Péptidos derivados de survivina y uso de los mismos.

Un péptido epítopo restringido a CMH de clase I derivado de survivina,

teniendo dicho epítopo la secuencia RISTFKNWPK como se especifica en SEQ ID NO: 58 y al menos una de las siguientes características:

(i) es capaz de unirse a la molécula de HLA-A3 de clase I con una afinidad medida por la cantidad del péptido que es capaz de tener la mitad de la recuperación máxima de la molécula de HLA de clase I (valor C50) que es como máximo de 50 μM como se determina mediante ensayo de estabilización de HLA,

(ii) es capaz de inducir células productoras de IFN-γ en una población de PBL de un paciente de cáncer a una frecuencia de al menos 1 por 104 PBL como se determina mediante un ensayo ELISPOT, y/o

(iii) es capaz de la detección in situ en un tejido tumoral de CTL que son reactivos con el péptido epítopo, para su uso como un medicamento.

Péptidos derivados de survivina y uso de los mismos Campo de la invención

La presente invención se refiere a un nuevo péptido derivado de survivina que tiene la secuencia RISTFKNWPK para su uso en medicina y en particular para su uso en el tratamiento del cáncer. En particular, el nuevo péptido es un epítopo de células T restringido a CMH de clase I que es capaz de provocar respuestas de células T citotóxicas en pacientes de cáncer, incluyendo respuestas in situ y ex vivo.

Antecedentes técnicos y técnica anterior

El proceso mediante el cual el sistema inmune de mamíferos reconoce y reacciona a los materiales extraños o ajenos es complejo. Una faceta importante del sistema es la respuesta de células T. Esta respuesta requiere que las células T reconozcan e interaccionen con complejos de moléculas de la superficie celular denominados antígenos leucocltaños humanos (HLA), que constituyen el complejo mayor de hlstocompatibilidad (CMH) humano, y péptidos. Los péptidos derivan de moléculas más grandes, que son procesadas por las células, que también presentan la molécula de HLA/CMH. La interacción de las células T y complejos HLA/péptido está restringida, requiriendo una célula T que sea específica para una combinación particular de una molécula de HLA y un péptido. Si no está presente una célula T específica, no hay respuesta de células T, Incluso si está presente su complejo asociado. De una manera similar, no hay respuesta si el complejo específico está ausente, pero la célula T está presente.

El mecanismo mediante el cual las células T reconocen las anormalidades celulares también se ha Implicado en cáncer. Por ejemplo, en el documento WO 92/20356, se da a conocer una familia de genes que se procesan a péptidos, que a su vez se expresan en las superficies celulares, y pueden producir lisis de las células tumorales por CTL específicos. Estos genes se denominan la familia MAGE, y se dice que codifican para precursores de antígeno de rechazo tumoral o moléculas TRAP, y los péptidos derivados de los mismos se denominan antígenos de rechazo tumoral o moléculas TRA.

En el documento WO 94/05304, se dan a conocer nonapéptldos que se unen a la molécula de HLA-A1. La referencia da a conocer que dada la especificidad conocida de péptidos particulares para moléculas de HLA particulares, se debe esperar que un péptido particular se una a una molécula de HLA, pero no a otras. Esto es significativo, porque diferentes individuos poseen diferentes fenotipos de HLA. Como resultado, aunque la identificación de un péptido particular como que es un asociado para una molécula de HLA específica tiene ramificaciones diagnósticas y terapéuticas, estas solamente son pertinentes para los individuos con ese fenotipo de HLA particular.

Se han caracterizado vahos péptidos presentados por las moléculas de CMH, y se ha encontrado que algunos de estos pueden llevar modificaciones postraduccionales que posiblemente tengan un impacto sobre la funcionalidad del complejo HLA-péptido. De esta manera, un número de estudios han asociado las alteraciones en el patrón de fosforilación con la transformación maligna. Además, se ha mostrado que la fosforilación podría tener un efecto neutro, negativo, o incluso positivo, sobre la unión del péptido al CMH de clase I, y que se podrían generar CTL específicos de fosfopéptido, que discriminarían entre las versiones fosforilada y no fosforilada del péptido, mostrando que tales CTL lo más probablemente sean parte del repertorio de CTL restringidos a CMH de clase I. Recientemente, se ha mostrado que los péptidos fosforilados realmente son procesados de una forma natural y presentados por las moléculas de CMH de clase I in vivo. Adlcionalmente, se ha establecido la presencia de péptidos fosforilados en extractos de moléculas de clase I aisladas de varias células B transformadas por diferentes EBV.

