Activación inducida en células dendríticas.

Uso de un ligando que se une a un dominio de unión al ligando FKBP de una proteína quimérica,

dando como resultado una oligomerización de la proteína quimérica, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una dolencia, seleccionada entre una enfermedad hiperproliferativa o una enfermedad infecciosa, modulando una respuesta inmunitaria, para activar una célula presentadora de antígenos transfectada o transducida in vivo, donde

a) la célula presentadora de antígenos se ha transfectado o transducido con un vector de expresión que codifica la proteína quimérica; y

b) dicho vector de expresión comprende una secuencia promotora de polinucleótidos, una secuencia de polinucleótidos que codifica una región dirigida a membrana, una secuencia de polinucleótidos que codifica un dominio de unión al ligando FKBP capaz de unirse al ligando, una secuencia de polinucleótidos que codifica un polipéptido de la región citoplásmica CD40 que no tiene un dominio extracelular funcional, unido todo operativamente.

Activación inducida en células dendríticas Campo técnico

La presente invención se refiere a composiciones y métodos para potenciar una respuesta inmunitaria. Más particularmente, la composición es un polipéptido coestimulador inducible que se induce mediante la oligomerización del ligando.

Antecedentes de ia invención

Las células dendríticas (DC) son únicas entre las células presentadoras de antígenos (APC) debido a su potente capacidad para activar los linfocitos T inmunológico no expuestos anteriormente (Steimnan, 1991). Las DC expresan constitutivamente, o tras la maduración, varias moléculas que median en la interacción física y proporcionan señales de activación a los linfocitos T respondedores. Estas incluyen las moléculas MHC de clase I y clase II CDSO (B7-1) y CD86 (B7-2); CD40; CD11a/CD18 (LFA-1); y CD54 (ICAM-1) (Steinman, 1991; Steinman ef a/., 1995). Las DC secretan también, tras la estimulación, varias citoquinas estimuladoras de los linfocitos T, que incluyen IL-1-beta, IL- 6, IL-8, proteína-1-alfa inflamatoria de macrófagos (MIP-1-alfa), y MIP-1-delta (Matsue ef a/., 1992; Kitajima ef a/., 1995; Ariizumi ef a/., 1995; Caux ef a/., 1994; Heufler ef a/., 1992; Schreiber ef a/., 1992; Enki ef a/, 1992; Mohamadzadeh ef a/., 1996). Ambas propiedades, la expresión de la molécula de adhesión y la producción de citoquinas están compartidas por otras APC (por e/emp/o, macrófagos activados y linfocitos B), que son sustancialmente menos competentes en la activación de linfocitos T no expuestos anteriormente.

La activación de los linfocitos T es una importante etapa en la inmunidad protectora frente a microorganismos patógenos (por e/emp/o, virus, bacterias, y parásitos), proteínas extrañas, y agentes químicos petjudiciales para el medio ambiente. Los linfocitos T expresan receptores sobre sus superficies (es dec/r, receptores de linfocitos T) que reconocen a los antígenos presentados sobre la superficie de las células presentadoras de antígenos. Durante una respuesta Inmunitaria normal, la unión de estos antígenos a los receptores de linfocitos T inicia cambios ¡ntracelulares que conducen a la activación de los linfocitos T. Las DC expresan varias moléculas de adhesión diferentes (y coestlmuladoras), que median en su interacción con los linfocitos T. Las combinaciones de los receptores (en las DC) y contrarreceptores (en los linfocitos T) conocidos por tener este papel incluyen: a) MHC y CD8 de clase I, b) MHC y CD4 de clase II, c) CD54 (ICAM-1)y CD11a/CD18 (LFA-1), d) ICAM-3 y CD11a/CD18, e) LFA-3 y CD2, f) CD80 (B7-1) y CD28 (y CTLA4), g) CD86 (B7-2) y CD28 (y CTLA4) y h) CD40 y CD40L (Steinman ef a/., 1995). De forma importante, no solo la ligadura de estas moléculas promueve la unión física entre las DC y los linfocitos T, también transduce las señales de activación.

Las células dendríticas (DC) orquestan también varias etapas críticas en el desarrollo de una respuesta Inmunitaria adaptatlva. Las DC comunican Información relativa al estado antlgénlco de los tejidos periféricos a los ganglios linfáticos locales. Tras la detección de las "señales de peligro" derivadas de patógenos y endógenas, las DC se adaptan fisiológicamente a su mlcroentorno experimentando un programa genético conocido como "maduración" a fin de dirigir una respuesta de linfocitos T eficaz. La maquinarla única de las DC les permite, no solo Inducir la activación de los linfocitos T no expuestos anteriormente, sino regular también su fenotipo y función posteriores. Estos Impresionantes atributos hacen de las DC una elección Ideal para su aprovechamiento como adyuvantes naturales en el desarrollo de la vacuna del cáncer. Sin embargo, los limitados éxitos de recientes ensayos clínicos Indican que las estrategias terapéuticas actuales con las DC necesitan un refinamiento adicional si se va a Incluir la ¡nmunoterapla en el arsenal de tratamientos contra el cáncer junto a las modalidades más tradicionales de qulmlo y radioterapia. Esta traducción del desarrollo de vacunas a base de DC al escenario clínico se basa significativamente en los avances de nuestra comprensión de la biología básica de las DC.

