Anticuerpos humanizados contra IL-22RA humano.

Un anticuerpo humanizado que se une a IL-22RA humano, que comprende:

a) un dominio variable de cadena pesada que comprende H-CDR1, H-CDR2, y H-CDR3 que consiste en secuencias de aminoácidos de los SEQ ID NO: 1, 2 y 3, respectivamente; y

b) un dominio variable de cadena ligera que comprende L-CDR1, L-CDR2, y L-CDR3 que consiste en secuencias de aminoácidos de los SEQ ID NO: 4, 5 y 6, respectivamente, o que consiste en las secuencias de aminoácidos de los SEQ ID NO: 4, 5 y 7, respectivamente.

Anticuerpos humanizados contra IL-22RA humano Campo de la invención

La presente invención se refiere a anticuerpos humanizados contra IL-22RA humano y a su uso en el tratamiento de la psoriasis y otras enfermedades mediadas por el sistema inmunitario tales como la artritis psoriásica y la dermatitis atópica.

Antecedentes de la invención

El IL-22RA (también conocido como IL22R, IL22R1, IL22RA1, CRF2-9 y Zcytor11) pertenece a la familia de receptores de citoquinas de tipo II y es un componente del receptor de IL-2, IL-22 e IL-24. Debido a su similitud estructural IL-2, IL-22 e IL-24, junto con IL-19 e IL-26, se combinaron con IL-1 en la denominada "familia de IL-1" (Kunz S et al. 26). La IL-1 es un regulador maestro de la respuesta inmune que media la regulación a la baja de la expresión de citoquinas pro-inflamatorias en los macrófagos, las células T, y otras células del sistema inmunitario (Moore KWetal. 21).

In vitro, la IL-2 y la IL-24 son producidas no sólo por las células inmunitarias activadas, sino también en un grado similar por los queratinocitos. In vivo, estas citoquinas son expresadas preferentemente en los tejidos inflamados. La IL-2 y la IL-24 pueden señalizar a través de dos complejos receptores, IL-2RA/IL-2RB e IL-22RA/IL-2RB (Langer JA et al. 24). Varios tejidos, concretamente la piel, los tejidos de los sistemas reproductor y respiratorio, y varias glándulas parecen ser las dianas principales de estos mediadores (Kunz S et al. 26).

La IL-22 fue descubierta como un gen regulado al alza por Células T CD4+ tras la activación, y comparte una identidad de secuencia de aminoácidos de 22% con la IL-1; por lo tanto, fue denominada originalmente factor inducible derivado de células T relacionado con IL-1 (IL-TIF) (Dumoutier L et al. 2). A diferencia de IL-1, que regula las funciones células inmunitarias, la IL-22 controla las respuestas tisulares al sistema inmunitario. La IL-22 señaliza a través de un receptor heterodfmérico formado por IL-22RA e IL-1RB que es altamente expresado en diversos tejidos pero no es detectable sobre las células inmunitarias. Inicialmente, la IL-22 se une a través de su sitio de unión a IL-22RA al dominio extracelular de IL-22RA y, con posterioridad, IL-1RB se une a una región creada por la interacción de IL-22 e IL-22RA para formar un complejo receptor de citoquina con una mayor afinidad por IL-22 (Li J et al. 24). Puesto que IL-1RB es ampliamente expresado por muchos tipos de células diferentes, la expresión de IL-22RA es el componente limitante que determina la capacidad de respuesta a IL-22 de las células. IL-22RA se expresa fuertemente en el hígado, así como en la piel, los pulmones, el páncreas y otros tejidos periféricos (Wolk K et al. 24; Aggarwal S et al. 21).

El escrutinio exhaustivo de diferentes líneas celulares ha revelado que solo las células que expresan IL-22RA responden a IL-22, lo que sugiere que no existe un receptor alternativo que pueda mediar la señalización de IL-22.

