Uso terapéutico de péptidos derivados de la proteína Bcl-XL en pacientes con cáncer.

Péptido inmunogénicamente activo aislado que comprende como máximo 15 aminoácidos derivado de laproteína Bcl-XL,

que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en: YLNDHLEPWI(SEQ ID NO: 42), RIAAWMATYL (SEQ ID NO: 45), VLVSRIAAWM (SEQ ID NO: 48) y VAFFSFGGAL (SEQID NO: 49) para su uso como medicamento.

Uso terapéutico de péptidos derivados de la proteína Bcl-XL en pacientes con cáncer

Campo de la invención La presente invención se refiere en general al campo del tratamiento y la profilaxis contra el cáncer. En particular, se proporcionan proteínas reguladoras de la apoptosis aisladas o fragmentos peptídicos de las mismas que pueden provocar respuestas inmunitarias contra el cáncer. Específicamente, se proporciona el uso de tales proteínas que pertenecen a la familia de proteínas Bcl-2 y fragmentos peptídicos inmunogénicos de las mismas en el diagnóstico, pronóstico y tratamiento contra el cáncer.

Antecedentes técnicos y técnica anterior

El desarrollo de resistencia de las células cancerosas a una amplia variedad de agentes quimioterápicos representa un obstáculo principal en el tratamiento satisfactorio del cáncer. Se observa resistencia a fármacos en una amplia gama de tipos de células cancerosas. Muchos mecanismos contribuyen a la resistencia a fármacos, incluyendo inactivación del fármaco, extrusión del fármaco por bombas de la membrana celular, mutaciones de dianas farmacológicas y fallo para iniciar la apoptosis. La prevención de la apoptosis puede resultar de una variedad de estados, incluyendo la retención del potencial de membrana mitocondrial y la estimulación de citocinas.

La búsqueda de proteínas responsables de los fenotipos resistentes a fármacos ha implicado a la molécula antiapoptótica Bcl-2. La sobreexpresión de Bcl-2 desempeña un papel en el desarrollo de la resistencia a fármacos en la leucemia y otros tumores propensos a la apoptosis y, por consiguiente, un mal pronóstico en diversos cánceres en seres humanos. Bcl-2 pertenece a una familia de proteínas, la familia Bcl-2, cuyos miembros regulan la apoptosis. La familia incluye miembros tanto proapoptóticos como antiapoptóticos. Aunque sigue siendo difícil de alcanzar un entendimiento preciso de cómo Bcl-2 ejerce sus efectos antiapoptóticos, se ha descubierto que se sobreexpresa en muchos cánceres incluyendo cánceres de pulmón, colorrectal, de próstata y de mama así como en leucemias y linfomas.

Por tanto, Bcl-2 es un factor celular crítico, ya que el aumento de los niveles de expresión de esa proteína confiere resistencia a estímulos apoptóticos, contribuyendo de ese modo a la patogenia y progresión del cáncer.

El proceso mediante el cual el sistema inmunitario de los mamíferos reconoce y reacciona frente a materiales extraños o ajenos es complejo. Una faceta importante del sistema es la respuesta de células T. Esta respuesta requiere que las células T reconozcan e interaccionen con complejos de moléculas de la superficie celular denominadas antígenos leucocitarios humanos (HLA) que constituyen el complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) humano, y péptidos. Los péptidos se derivan de moléculas más grandes, que se procesan por las células, que a su vez presentan la molécula de HLA/CMH. La interacción de las células T y los complejos de HLA/péptido está restringida, requiriendo una célula T que es específica para una combinación particular de una molécula de HLA y un péptido. Si no está presente una célula T específica, no existe ninguna respuesta de células T incluso si está presente su complejo asociado. De manera similar, no existe ninguna respuesta si el complejo específico está ausente, pero la célula T está presente.

