Vacuna terapéutica contra el cáncer.

Fragmento de polipéptido que provoca una respuesta de células T y que comprende un péptido,

que consiste en al menos 9 residuos de aminoácido consecutivos de ML-IAP y se selecciona del grupo que consiste en:

(i) RLQEERTCK (SEQ ID NO: 245),

(ii) RLQEERTCKV (SEQ ID NO: 297),

(iii) QLCPICRAPV (SEQ ID NO: 298),

(iv) VLEPPGARDV (SEQ ID NO: 301);

consistiendo dicho fragmento de polipéptido como máximo en aminoácidos consecutivos.

Vacuna terapéutica contra el cáncer.

Campo de la invención La presente solicitud describe fragmentos de ML-IAP (livina) y una vacuna terapéutica que comprende uno o más fragmentos de polipéptido de ML-IAP. La vacuna puede usarse para el tratamiento profiláctico, de mejora y/o curativo de, por ejemplo, cánceres y enfermedades autoinmunitarias.

Antecedentes de la invención Está bien establecido que pueden reconocerse epítopos peptídicos derivados de antígenos asociados a tumor (TAA) humanos por linfocitos T citotóxicos (CTL) en el contexto de moléculas de CMH1 y que la mayoría (si no la totalidad) de los tumores expresan tales antígenos. Por consiguiente, están realizándose apasionantes esfuerzos clínicos para seleccionar como diana estos TAA en estrategias tales como vacunación y terapia con células T adoptiva con el fin de generar respuestas de CTL antitumorales eficaces en pacientes2-5 .

Para el melanoma, el tumor para el que se ha caracterizado el mayor número de TAA definidos por CTL, se han inducido potentes respuestas de CTL contra antígenos mediante vacunación y algunos pacientes han experimentado una remisión completa de su enfermedad6, 7.

Sin embargo, la inmunoselección de variantes con pérdida de antígeno puede ser un obstáculo grave para el potencial curativo de la mayoría de los epítopos de CTL conocidos en la oncología clínica, y la selección de tumores mutantes deficientes en antígenos es una limitación bien reconocida en las estrategias terapéuticas cuando se seleccionan como diana antígenos que no tienen un papel en el crecimiento del cáncer5, 27, 28. El motivo es que la mayoría de los péptidos caracterizados se derivan de polipéptidos que no son esenciales para la supervivencia de la célula tumoral. Por tanto, si se inducen potentes respuestas de CTL contra estos antígenos peptídicos mediante medidas terapéuticas tales como vacunaciones, es muy probable que las células tumorales que carecen de la expresión del antígeno seleccionado como diana escapen de las respuestas inmunitarias provocadas8, 9 .

Existe una necesidad de vacunas terapéuticas más eficaces y métodos mejorados de tratamiento de cáncer y enfermedades autoinmunitarias.

Sumario de la invención La aplicación terapéutica de antígenos tumorales cuya expresión es esencial para la supervivencia de células tumorales representa una estrategia para el tratamiento del cáncer evitando que surjan variantes con pérdida de antígeno debido a inmunoselección, particularmente durante la terapia inmunitaria. Sin embargo, la identificación de fragmentos específicos que comprenden buenas propiedades antigénicas es difícil.

La familia de proteínas inhibidoras de la apoptosis (IAP) 12 representa un ejemplo de antígenos tumorales cuya expresión es esencial para la supervivencia de células tumorales. La inhibición de la apoptosis tanto potencia la supervivencia de células cancerosas como previene que las células cancerosas escapen de terapias citotóxicas y la vigilancia inmunitaria.

Se han descrito varias IAP diferentes. Sus patrones de expresión diferentes sugieren un papel específico del órgano en promover la supervivencia celular durante el desarrollo y la homeostasis tisular. Mientras que X-IAP, C-IAP1 y C-IAP2 se expresan de manera relativamente ubicua, la survivina sólo se expresa en tejidos fetales y tumorales.

El polipéptido inhibidor de la apoptosis ML-IAP tiene un patrón de expresión bastante selectivo, ya que se detecta predominantemente en melanomas y algunos otros tejidos13, 14. La única otra IAP con expresión bien documentada en melanoma es survivina.