Un receptor soluble denominado proteína de unión a IL-22 (IL-22BP, también conocida como IL22BP, IL22RA2, IL- 22R-alfa2, CRF2X, CRF2-S1 y CRF2-1) también es capaz de unirse a IL-22 como una proteína natural antagonista y probablemente proporciona una regulación sistémica de la actividad de IL-22 (Kotenko SV et al. 23). La IL-22 se ha encontrado en tejidos enfermos de pacientes con diferentes enfermedades inflamatorias crónicas que implican la infiltración de células T activadas, tales como la psoriasis, la artritis psoriásica y la dermatitis atópica. La IL-22 se ha descrito más comúnmente como una citoquina pro-inflamatoria debido a su expresión en las lesiones de pacientes con enfermedades inflamatorias crónicas y a su inducción de citoquinas pro-inflamatorias tales como IL-6, IL-8 y TNF-a (Wolk K et al. 24; Andoh A et al. 25; Ikeuchi H et al. 25; Nograles KE et al. 29a; Nograles KE et al. 29b). Muy recientemente, Zheng et al. demostraron que IL-22 es importante para la mediación de la inflamación dérmica inducida por IL-23 en un modelo de ratón de psoriasis, indicando un papel pro-inflamatorio (Zheng Y et al. 27). Teniendo en cuenta los efectos biológicos de IL-22, incluyendo la hiperplasia de queratinocitos, la inducción de quimioquinas y la producción de citoquinas pro-inflamatorias en ciertos tejidos, el uso de antagonistas que bloquean, inhiben, reducen o neutralizan la actividad de IL-22, p. ej., al interferir con la unión al receptor, puede impedir la infiltración de células patógenas en los sitios inflamatorios. Se han descrito previamente anticuerpos monoclonales anti-IL-22RA humano de ratón en las Solicitud de Patente PCT WO 26/47249 presentada el 21 de Octubre de 25. Sin embargo, los anticuerpos de ratón pueden causar inmunogenicidad y son deseables anticuerpos anti-IL-22RA humano humanizados. Los anticuerpos humanizados tienen generalmente al menos tres ventajas potenciales sobre los anticuerpos de ratón para su uso en terapia en seres humanos: (1) debido a que la porción efectora es humana, ésta puede interactuar mejor con las otras partes del sistema inmunitario humano (p. ej., destruir las células diana más eficazmente por medio de la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) o de la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (CCDA)); (2) el sistema inmunitario humano no debería reconocer la región marco o constante del anticuerpo humanizado como foránea, y por lo tanto la respuesta de anticuerpos contra tal anticuerpo inyectado debe ser menor que contra un anticuerpo de ratón totalmente foráneo; y (3) se ha informado de que los anticuerpos de ratón inyectados tienen una vida media en la circulación humana mucho más corta que la vida media de los anticuerpos humanos. Los anticuerpos humanizados inyectados tendrán presumiblemente una vida media más similar a la de los anticuerpos humanos de origen natural, permitiendo

administrar dosis más pequeñas y menos frecuentes. De este modo, en vista de lo anterior, existe una necesidad de anticuerpos anti-IL-22RA humano humanizados para el tratamiento de la inflamación mediada por IL-22, tal como psoriasis, artritis psoriásica y dermatitis atópica.

Compendio de la invención

En un primer aspecto, la invención proporciona un anticuerpo humanizado que se une a IL-22RA humano. El anticuerpo humanizado de la Invención comprende a) un dominio variable de cadena pesada que comprende H- CDR1, H-CDR2, y H-CDR3 que consisten en secuencias de aminoácidos de los SEQ ID NO: 1, 2 y 3, respectivamente, y b) dominio variable de cadena ligera que comprende L-CDR1, L-CDR2, y L-CDR3 que consisten en secuencias de aminoácidos de los SEQ ID NO: 4, 5 y 6, respectivamente, o que consisten en secuencias de aminoácidos de los SEQ ID NO: 4, 5 y 7, respectivamente. En otro aspecto, la invención proporciona un anticuerpo descrito en la presente memoria, en donde a) dicho dominio variable de cadena pesada comprende regiones marco H-FR1, H-FR2, H-FR3 y H-FR4 que consisten en secuencias de aminoácidos de los SEQ ID NO: 8, 9, 1 y 11, respectivamente, y b) dicho dominio variable de cadena ligera comprende regiones marco L-FR1, L-FR2, L-FR3 y L- FR4 que consisten en secuencias de aminoácidos de los SEQ ID NO: 12, 13, 14 y 15 , respectivamente. En otro aspecto, la invención proporciona un anticuerpo descrito en la presente memoria, en donde a) dicho dominio variable de cadena pesada consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 16 y b) dicho dominio variable de cadena ligera consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 17. En otro aspecto, la invención proporciona un anticuerpo descrito en la presente memoria, en donde dicho anticuerpo comprende a) una región constante de cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 18 y b) un dominio constante de cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 19.

En otro aspecto, la invención proporciona un anticuerpo humanizado que se une a IL-22RA humano, que comprende una cadena pesada que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2 y una cadena ligera que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 21.