De esta manera, está bien establecido que los epítopos peptídlcos derivados de antígenos asociados a tumor (TAA) pueden ser reconocidos como antígenos por los linfocitos T cltotóxicos (CTL) en el contexto de las moléculas de CMH (1). Sin embargo, aunque en general se acepta que la mayoría de, si no todos, los tumores son antigénicos, solamente unos cuantos son en realidad ¡nmunogénlcos en el sentido de que la evolución del tumor la controla fácilmente el sistema inmune.

Para superar esta limitación, se han iniciado varios ensayos ¡nmunoterapéuticos, por ejemplo vacunaciones con péptidos derivados de TAA. Para melanoma, el tumor para el que se ha caracterizado el mayor número de TAA definidos por CTL, se han inducido poderosas respuestas de CTL contra los antígenos mediante vacunación y algunos pacientes experimentaron una remisión completa de su enfermedad (2,3). Sin embargo, la mayoría de los epítopos peptídicos utilizados en estos ensayos de vacunación son específicos del melanocito, y estos péptidos no se pueden aplicar para tumores de origen no melanocítlco. Además, la expresión de estos TAA es heterogénea entre tumores de diferentes pacientes, e incluso puede variar entre las metástasis obtenidas de un paciente. Sin embargo, durante el último par de años, se han identificado un número de antígenos peptídicos específicos de tumores, que se expresan en un número de cánceres diferentes, es decir, HER-2 (4), Muc-1 (5) y telomerasa (6).

También se ha mostrado que mediante la manipulación apropiada los antígenos tumorales presentes en los tumores se pueden exponer al sistema inmune. Hay estudios que han mostrado que el brazo CTL CD8+ de la respuesta inmune, solo o en combinación con células Th CD4+, constituye el brazo efector anti-tumoral primario de la respuesta inmune adaptativa. Hasta ahora, el enfoque ha estado principalmente sobre el brazo CTL de la respuesta inmune.

Sin embargo, cada vez está más claro que la respuesta de células T CD4 desempeña un papel esencial en el rechazo del tumor, en especial en la fase de inducción o en la extensión de una respuesta de CTL in vivo. Por consiguiente, la incorporación de antígenos tumorales restringidos a la clase II en protocolos de vacunación de tumores eficaces, podría aumentar la eficacia de las vacunas.

La apoptosls es un programa genético de suicidio celular, y se ha sugerido que la Inhibición de la apoptosls es un mecanismo importante involucrado en la formación de cáncer mediante la extensión del lapso de vida de las células, que favorece la acumulación de mutaciones transformantes (7). La survivina es un miembro recientemente Identificado de la familia de Inhibidores de las proteínas de apoptosis (IAP). En un análisis de expresión genética global de aproximadamente 4 millones de transcritos, se identificó la survivina como uno de los genes principales Invariablemente aumentados en muchos tipos de cáncer, pero no en tejido normal (8). Los tumores malignos sólidos que sobreexpresan survivina Incluyen cáncer de pulmón, colon, mama, páncreas y próstata, así como tumores malignos hematopoyéticos (9). Adlclonalmente, se han descrito series de melanomas y cánceres de piel no melanoma como invariablemente positivos para survivina (10, 11). La sobreexpresión de survivina en la mayoría de los cánceres humanos sugiere un papel general de inhibición de la apoptosis en la evolución del tumor, una noción sustanciada por la observación de que en el caso del cáncer colorrectal y de vejiga, así como en neuroblastoma, la expresión de survivina estaba asociada con un pronóstico desfavorable. Por el contrario, la survivina es indetectable en tejidos adultos normales. Estas características califican a la survivina como un TAA adecuado tanto para fines diagnósticos como terapéuticos.