Puede detectarse ML-IAP en la mayoría de las líneas celulares de melanoma sometidas a prueba pero no en melanocitos normales14. Las líneas celulares de melanoma con altos niveles de ML-IAP son más resistentes a apoptosis inducida por fármacos de lo que lo son los melanocitos primarios normales. Por tanto, ML-IAP podría ser un factor celular crítico y niveles de expresión aumentados de ML-IAP conferir resistencia frente a estímulos apoptóticos, contribuyendo así a la patogénesis y la progresión de melanomas malignos.

El polipéptido de ML-IAP inhibe la apoptosis y la muerte celular inducidas mediante receptores de muerte y por tanto puede esperarse que agentes quimioterápicos se vean impedidos por la expresión de ML-IAP.

Por consiguiente, una expresión elevada de ML-IAP hace que las células de melanoma sean resistentes a estímulos apoptóticos y por tanto contribuye posiblemente a la patogénesis de este tumor maligno.

La presente solicitud demuestra que células T que se infiltran en el entorno tumoral o que circulan en la sangre periférica de pacientes con melanoma reconocen específicamente péptidos derivados de ML-IAP. Por tanto, por una parte, ML-lAP es importante para la supervivencia de la célula cancerosa y por otra parte es una diana para células efectoras inmunológicas.

La presente invención se refiere en un aspecto a fragmentos de ML-IAP (SEQ ID NO: 1) que consisten en al menos 9 residuos de aminoácido consecutivos de ML-IAP y se seleccionan del grupo que consiste en SEQ ID NO: 245, SEQ ID NO: 297, SEQ ID NO: 298, SEQ ID NO: 301, consistiendo dicho fragmento de polipéptido como máximo en 15 aminoácidos consecutivos.

En otro aspecto preferido, la presente solicitud se refiere a una vacuna terapéutica que comprende ML-IAP (SEQ ID NO: 1) , y/o uno o más fragmentos de ML-IAP (SEQ ID NO: 1) que pueden provocar una respuesta de células T específica, incluyendo una respuesta que implica la activación de células T citotóxicas y/o células T cooperadoras (Th) . La composición de vacuna comprende además preferiblemente un adyuvante y/o un portador.

En aún otro aspecto, se proporciona una composición farmacéutica que comprende ML-IAP (SEQ ID NO: 1) , y/o uno o más fragmentos de ML-IAP (SEQ ID NO: 1) que pueden provocar una respuesta de células T específica, incluyendo una respuesta que implica la activación de células T citotóxicas y/o células T cooperadoras (Th) , y un compuesto bioactivo seleccionado del grupo que consiste en un agente quimioterápico o un agente inmunoterápico. La composición farmacéutica puede comprender además un adyuvante y/o un portador.

En todavía un aspecto adicional de la solicitud, se proporciona un kit de partes que comprende ML-IAP (SEQ ID NO: 1) , y/o uno o más fragmentos de ML-IAP (SEQ ID NO: 1) que pueden provocar una respuesta de células T específica, incluyendo una respuesta que implica la activación de células T citotóxicas y/o células T cooperadoras (Th) , y un compuesto bioactivo seleccionado del grupo que consiste en un agente quimioterápico o un agente inmunoterápico, en el que el uno o más fragmentos de ML-IAP (SEQ ID NO: 1) que pueden provocar una respuesta de células T específica y el compuesto bioactivo seleccionado del grupo que consiste en un agente quimioterápico o un agente inmunoterápico, pueden administrarse simultáneamente, o secuencialmente en cualquier orden. El kit de partes puede comprender opcionalmente un manual que comprende información sobre el régimen de dosificación o la administración del fragmento de ML-IAP y el compuesto bioactivo.

En todavía un aspecto adicional de la invención, se proporciona el uso de un fragmento de ML-IAP en la fabricación de una composición de vacuna que puede provocar una respuesta de células T específica en un individuo al que se le ha administrado la composición de vacuna.