Una de las deficiencias críticas de las vacunas basadas en las DC es su naturaleza transitoria. El estado de activación y la longevidad de las DC son significativamente limitados. Menos de 24 horas después de la exposición a los llpopollsacárldos derivados de bacterias (LPS), las DC finalizan la síntesis de la cltoqulna IL-12 y se vuelven refractarlas a estímulos adicionales. Esto Implica que la activación potencial de los linfocitos T cltotóxlcos (CTL) de las DC está gravemente comprometida en un tiempo relativamente corto tras su activación. Los estudios con vacunas Indican que la supervivencia de las DC pulsadas por antígenos en el fluido de drenaje de los ganglios linfáticos se reduce drásticamente 48 horas después de su administración y es ¡ndetectable en 72 horas. Estos hallazgos justifican la necesidad de estrategias alternativas para el diseño de vacunas a base de DC, tales como el desarrollo de DC genéticamente alteradas que puedan evitar los mecanismos fisiológicos reguladores y presenten propiedades ¡nmunoestlmuladoras potenciadas para el tratamiento del cáncer y otras enfermedades.

Breve sumarlo de la Invención

La presente Invención se refiere a la Inducción y/o activación de las células presentadoras de antígenos. Se pueden usar las células presentadoras de antígenos activadas para potenciar y/o regular las respuestas ¡nmunltarlas para un antígeno diana. Más particularmente, la presente Invención proporciona el uso de un ligando que se une a un

dominio de unión al ligando FKBP de una proteína quimérica, dando como resultado una oligomenzación de la proteína quimérica, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una dolencia, seleccionada entre una enfermedad hlperproliferativa o una enfermedad Infecciosa, modulando una respuesta inmunitaria , para activar una célula presentadora de antígenos transfectada o transduclda /n v/vo, donde

a) la célula presentadora de antígenos se ha transfectado o transducldo con un vector de expresión que codifica la proteína quimérica; y

b) dicho vector de expresión comprende una secuencia promotora de polinucleótidos, una secuencia de polinucleótldos que codifica una región dirigida a membrana, una secuencia de polinucleótidos que codifica un dominio de unión al ligando FKBP capaz de unirse al ligando, una secuencia de polinucleótidos que codifica un polipéptido de la región citoplásmica CD40 que no tiene un dominio extracelular funcional, unido todo operativamente.

La invención proporciona también un método para activar /n v/fro una célula presentadora de antígenos que comprende las etapas de:

transfectar o transducir la célula presentadora de antígenos con un vector de expresión, donde dicho vector de expresión comprende una secuencia promotora de polinucleótidos, y una secuencia de polinucleótido que codifica una proteína quimérica, donde la secuencia del polinucleótido codifica una región dirigida a membrana, un dominio de unión al ligando FKBP, y un polipéptido de la reglón citoplásmica CD40 que no tiene un dominio extracelular funcional, unidos todos operativamente; y activar la célula presentadora de antígenos transfectada o transducida administrando un ligando que se une al dominio de unión al ligando FKBP de la proteína quimérica, dando como resultado la oligomenzación de la proteína quimérica.

La invención proporciona también el uso de un vector de expresión en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una dolencia seleccionada entre una enfermedad hlperproliferativa o una enfermedad infecciosa, modulando una respuesta inmunitaria /n v/vo en un sujeto, donde dicho vector de expresión se expresa en células dendríticas y dicho vector de expresión comprende una secuencia promotora de polinucleótidos, una secuencia de polinucleótidos que codifica una reglón dirigida a membrana, una secuencia de polinucleótidos que codifica un dominio de unión al ligando FKBP, una secuencia de polinucleótidos que codifica un polipéptido de la región citoplásmica CD40 que no tiene un dominio extracelular funcional, unido todo operativamente.

La invención proporciona también el uso de una célula presentadora de antígenos transfectada o transducida en la fabricación de un medicamento para potenciar una respuesta inmunitaria en un sujeto, donde el sujeto tiene una dolencia seleccionada entre una enfermedad hlperproliferativa o una enfermedad infecciosa, donde

a) la célula presentadora de antígenos se transfecta o transduce con un vector de expresión;

b) dicho vector de expresión... [Seguir leyendo]

1. Uso de un ligando que se une a un dominio de unión al ligando FKBP de una proteína quimérica, dando como resultado una oligomerización de la proteína quimérica, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una dolencia, seleccionada entre una enfermedad hiperproliferativa o una enfermedad infecciosa, modulando una respuesta inmunitaria, para activar una célula presentadora de antígenos transfectada o transducida /n v/vo, donde

a) la célula presentadora de antígenos se ha transfectado o transducido con un vector de expresión que codifica la proteína quimérica; y

b) dicho vector de expresión comprende una secuencia promotora de polinucleótidos, una secuencia de polinucleótldos que codifica una región dirigida a membrana, una secuencia de polinucleótidos que codifica un dominio de unión al ligando FKBP capaz de unirse al ligando, una secuencia de polinucleótidos que codifica un polipéptido de la región citoplásmica CD40 que no tiene un dominio extracelular funcional, unido todo operativamente.

