Antagonistas específicos del receptor FGF-R4.

Anticuerpo Antagonista específico del receptor Fibroblast Growt Factor-Receptor 4 (FGF-R4) para su uso en el tratamiento de las enfermedades asociadas a una angiogénesis patológica.

Antagonistas específicos del receptor FGF-R4

La presente invención tiene por objeto unos antagonistas específicos del receptor 4 de FGF (FGF-R4) que permiten inhibir la actividad de este receptor. Estos antagonistas son en particular unos anticuerpos dirigidos específicamente contra el receptor 4 de FGF (FGF-R4).

La presente invención tiene también por objeto la utilización terapéutica de estos antagonistas, en particular en el campo de la angiogénesis y en el tratamiento de ciertos tipos de cáncer.

Los FGF (Factor de Crecimiento de Fibroblastos) se consideran entre las primeras moléculas descritas como capaces de estimular la proliferación, migración y diferenciación de células vasculares /n v/íro e /n v/vo. Una bibliografía abundante describe la inducción de la angiogénesis y la formación de capilares sanguíneos /n v/fro e /n v/vo por los FGF. Los FGF están igualmente implicados en la angiogénesis tumoral que promueve la formación de vasos sanguíneos reclutados por el tumor.

La familia de los FGF humanos está compuesta de al menos 23 miembros que poseen todo un dominio central conservado de 120 aminoácidos. Ejercen su actividad biológica ¡nteractuando con sus receptores de alta afinidad de tipo tirosina-quinasa (FGF-R) y heparán sulfato proteogllcanos, componentes presentes en la mayor parte de las superficies celulares y matrices extracelulares (sitio de unión de baja afinidad) para formar un complejo temarlo. Algunos FGF presentan una alta afinidad por diversos FGF-R aunque otros activan específicamente un receptor o una ¡soforma de un receptor.

Se ha identificado un ligando específico de FGF-R4 porXie ef a/. (Cytokine, 1999, 11:729-35.) Este ligando, denominado FGF19, es un ligando de alta afinidad por FGF-R4 exclusivamente y cuya unión al receptor depende de la heparina o de los heparán-sulfatos. Se ha identificado el FGF19 en el animal adulto, únicamente a nivel de hepatocitos y del intestino delgado, donde regula la síntesis de ácido biliar por el hígado. Sería un factor de crecimiento que interviene durante el desarrollo embrionario y estaría implicado en el desarrollo del cerebro fetal en el pez cebra y en el hombre.

Se describen otros ligandos de FGF-R4, como el FGF1 o FGF2. Estos llgandos activan considerablemente el FGF- R4 pero no son específicos de FGF-R4: se unen también a otros FGF-R (Ornitz ef a/. J. Biol. Chem., 1996, 271:15292-7).

La activación del receptor FGF-R4 conduce a diversos tipos de señalizaciones celulares. Entre éstas, la forma más clásica que corresponde a la implantación de una vía de señalización por cascada de fosforilación a raíz de una estimulación de FGF-R4 por el FGF. Esta inducción conduce a la autofosforilación del dominio tirosina quinasa de FGF-R4 y sirve para iniciar una vía de señalización intracelular dependiente de las fosforilaciones de otras proteínas de señalización, tales como AKT, p44/42, JNK etc. Esta señalización por fosforilación varía según el tipo celular y según los co-receptores o las moléculas de adhesión presentes en la superficie de estas células. (Calallaro ef a/., Nat. Cell Biol. 3/7, 650-657 (2001); Stadler ef a/., Cell. Signal. 18/6, 783-794. (2006); Lin. ef a/., J Biol Chem., 2007, 14:27277-84. (2007)). Otra forma de señalización importante para los FGF-R, incluyendo FGF-R4, es la internalización del receptor después de la activación en asociación con su ligando. Este mecanismo no depende de la actividad tirosina quinasa del receptor, sino de una corta secuencia en C-terminal de FGF-R4 (Klingenberg ef a/., J. Ce// Se/., 113/Pt10:1827-1838 (2000)).

Se describen cuatro formas distintas de FGF-R4 en la bibliografía. Una forma de tamaño completo con 2 variantes polimórficas en la posición 388, a saber el FGF-R4 Gly388, que es la forma normal del receptor, y la forma Arg388, que se describe en el ámbito de diversos tumores (Bange ef a/., Cáncer Res. 62/3, 840-847 (2002); Spinola ef a/., J Clin Oncol 23, 7307-731 1 (2005); Stadler ef a/., Cell. Signal. 18/6, 783-794. (2006)). Se ha descubierto igualmente una forma soluble expresada en células tumorales mamarias (Takaishi ef a/., Biochem Biophys Res Commun., 2000, 267:658-62). Se ha descrito una cuarta forma, truncada en la parte extracelular, en algunos adenomas hipofisarios (Ezzat ef a/., J Clin Invest., 2002, 109:69-78).

El FGF-R4 se expresa principalmente en los tejidos derivados del endodermo tales como el tracto gastrointestinal, el páncreas, el hígado, los músculos y las glándulas suprarrenales.