En aún otro aspecto de la invención, se proporciona el uso de un fragmento de ML-IAP en combinación con un agente bioactivo en la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento de un cáncer y/o una enfermedad autoinmunitaria en un individuo que necesita dicho tratamiento.

En todavía un aspecto adicional de la invención, se proporciona un método para activar y expandir células T específicas para ML-IAP o fragmentos del mismo, comprendiendo dicho método las etapas de cultivar conjuntamente células T y ML-IAP, y/o al menos un fragmento del mismo, activando así las células T, y aislar células T específicas para ML-IAP activadas y/o células T específicas para fragmento de ML-IAP.

En aún otro aspecto de la invención, se proporciona un método para tratar a un individuo al que se le ha diagnosticado un cáncer, o con riesgo de desarrollar un cáncer, comprendiendo dicho método las etapas de administrar a dicho individuo al menos una célula T específica para ML-IAP aislada y activada, y/o al menos una célula T específica para fragmento de ML-IAP aislada y activada.

Breve descripción de las figuras

Figura 1

Respuesta de células T contra el péptido... [Seguir leyendo]

1. Fragmento de polipéptido que provoca una respuesta de células T y que comprende un péptido, que consiste en al menos 9 residuos de aminoácido consecutivos de ML-IAP y se selecciona del grupo que consiste en:

(i) RLQEERTCK (SEQ ID NO: 245) ,

(ii) RLQEERTCKV (SEQ ID NO: 297) ,

(iii) QLCPICRAPV (SEQ ID NO: 298) ,

(iv) VLEPPGARDV (SEQ ID NO: 301) ; consistiendo dicho fragmento de polipéptido como máximo en 15 aminoácidos consecutivos.

2. Fragmento de polipéptido según la reivindicación 1, en el que dicho fragmento de polipéptido

(a) tiene un valor de C50 inferior a 1000, midiéndose dicho valor como la concentración (uM) del fragmento de polipéptido requerida para la mitad de la unión máxima a una molécula de clase I de CMH,

(b) provoca una respuesta de células T que tiene más de 50 puntos específicos para péptido por 105 células medida en un ensayo ELISPOT realizado tras estimulación previa in vitro; o que tiene más de 50 puntos específicos para péptido por 106 células medidos en un ensayo ELISPOT realizado (i) sin estimulación previa in vitro; o (ii) usando PBL de un individuo que no se ha sometido a terapia inmunitaria contra una enfermedad neoplásica, o

(c) puede activar el crecimiento de células T in vitro de modo que pueden recogerse más de 105 CTL específicos para antígeno tras cuatro ciclos de estimulación comenzando con 104 PBMC.

3. Fragmento de polipéptido según la reivindicación 2, en el que dicho valor de C50 es inferior a 100.

4. Fragmento de polipéptido según la reivindicación 2 ó 3, en el que dicho valor de C50 es inferior a 31.

5. Fragmento de polipéptido según cualquiera de las reivindicacione.

2. 4, en el que dicho valor de C50 es inferior a

5.

6. Fragmento de polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 - 5, consistiendo dicho fragmento de polipéptido como máximo en 10 aminoácidos consecutivos.

7. Método ex vivo de selección de un péptido que comprende un fragmento de ML-IAP para su uso en una composición de vacuna, comprendiendo dicho método las etapas de

(i) proporcionar un fragmento de polipéptido que comprende un péptido que consiste en al menos 9 residuos de aminoácido consecutivos de ML-IAP (SEQ ID NO: 1) seleccionado del grupo que consiste en: RLQEERTCK (SEQ ID NO: 245) , QILGQLRPL (SEQ ID NO: 55) , LTAEVPPEL (SEQ ID NO: 100) , GMGSEELRL (SEQ ID NO: 84) , ELPTPRREV (SEQ ID NO: 200) , RLQEERTCKV (SEQ ID NO: 297) , QLCPICRAPV (SEQ ID NO: 298) , LLRSKGRDFV (SEQ ID NO: 300) , VLEPPGARDV (SEQ ID NO: 301) y PLTAEVPPEL (SEQ ID NO: 302) , en el que dicho fragmento de polipéptido consiste como máximo en 15 aminoácidos,

(ii) someter a prueba respuestas de células T específicas contra fragmentos de ML-IAP mediante un ensayo ELISPOT, usando linfocitos de sangre periférica (PBL) aislados derivados de un individuo que no se ha inmunizado previamente con ML-IAP o un fragmento del mismo, y

(iii) seleccionar fragmentos de ML-IAP en los que dicha respuesta de células T corresponde a, o es mejor que, un criterio de selección predeterminado.

