Bacteria Lawsonia intracellularis de un nuevo serotipo, vacuna basada en esa bacteria, anticuerpos adecuados para diagnosticar el nuevo serotipo de Lawsonia intracellularis e hibridomas para producir dichos anticuerpos.

Bacteria Lawsonia intracellularis de un serotipo que es reactivo con el anticuerpo monoclonal INT-LIC-02-02 tal como el producido por el hibridoma INT-LIC-02-02 depositado en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos del Instituto Pasteur de París,

Francia, con el nº CNCM I-4049, caracterizada por que no es reactiva con el anticuerpo INT-LIC-01-28 tal como el producido mediante el hibridoma INT-LIC-01-28 depositado en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos del Instituto Pasteur de París, Francia, con el nº CNCM I- 4048.

Bacteria Lawsonia intracellularis de un nuevo serotipo, vacuna basada en esa bacteria, anticuerpos adecuados para diagnosticar el nuevo serotipo de Lawsonia intracellularis e hibridomas para producir dichos anticuerpos

La presente invención está relacionada con bacterias Lawsonia intracellularis de un nuevo serotipo, con vacunas para la protección contra una infección por Lawsonia intracellularis basadas en esas nuevas bacterias, con anticuerpos adecuados para diagnosticar el nuevo serotipo de Lawsonia intracellularis y con hibridomas para producir dichos anticuerpos.

La enteropatía proliferativa (EP, también denominada enteritis o ileítis) en prácticamente todos los animales (seres humanos, conejos, caballos, perros, zorros, avestruces, hurones, cobayas, etc.), en particular en cerdos, presenta un signo clínico y síndrome patológico con hiperplasia mucosa de las células epiteliales inmaduras de las criptas, principalmente en el íleon terminal. Otros sitios del intestino que pueden estar afectados incluyen el yeyuno, el ciego y el colon. Los cerdos destetados y adultos jóvenes están principalmente afectados con una manifestación clínica típica de pérdida de peso rápida y deshidratación. La enfermedad clínica natural en cerdos se produce en todo el mundo. La enfermedad se asocia consecuentemente con la presencia de bacterias intracelulares curvas, que actualmente se conocen como Lawsonia intracellularis. Estas bacterias se identificaron en 1993 como un nuevo género y especie taxonómica, originalmente mencionada como simbionte ileal intracelular (International Journal of Systemic Bacteriology, Volumen 43, N2 3, 533-538, 1993; Gebhart et al.). Es una bacteria intracelular obligada, curva, gram-negativa, como describe Gebhart en la referencia anteriormente identificada y McOrist en la misma Publicación, Volumen 45, N2 4, 82-825,1995). Desde 1995, las bacterias reciben el nombre general de Lawsonia intracellularis.

En general, la vacunación contra Lawsonia intracellularis ha mostrado ser una medida rentable para controlar la ileítis y para permitir un buen aprovechamiento del potencial de crecimiento genético del cerdo (Porcine Proliferative Enteropathy Technical manual 3., julio de 26; disponible de Boehringer Ingelheim).

Recientemente, se descubrió que un antígeno dominante es un hidrato de carbono de las células de Lawsonia intracellularis, cuyo hidrato de carbono está asociado con la membrana celular externa de estas células (véanse las solicitudes de patente EP 8154764.8 y US 61/46,161 presentadas el 18 de abril de 28 y cedidas a Intervet International B.V., usadas como solicitudes de prioridad para la solicitud internacional W29/14488). Al parecer, una vacuna que está basada en una composición que contiene el hidrato de carbono aislado es capaz de proporcionar una protección adecuada contra una infección por Lawsonia intracellularis cuando se compara con las vacunas existentes. De hecho, los anticuerpos monoclonales derivados contra los determinantes antigénicos de este hidrato de carbono son reactivos con todas las cepas públicamente disponibles, tales como las cepas que se usan en las vacunas vivas comercialmente disponibles Enterisol ® Ileítis en Europa y en los EE.UU. (cuyas cepas reciben el nombre de Bl; UE y Bl; EE.UU. respectivamente en el resto de este documento).

El documento W25/11731 desvela cepas de Lawsonia intracellularis ATCC PTA-4927, también conocidas como "DK 1554" o "Bl 1554" o "1554", y ATCC PTA-4926. La bacteria '4927 es la bacteria de tipo silvestre que se usa para obtener la forma '4926 atenuada correspondiente.

El documento W25/7958 desvela un aislado de Lawsonia intracellularis, capaz de producir proteínas particulares. El documento W97/25 describe el aislamiento y uso de bacterias Lawsonia intracellularis. El documento W26/12949 describe el aislamiento y uso de bacterias Lawsonia intracellularis. Boesen et al. en Veterinary Microbiology, Volumen 15, N2 3-4, 25 de febrero de 25, páginas 199-26 mencionan la cepa Bl 1554 de Lawsonia intracellularis, también mencionada en el documento W25/11731 (anteriormente citado), como ATCC PTA-4927.

El documento W27/11993 se refiere a las cepas ATCC PTA-4926 y ATCC 55783 de Lawsonia intracellularis.