El FGF-R4 es conocido en la bibliografía por tener diversos papeles celulares, de los cuales los tres principales se describen a continuación:

En primer lugar, este receptor está implicado en el control de diferentes procesos de diferenciación celular /n v/fro e /n v/vo como la diferenciación y la regeneración de los músculos esqueléticos, la diferenciación del tejido mesenquimatoso, la osteogénesis o incluso en la formación de los alvéolos durante el desarrollo hepático postnatal.

En segundo lugar, el FGF-R4 se describe en el control de la homeostasis del ácido biliar y del colesterol e intervendría en el control de la adiposidad. Además, el equilibrio entre la producción del ácido biliar y la del colesterol está controlado por el FGF-R4 /Zi v/fro e /Zi v/vo.

En tercer lugar, el FGF-R4 está implicado en algunos fenómenos tumorales como el desarrollo de carcinomas hepatocelulares o cánceres de colón, en la proliferación de células de fibroadenomas mamarios, células epiteliales de cánceres de mama, como la motilidad de células de carcinomas de mama o colorrectales. La implicación tumoral del FGF-R4 está mayoritariamente asociada a la aparición de polimorfismo (Gly388Arg) correlacionado con la aceleración de la progresión tumoral de tumores mamarios y colorrectales (Bange ef a/., Cáncer Res. 62/3, 840-847. 2002), prostéticos (Wang ef a/., Clin. Cáncer Res. 10/18, 6169-6178, 2004) o hepáticos (Nicholes ef a/., Am. J. PAthol. 160/6, 2295-307, 2002). Este polimorfismo está también asociado a un mal pronóstico en el ámbito de los sarcomas (Morimoto ef a/., Cáncer 98/10, 2245-2250, 2003), de adenocarcinomas pulmonares (Spinola ef a/. Oncol 23, 7307-7311, 2005) o sarcomas escamosos (da Costa Andrade ef a/., Exp Mol Pathol 82, 53-7, 2007). También se ha descrito la sobreexpresión de FGF-R4 en algunas líneas de cánceres pancreáticos (Shah ef a/., J. Clin Oncogene 21/54, 8251-61, 2002) y correlacionada con la malignidad de los astrocitomas (Yamada ef a/. Neurol. Res. 24/3, 244- 8, 2002). Además, el uso de un anticuerpo monoclonal anti-FGF19 en modelos /n v/vo de xenoinjertos de tumores de colon o en modelos de carcinomas hepatocelulares, muestra que la inactivación del FGF19 y, por lo tanto, el bloqueo de la activación de FGF-R4 puede ser beneficioso en el tratamiento de cáncer de colon o de hígado.

Se admite en la bibliografía que las parejas FGF/FGF-R1 y FGF/FGF-R2 participan en la formación de nuevos vasos sanguíneos en un contexto normal o patológico. Sin embargo, nunca se ha estudiado la potencial implicación de FGF-R4 en el control de este fenómeno celular. Hasta ahora, en efecto, se ha supuesto que la activación de la angiogénesis está mediada por FGF-R1 y/o FGF-R2 (Presta ef a/., Cytokine Growth Factor Rev., 2005, 16:159-78).

Se describen en la bibliografía ejemplos de antagonistas de FGF-R4, en particular: pequeñas moléculas, pero no dirigen el FGF-R4 de manera específica, conllevando así efectos indeseables. Así, las pequeñas moléculas químicas inhibidoras del dominio tirosina-quinasa que inhiben diversos FGF-R, así como otros receptores tirosina- quinasa se han descrito por Thompson ef a/. (Thompson ef a/. J Med Chem., 2000, 43:4.200-11). Se han descrito también pequeñas moléculas químicas inhibidoras de FGF-R por asociación con su parte extracelular en la solicitud W02007/080325.

Se han estudiado también anticuerpos como los anticuerpos anti-FGFR1 y/o anti-FGFR4, descritos en las solicitudes internacionales WO 2005/066211 o por Chen ef a/. (Hybridoma 24/3, 152-159, 2005). La solicitud WO 2005/037235 describe unos anticuerpos antagonistas de FGF-R para el tratamiento de la obesidad y la diabetes. Por otra parte, se describen anticuerpos anti-FGF-R4 agonistas en la solicitud WO03/063893.

Más recientemente, se ha descrito un anticuerpo específico de FGFR4, denominado 10F10, en las solicitudes W02008/052796 y W02008/052798; éste es capaz de inducir la apoptosis de células cancerosas de origen renal y de células neuronales.

La presente invención tiene por objeto un antagonista del receptor FGF-R4, caracterizado por que se une específicamente a éste.

De manera ventajosa, dicho antagonista es un anticuerpo... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo Antagonista específico del receptor Fibroblast Growt Factor-Receptor 4 (FGF-R4) para su uso en el tratamiento de las enfermedades asociadas a una angiogénesis patológica.

2. Anticuerpo según la reivindicación 1, para su uso en la inhibición del crecimiento tumoral simultáneamente a la inhibición de la angiogénesis.

3. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, para su uso en el tratamiento de hepatocarcinomas o cualquier otro tipo de cáncer hepático.