8. Método según la reivindicación 7, en el que dicho criterio de selección predeterminado es más de 50 puntos específicos para péptido por 106 células en dicho ensayo ELISPOT.

9. Fragmento de polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para su uso como medicamento.

10. Fragmento de polipéptido según la reivindicación 9, para su uso como medicamento para el tratamiento de enfermedad autoinmunitaria o cáncer mediado por o relacionado con ML-IAP.

11. Composición de vacuna que comprende al menos un fragmento de polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 – 6, junto con un portador y/o adyuvante farmacéuticamente aceptable.

12. Composición de vacuna según la reivindicación 11, que comprende un adyuvante seleccionado del grupo que consiste en Montanide ISA- 51 y QS-21.

13. Composición de vacuna según la reivindicación 11, que comprende células dendríticas como portador.

14. Composición de vacuna según la reivindicación 11, que comprende más de un fragmento de polipéptido diferente, seleccionándose dicho fragmento de polipéptido del grupo que se especifica en la reivindicación 1.

15. Composición de vacuna según la reivindicación 12, que comprende al menos dos fragmentos de polipéptido diferentes, seleccionándose dicho fragmento de polipéptido del grupo que se especifica en la reivindicación 1, pudiendo cada uno asociarse con una molécula de HLA diferente seleccionada del grupo que consiste en HLA-A2, HLA-A1, HLA-A3, HLA-A24, HLA-B7, HLA-B27 y HLA-B44.

16. Composición farmacéutica que comprende una composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 11-15 y un medicamento anticancerígeno seleccionado del grupo que consiste en un agente quimioterápico o inmunoterápico.

17. Kit de partes que comprende (i) una composición de vacuna según cualquiera de las reivindicacione.

11. 15 y

(ii) un medicamento anticancerígeno seleccionado del grupo que consiste en un agente quimioterápico o inmunoterápico.

18. Uso de uno o más fragmentos de polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 - 6, o una composición de vacuna según cualquiera de las reivindicacione.

11. 15, o una composición farmacéutica según la reivindicación 16, o un kit de partes según la reivindicación 17, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria o cáncer mediado por o relacionado con ML-IAP en un individuo.

19. Uso según la reivindicación 18, en el que al menos uno de dichos fragmentos de polipéptido se limita a una molécula de HLA presente en dicho individuo.

20. Uso según la reivindicación 18 ó 19, en el que dicho individuo no se ha sometido anteriormente a terapia inmunitaria contra una enfermedad neoplásica.

21. Anticuerpo que puede reconocer específicamente un fragmento de polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 - 6.

22. Método para activar y expandir células T específicas para ML-IAP o fragmentos del mismo que comprende las etapas de cultivar conjuntamente células T y uno o más fragmentos de polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

23. Método según la reivindicación 22, comprendiendo el método

(a) generar y cargar células dendríticas (DC) derivadas de monocitos con dicho (s) fragmento (s) de polipéptido y cultivar conjuntamente dichas DC y monocitos de sangre periférica (PBMC) que comprenden células T,

o

(b) generar células de Drosophila melanogaster que expresan una o más moléculas de HLA diferentes, cargar dichas células de Drosophila melanogaster con dicho (s) fragmento (s) de polipéptido y cultivar conjuntamente dichas células de Drosophila con monocitos de sangre periférica (PBMC) que comprenden células T o células T purificadas a partir de PBMC.

24. Uso de células T específicas para ML-IAP obtenidas mediante el método según la reivindicación 22 ó 23, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria o cáncer.