2. Un método para activar/n v/fro una célula presentadora de antígenos que comprende las etapas de:

transfectar o transducir la célula presentadora de antígenos con un vector de expresión, donde dicho vector de expresión comprende una secuencia promotora de polinucleótidos, y una secuencia de polinucleótido que codifica una proteína quimérica, donde la secuencia del polinucleótido codifica una región dirigida a membrana, un dominio de unión al ligando FKBP, y un polipéptido de la región citoplásmica CD40 que no tiene un dominio extracelular funcional, unidos todos operativamente; y

activar la célula presentadora de antígenos transfectada o transducida administrando un ligando que se une al dominio de unión al ligando FKBP de la proteína quimérica, dando como resultado la oligomerización de la proteína quimérica.

3. Uso de un vector de expresión en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una dolencia seleccionada entre una enfermedad hiperproliferativa o una enfermedad infecciosa, modulando una respuesta inmunitaria /n v/vo en un sujeto, donde dicho vector de expresión se expresa en células dendríticas y dicho vector de expresión comprende una secuencia promotora de polinucleótidos, una secuencia de polinucleótidos que codifica una región dirigida a membrana, una secuencia de polinucleótidos que codifica un dominio de unión al ligando FKBP, una secuencia de polinucleótidos que codifica un polipéptido de la región citoplásmica CD40 que no tiene un dominio extracelular funcional, unido todo operativamente.

4. El uso o método de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, donde el vector de expresión comprende adicionalmente una segunda secuencia de polinucleótido que codifica un segundo dominio de unión al ligando

FKBP.

5. El uso o método de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, donde el ligando no es una proteína.

6. El uso de la reivindicación 3, donde el ligando se administra al sujeto para dar como resultado una oligomerización.

7. El uso de la reivindicación 3, donde el sujeto está inmunocomprometido.

8. El uso de la reivindicación 3, donde el sujeto inmunocomprometido está infectado por VIH.

9. Uso de una célula presentadora de antígenos transfectada o transducida en la fabricación de un medicamento para potenciar una respuesta inmunitaria en un sujeto, donde el sujeto tiene una dolencia seleccionada entre una enfermedad hiperproliferativa o una enfermedad infecciosa, donde

a) la célula presentadora de antígenos se transfecta o transduce con un vector de expresión;

b) dicho vector de expresión comprende una secuencia promotora de polinucleótidos, una secuencia de polinucleótidos que codifica una región dirigida a membrana, una secuencia de polinucleótidos que codifica un dominio de unión al ligando FKBP y una secuencia de polinucleótidos que codilíca un polipéptido de la región citoplásmica CD40 que no tiene un dominio extracelular funcional, unidos todos operativamente; y

c) las células presentadoras de antígenos transfectadas o transducidas se administran al sujeto simultánea o posteriormente a la administración de una composición inmunógena.

10. El uso de la reivindicación 9, donde la célula presentadora de antígenos transfectada o transducida se activa administrando un ligando que da como resultado una oligomerización.

11. El uso de la reivindicación 9, donde la célula presentadora de antígenos transfectada o transducida se carga con un antígeno.

12. El uso de la reivindicación 11, donde el antígeno es un antígenotumoral.

13. El uso de la reivindicación 11, donde la carga comprende pulsar dicha célula con péptidos o lisados celulares eluldos con ácido.

14. El uso de la reivindicación 11, donde la carga comprende electrofusionar dicha célula con antígenos o lisados celulares.

15. El uso de la reivindicación 11, donde la carga comprende transfectar dicha célula con ARNm de un antígeno.

16. El uso de la reivindicación 11, donde dichas células presentadoras de antígeno cargadas transfectadas o transducidas se administran a dicho sujeto por vía intradèrmica o subcutánea.

17. El uso de la reivindicación 9, donde dichas células presentadoras de antígeno se transfectan o transducen con el vector de expresión /n v/fro antes de administrarse a dicho sujeto.

18. Uso de un ligando de la reivindicación 1, donde el ligando es FK506 dimérico o un análogo dimérico de FK506.

19. Uso de un ligando de la reivindicación 1, donde la dolencia es una enfermedad hiperproliferativa.

20. Uso de un ligando de la reivindicación 1, donde el ligando es AP20187 o AP1903.

21. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1, 3, o 9, donde la dolencia se selecciona entre el grupo que

consiste en una dolencia preneoplásica, una dolencia hiperplásica, y cáncer.

22. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1, 3, o 9, donde la dolencia se selecciona entre el grupo que consiste en una infección bacteriana, infección vírica, infección por levaduras, e infección por protozoos.

23. El uso o método de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, donde el dominio de unión al ligando FKBP comprende un dominio FKBP12.

24. El uso o método de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, donde el dominio de unión al ligando FKBP comprende un dominio FKBP12(v36).

25. El uso o método de acuerdo con una de las reivindicaciones anteriores, donde el dominio de unión al ligando FKBP comprende dos coplas en tándem de un dominio FKBP12(v36).