4. Anticuerpo según una de las reivindicaciones 1 a 3, para su uso en el tratamiento del cáncer de páncreas.

5. Anticuerpo para su uso según una de las reivindicaciones 1 a 4, que se une al dominio D2-D3 del receptor FGF-

R4.

6. Anticuerpo para su uso según una de las reivindicaciones 1 a 5, que se une al dominio D2 del receptor FGF-R4.

7. Anticuerpo para su uso según una de las reivindicaciones 1 a 6, que tiene un Ko con respecto al receptor FGF-R4 determinado por la técnica "Surface Plasmon "resonance" (Biacore) inferior a 10E-8 M.

8. Anticuerpo para su uso según una de las reivindicaciones 1 a 7, que es activo al mismo tiempo contra FGF-R4 humano y FGF-R4 murino.

9. Anticuerpo antagonista específico del receptor FGF-R4 que comprende las CDR de las secuencias SEC ID NO: 9,

10. 11, 12, 13 y 14; o 73, 74, 75, 78, 79 y 80; u 83, 84, 85, 88, 89 y 90; o 93, 94, 95, 98, 99 y 100; o 103, 104, 105, 108, 109 y 110, en el que una de las CDR puede diferir de uno a dos aminoácidos con relación a una al menos de las secuencias citadas anteriormente, siempre que el anticuerpo conserve su especificidad de unión para su uso en el tratamiento de las enfermedades asociadas a una angiogénesis patológica.

10. Anticuerpo antagonista específico del receptor FGF-R4 cuya parte variable de su cadena pesada comprende una secuencia nucleotídica que presenta al menos el 80% de identidad con las secuencias SEC ID No: 5, 76, 86, 96 o 106 y cuya parte variable de su cadena ligera comprende una secuencia nucleotídica que presenta al menos el 80% de identidad con las secuencias SEC ID No: 7, 71, 81, 91 o 101, siempre que el anticuerpo conserve su especificidad de unión, para su uso en el tratamiento de las enfermedades asociadas a una angiogénesis patológica.

11. Anticuerpo antagonista específico del receptor FGF-R4 cuya secuencia comprende las secuencias polipeptidicas SEC ID NO: 2 y 4; o 6 y 8; o 72 y 77; u 82 y 87; o 92 y 97; o 102 y 107 o secuencias que corresponden a estas secuencias que tienen al menos el 80% de identidad con ellas, siempre que el anticuerpo conserve su especificidad de unión, para su uso en el tratamiento de las enfermedades asociadas a una angiogénesis patológica.

12. Anticuerpo específico del receptor FGF-R4 para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado por que es un anticuerpo humanizado.

13. Anticuerpo para su uso según la reivindicación 12, caracterizado por que comprende una cadena variable ligera que presenta al menos el 80% de identidad con una de las secuencias polipeptidicas SEC ID NO 30 o 32 y una cadena variable pesada que presenta al menos el 80% de identidad con una de las secuencias SEC ID NO 34, 36 o 38.

14. Anticuerpo para su uso según una de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado por que es un anticuerpo conjugado a un agente citotóxico.

15. Anticuerpo según una de las reivindicaciones 9 a 14, para su uso para inhibir la proliferación celular tumoral en el tratamiento de los hepatocarcinomas o de cualquier otro tipo de cáncer hepático y en el tratamiento de los cánceres pancreáticos.

16. Composición farmacéutica que comprende un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 y excipientes, para su uso en el tratamiento de las enfermedades asociadas a una angiogénesis patológica.

17. Medicamento que comprende un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, para su uso en el tratamiento de las enfermedades asociadas a una angiogénesis patológica.

18. Polinucleótido que codifica para un polipéptido que antagonista específico del receptor FGF-R4, cuyas secuencias presentan al menos el 80% de identidad con una de las secuencias siguientes: SEC ID NO: 2 y 4; o SEC ID NO 6 y 8; o SEC ID NO 9, 10, 11, 12, 13 y 14; o SEC ID NO 30 o 32 y 34 o 36 o 38; o SEC ID NO 72 y 77; o SEC

ID NO 73, 74, 75, 78, 79 y 80; o SEC ID NO 82 y 87; o SEC ID NO 83, 84, 85, 88, 89 y 90; o SEC ID NO 92 y 97; o SEC ID NO 93, 94, 95, 98, 99 y 100; o SEC ID NO 102 y 107; o SEC ID NO 103, 104, 105, 108, 109 y 110, siempre que el polipéptido que lo codifica conserve su especificidad de unión, para su uso en el tratamiento de las enfermedades asociadas a una angiogénesis patológica.

19. Polinucleótido, caracterizado por que presenta una secuencia que presenta el menos el 80% de identidad con una de las secuencias SEC ID NO 1 y 3; o SEC ID NO 5 y 7; SEC ID NO 29 o 31, y 33, 35 o 37; o SEC ID NO 71 y 76; o SEC ID NO 81 y 86; o SEC ID NO 91 y 96; o SEC ID NO 101 y 106, siempre que el polipéptido que lo codifica conserve su especificidad de unión antagonista al receptor FGF-R4, para su uso en el tratamiento de las 10 enfermedades asociadas a una angiogénesis patológica.