesta de la vía del complemento de lectina.


 

Patentes similares o relacionadas:

Animales no humanos que tienen un gen de un ligando inductor de la proliferación humanizado, del 11 de Marzo de 2019, de REGENERON PHARMACEUTICALS, INC.: Un roedor modificado genéticamente cuyo genoma comprende un reemplazo de un fragmento genómico que comprende los exones 2-5 y la porción codificante del exón 6 de […]

Método para el desarrollo eficiente de células madre pluripotentes inducidas, del 6 de Marzo de 2019, de KYOTO UNIVERSITY: Un método de producción de células iPS, que comprende poner en contacto (a) Oct3/4 o un ácido nucleico que lo codifique, (b) Klf4 o un ácido nucleico que […]

Péptidos de inductor de metaloproteinasa de matriz extracelular (emmprin) y anticuerpos de unión, del 28 de Febrero de 2019, de TECHNION RESEARCH & DEVELOPMENT FOUNDATION LIMITED: Un péptido aislado de hasta 25 aminoácidos, que comprende una secuencia como se establece: GHRWX1X2GGX3VLX4 (SEQ ID NO.: 13) en donde X1 es seleccionado […]

Aumento de la expresión de un transgén en células eucariotas mediante la reducción del ARN de interferencia, del 27 de Febrero de 2019, de DANISCO US INC: Procedimiento para aumentar el nivel de expresión de un transgén en células fúngicas, que comprende: la introducción de una alteración genética en las células […]

Vectores y células hospedadoras que comprenden un promotor de SV40 modificado para la expresión de proteínas, del 20 de Febrero de 2019, de AbbVie Biotechnology Ltd: Una célula de ovario de hámster chino (CHO) transfectada de forma estable con un vector, en donde el vector comprende: (i) un casete de expresión, donde el casete […]

Elemento de ADN que tiene actividad de aumento de expresión de un gen exógeno, del 20 de Febrero de 2019, de DAIICHI SANKYO COMPANY, LIMITED: Un polinucleótido que consiste en una secuencia de polinucleótido representada por la SEC ID Nº: 3 en el listado de secuencias.

Métodos y composiciones para la modificación dirigida de un genoma, del 18 de Febrero de 2019, de REGENERON PHARMACEUTICALS, INC.: Un método in vitro para modificar un genoma en un locus genómico de interés en una célula madre embrionaria (ES) de ratón, que comprende: poner en […]

Terapia génica par la enfermedad de Niemann-Pick tipo A, del 13 de Febrero de 2019, de GENZYME CORPORATION: Un primer vector vírico que comprende un transgén que codifica un inmunógeno; y un segundo vector vírico que comprende un transgén que codifica el inmunógeno […]

Otras patentes de la CIP C12N9/64