Ahora se ha descubierto sorprendentemente que existen bacterias Lawsonia intracellularis de un nuevo serotipo, cuyas bacterias, en particular con respecto al antígeno de hidrato de carbono dominante, difieren sustancialmente de las bacterias de un serotipo conocido. Se ha mostrado que este nuevo serotipo está presente en cerdos procedentes de los EE.UU. y en cerdos y caballos procedentes de Holanda. Una bacteria del nuevo serotipo se caracteriza por que es reactiva con un anticuerpo monoclonal INT-LIC-2-2 tal como se produce mediante el hibridoma INT-LIC- 2-2 depositado en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos del Instituto Pasteur de París, Francia, con el n2 CNCM I-449, pero no es reactiva con el anticuerpo INT-LIC-1 -28 tal como se produce mediante el hibridoma INT-LIC-1-28 depositado en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos del Instituto Pasteur de París, Francia, con el n2 CNCM I-448. Ambos de estos monoclonales se dirigen contra determinantes antigénicos del antígeno de hidrato de carbono dominante del serotipo conocido de Lawsonia intracellularis.

Las bacterias de acuerdo con la invención pueden tener cualquier forma, por ejemplo, una forma viva de tipo silvestre, una forma viva mutante, en particular una forma viva atenuada, tal como la que se conoce del documento EP 843 818, cuya forma mutante también puede ser una forma recombinante, o muerta, como la que se conoce de las solicitudes de patente anteriormente mencionadas presentadas el 18 de Abril de 28.

Puede ensayarse si una bacteria Lawsonia intracellularis es reactiva o no con los monoclonales, como se describe anteriormente, en un procedimiento de inmunotransferencia, como se describe en los ejemplos acompañantes del párrafo "Inmunocaracterización de bacterias y cortes tisulares") con respecto a bacterias aisladas.

Dado que el nuevo serotipo difiere inmunológicamente del existente, el diagnostico del nuevo serotipo requiere el uso de un nuevo conjunto de anticuerpos. Además, dado que el nuevo serotipo es inmunológicamente distinto en particular con respecto al antígeno dominante, es razonable esperar que las vacunas existentes basadas en el serotipo conocido proporcionarán menos protección adecuada, o incluso no proporcionarán ninguna protección, contra una infección por Lawsonia intracellularis del nuevo serotipo. La invención actual también incluye vacunas basadas en bacterias Lawsonia intracellularis del nuevo serotipo.

En una realización la bacteria Lawsonia intracellularis deriva de una cepa como la depositada en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos del Instituto Pasteur de París, Francia, con el n2 CNCM 1-45. En esta realización, "una cepa como la depositada" significa una cepa que tiene las características de la cepa como la depositada. Un derivado puede ser, por ejemplo, uno vivo atenuado, por ejemplo, producido a través de pases de la bacteria un número suficiente de veces, como se conoce, por ejemplo, del documento EP 843 818, o producido mediante técnicas recombinantes. También puede ser una bacteria muerta, tal como, por ejemplo, la que se conoce de la solicitud de patente internacional W29/14488. En una realización adicional, la bacteria Lawsonia intracellularis es la cepa depositada en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos del Instituto Pasteur de París, Francia, con el n2 CNCM I-45. Esta cepa ha emergido en los EE.UU. y se cree que una vacuna que comprende antígenos de esta cepa proporcionará una protección óptima contra esta cepa u otras cepas del mismo serotipo.

También se describe una fracción aislada derivada de una bacteria de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores. Dicha fracción aislada derivada puede ser un componente o una mezcla de componentes aislados de la propia bacteria o, si es aplicable, un metabolito de esa bacteria, o una subunidad de la bacteria que, por ejemplo, expresa un microorganismo productor recombinante que expresa la subunidad. Una fracción aislada puede ser útil en el desarrollo de un kit diagnóstico para evaluar la infección con bacterias Lawsonia intracellularis del nuevo serotipo. También, en particular cuando la fracción aislada comprende antígenos relevantes para proporcionar protección contra una infección por Lawsonia intracellularis, puede usarse satisfactoriamente en una vacuna segura contra dicha infección. Una fracción aislada de la bacteria, cuando se administra a un animal, no causará normalmente la misma enfermedad o trastorno que la bacteria de tipo silvestre, o... [Seguir leyendo]

1. Bacteria Lawsonia intracellularís de un serotipo que es reactivo con el anticuerpo monoclonal INT-LIC-2-2 tal como el producido por el hibridoma INT-LIC-2-2 depositado en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos del Instituto Pasteur de París, Francia, con el n2 CNCM I-449. caracterizada por que no es reactiva con el anticuerpo INT-LIC-1 -28 tal como el producido mediante el hibridoma INT-LIC-1 -28 depositado en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos del Instituto Pasteur de París, Francia, con el n2 CNCM I- 448.

2. Bacteria Lawsonia intracellularís de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada por que deriva de una cepa tal como la depositada en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos del Instituto Pasteur de París, Francia, con el n2 CNCM I-45.

3. La bacteria Lawsonia intracellularís de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada por que es la cepa depositada en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos del Instituto Pasteur de París, Francia, con el n2 CNCM I-45.

4. Vacuna para la protección contra una infección por Lawsonia intracellularís, que comprende una bacteria de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. Anticuerpos adecuados para diagnosticar la bacteria Lawsonia intracellularís de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizados por que los anticuerpos pertenecen al grupo tal como el producido por el hibridoma INT-LIC-2-2 o el hibridoma INT-LIC-1-28, ambos depositados en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos del Instituto Pasteur de París, Francia, con los nos CNCM I-449 v CNCM 1-448, respectivamente.

6. Un hibridoma para producir un anticuerpo como se define en la reivindicación 5, caracterizado por que el hibridoma se selecciona del grupo constituido por el hibridoma INT-LIC-2-2 depositado en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos del Instituto Pasteur de París, Francia, con el n2 CNCM 1-449 y el hibridoma INT-LIC-1-28 depositado en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos del Instituto Pasteur de París, Francia, con el n2 CNCM I-448.