Se proporciona un polinucleótido, p. ej., un ADN, que codifica la cadena pesada del anticuerpo humanizado de acuerdo con la presente invención. Preferiblemente, dicho polinucleótido comprende o consiste en el SEQ ID NO: 22.

Se proporciona un polinucleótido, p. ej., un ADN, que codifica la cadena ligera del anticuerpo humanizado de acuerdo con la presente invención. Preferiblemente, dicho polinucleótido comprende o consiste en el SEQ ID NO:

23.

En otro aspecto, la invención proporciona un polinucleótido, p. ej., un ADN, que codifica las cadenas tanto pesada como ligera del anticuerpo... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo humanizado que se une a IL-22RA humano, que comprende:

a) un dominio variable de cadena pesada que comprende H-CDR1, H-CDR2, y H-CDR3 que consiste en secuencias de aminoácidos de los SEQ ID NO: 1, 2 y 3, respectivamente; y

b) un dominio variable de cadena ligera que comprende L-CDR1, L-CDR2, y L-CDR3 que consiste en secuencias de aminoácidos de los SEQ ID NO: 4, 5 y 6, respectivamente, o que consiste en las secuencias de aminoácidos de los SEQ ID NO: 4, 5 y 7, respectivamente.

2. El anticuerpo humanizado de acuerdo con la reivindicación 1, en donde:

a) dicho dominio variable de cadena pesada comprende las regiones marco H-FR1, H-FR2, FI-FR3 y FI-FR4 que consisten en las secuencias de aminoácidos de los SEQ ID NO: 8, 9, 1 y 11, respectivamente, y

b) dicho dominio variable de cadena ligera comprende las regiones marco L-FR1, L-FR2, L-FR3 y L-FR4 que consisten en las secuencias de aminoácidos de los SEQ ID NO: 12, 13, 14, y 15 respectivamente.

3. El anticuerpo humanizado de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde:

a) dicho dominio variable de cadena pesada consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 16 y

b) dicho dominio variable de cadena ligera consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 17.

4. El anticuerpo humanizado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicho anticuerpo comprende:

a) una región constante de cadena pesada que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 18 y

b) un dominio constante de cadena ligera que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 19.

5. Un anticuerpo humanizado que se une a IL-22RA humano, que comprende una cadena pesada que comprende o consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2 y una cadena ligera que comprende o que consiste en la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 21.

6. Un polinucleótido que codifica tanto la cadena pesada como la cadena ligera del anticuerpo humanizado de acuerdo con la reivindicación 5.

7. Un vector de expresión que comprende a) un polinucleótido que codifica la cadena pesada del anticuerpo humanizado de acuerdo con la reivindicación 5 y b) un polinucleótido que codifica la cadena ligera del anticuerpo humanizado de acuerdo con la reivindicación 5.

8. Un vector de expresión que comprende un polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 6.

9. Un vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 7 u 8, en donde el polinucleótido que codifica la cadena pesada del anticuerpo humanizado de acuerdo con la reivindicación 5 comprende o consiste en el SEQ ID NO: 22 y el polinucleótido que codifica la cadena ligera del anticuerpo humanizado de acuerdo con la reivindicación 5 comprende o consiste en el SEQ ID NO: 23.

1. Una célula anfitriona transformada con un vector de acuerdo con la reivindicación 7, 8 o 9.

11. La célula anfitriona de acuerdo con la reivindicación 1, en donde dicha célula es una célula CHO.

12. Un método para producir un anticuerpo humanizado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde dicho método comprende cultivar una célula anfitriona de acuerdo con la reivindicación 1 u 11, y aislar dicho anticuerpo.

13. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo humanizado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o un anticuerpo humanizado producido de acuerdo con el método de la reivindicación 12.

14. Un anticuerpo humanizado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o un anticuerpo humanizado producido de acuerdo con el método de la reivindicación 12 para su uso como medicamento.

15. Un anticuerpo humanizado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o un anticuerpo humanizado producido de acuerdo con el método de la reivindicación 12 para su uso en el tratamiento de la psoriasis, la artritis psoriásica o la dermatitis atópica.

16. El uso de un anticuerpo humanizado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o un anticuerpo humanizado producido de acuerdo con el método de la reivindicación 12 para la preparación de un medicamento

para el tratamiento de la psoriasis, la artritis psoriásica o la dermatitis atópica.