Por consiguiente, durante la última década se han identificado un gran número de TAA que son reconocidos por los CTL de una forma restringida al complejo mayor de histocompatibilidad (CMH). Debido a que la survivina se sobreexpresa en la mayoría de los cánceres humanos y la inhibición de su función produce un aumento de la apoptosis, esta proteína puede servir como una diana para las respuestas terapéuticas de CTL. La proteína survivina y el potencial uso diagnóstico y terapéutico de la misma se dan a conocer en (8) y en el documento US 6.245.523. La survivina es una proteína cltoplásmica de 16,5 kDa que contiene un único BIR y una región carboxi-terminal enrollada altamente cargada en lugar de un dedo RING, que inhibe la apoptosis inducida por la retirada de factor de crecimiento (IL-3) cuando se transfiere a precursores de células B. El gen que codifica la survivina es casi idéntico a la secuencia del receptor de proteasa de células efectoras-1 (EPR-1), pero está orientado en la dirección opuesta, lo que sugiere de esta manera la... [Seguir leyendo]

1. Un péptido epítopo restringido a CMH de clase I derivado de survivina, teniendo dicho epítopo la secuencia RISTFKNWPK como se especifica en SEQ ID NO: 58 y al menos una de las siguientes características:

(i) es capaz de unirse a la molécula de HLA-A3 de clase I con una afinidad medida por la cantidad del péptido que es capaz de tener la mitad de la recuperación máxima de la molécula de HLA de clase I (valor C50) que es como máximo de 50 pM como se determina mediante ensayo de estabilización de HLA,

(ii) es capaz de inducir células productoras de IFN-y en una población de PBL de un paciente de cáncer a una frecuencia de al menos 1 por 104 PBL como se determina mediante un ensayo ELISPOT, y/o

(iii) es capaz de la detección in situ en un tejido tumoral de CTL que son reactivos con el péptido epítopo, para su uso como un medicamento.

2. Un péptido según la reivindicación 1 para su uso como un medicamento, teniendo dicho péptido un valor C50 que es como máximo de 30 pM.

3. Un péptido según la reivindicación 1 o 2 para su uso como un medicamento, teniendo dicho péptido un valor C50 que es como máximo de 20 pM.

4. Un péptido según cualquiera de las reivindicaciones precedentes para su uso como un medicamento, comprendiendo dicho péptido como máximo 20 residuos de aminoácidos.

5. Un péptido según cualquiera de las reivindicaciones precedentes para su uso como un medicamento, comprendiendo dicho péptido como máximo 10 residuos de aminoácidos.

6. Un péptido según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para su uso como un medicamento, siendo dicho péptido capaz de

(i) inducir células productoras de IFN-y en una población de PBL de un paciente de cáncer a una frecuencia de al menos 10 por 104 PBL; y/o

(¡i) inducir células productoras de IFN-y en una población de PBL de un paciente que tiene una enfermedad cancerosa donde se expresa survivina, tal como una enfermedad cancerosa seleccionada del grupo que consiste en un tumor maligno hematopoyético incluyendo leucemia linfática crónica y leucemia mieloide crónica, melanoma, cáncer de mama, cáncer cervical, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de páncreas y cáncer de próstata.

7. Una composición farmacéutica que comprende un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1-6 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. Una composición farmacéutica según la reivindicación 7, siendo dicha composición una formulación de liberación con el tiempo.

9. Una composición farmacéutica según la reivindicación 7, que adicionalmente comprende un péptido restringido a una molécula de HLA-A y un péptido restringido a una molécula de HLA-B, y opcionalmente un péptido restringido a una molécula de HLA-C.

10. Una composición farmacéutica que comprende un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1-6 y un vehículo farmacéuticamente aceptable, para su uso como un medicamento.

11. Una composición farmacéutica según la reivindicación 10 para su uso como un medicamento, siendo dicha composición una formulación de liberación con el tiempo.

12. Una composición farmacéutica según la reivindicación 10 para su uso como medicamento, comprendiendo dicha composición adicionalmente un péptido restringido a una molécula de HLA-A y un péptido restringido a una molécula de HLA-B, y opcionalmente un péptido restringido a una molécula de HLA-C.

13. Un péptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 para su uso en el tratamiento de cáncer.

14. Un péptido según la reivindicación 13 para su uso en el tratamiento de cáncer, en el que dicho cáncer se selecciona del grupo que consiste en un tumor maligno hematopoyético incluyendo leucemia linfática crónica y leucemia mieloide crónica, melanoma, cáncer de mama, cáncer cervical, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de páncreas y cáncer de próstata.