El mecanismo por el que las células T reconocen anomalías celulares se ha implicado también en el cáncer. Por ejemplo, en el documento WO92/20356, se da a conocer una familia de genes que se procesan para dar péptidos que, a su vez, se expresan sobre superficies celulares, y pueden conducir a la lisis de las células tumorales mediante CTL específicos. Estos genes se denominan la familia MAGE y se dice que codifican para “precursores de antígenos de rechazo de tumores” o moléculas “TRAP”, y los péptidos derivados de los mismos se denominan “antígenos de rechazo de tumores” o “TRA”.

En el documento WO 94/05304, se dan a conocer nonapéptidos que se unen a la molécula HLA-A1. Esta referencia da a conocer que, dada la especificidad conocida de péptidos particulares por moléculas de HLA particulares, debería esperarse que un péptido particular se una a una molécula de HLA, pero no a otras. Esto es significativo, ya que individuos diferentes presentan fenotipos de HLA diferentes. Como resultado, mientras que la identificación de un péptido particular como una pareja para una molécula de HLA específica tiene repercusiones diagnósticas y terapéuticas, éstas son sólo relevantes para individuos con ese fenotipo de HLA particular.

En el documento WO 98/58541, se dan a conocer péptidos de 5-17 aminoácidos de longitud que inhiben la unión del citocromo C a un miembro antiapoptótico de la familia relacionada con Bcl-2 inhibiendo de ese modo la apoptosis.

Por tanto, está bien establecido que los epítopos peptídicos derivados de antígenos asociados a tumores (TAA) pueden ser reconocidos como antígenos por los linfocitos T citotóxicos (CTL) en el contexto de moléculas de CMH. Sin embargo, aunque generalmente se acepta que la mayoría si no todos los tumores son antigénicos, sólo algunos son de hecho inmunogénicos en el sentido de que la progresión tumoral se controla fácilmente por el sistema inmunitario.

Para vencer esta limitación, se han iniciado varios estudios inmunoterapéuticos, por ejemplo vacunaciones con

péptidos derivados de TAA. Para el melanoma, el tumor para el que se ha caracterizado el mayor número de TAA definidos por CTL, se han inducido respuestas de CTL potentes frente a antígenos mediante vacunación, y algunos pacientes experimentaron una remisión completa de su enfermedad. Sin embargo, la mayoría de los epítopos peptídicos usados en estos ensayos de vacunación son específicos de melanocitos, y estos péptidos no pueden aplicarse para tumores de origen no melanocítico. Además, la expresión de estos TAA es heterogénea entre tumores de pacientes diferentes y puede incluso variar entre metástasis obtenidas de un paciente. Sin embargo, durante los últimos dos años se han identificado varios antígenos peptídicos específicos de tumores, que se expresan en varios cánceres diferentes, es decir, HER-2, Muc-1 y telomerasa.

La apoptosis es un programa genético de suicidio celular, y se ha sugerido que la inhibición de la apoptosis es un mecanismo importante implicado en la formación del cáncer prolongando la vida de las células que favorecen la acumulación de mutaciones transformantes. La survivina es un miembro de la familia de proteínas inhibidoras de la apoptosis (IAP) recientemente identificado. En un análisis de expresión génica global de aproximadamente 4 millones de transcritos, se identificó la survivina como uno de los principales genes regulados por incremento invariablemente en muchos tipos de cáncer pero no en tejido normal. Los tumores malignos sólidos que sobreexpresan survivina incluyen cáncer de pulmón, de colon, de mama, de páncreas y de próstata así como tumores malignos hematopoyéticos. Adicionalmente, se ha informado de que series de cánceres de piel de melanoma y no melanoma son invariablemente positivos para survivina. La sobreexpresión de survivina en la mayoría de los cánceres en seres humanos sugiere un papel general de la inhibición de la apoptosis en la progresión tumoral, un concepto corroborado por la observación de que en el caso de cáncer colorrectal y de vejiga, así como neuroblastoma, la expresión de survivina estaba asociada a un pronóstico desfavorable. Por el contrario, la survivina no puede detectarse en tejidos adultos normales. Estas características cualifican a la survivina como un TAA adecuado para fines tanto diagnósticos como terapéuticos.

Por tanto, durante la última década se ha identificado un gran número de TAA que se reconocen por los CTL de una manera restringida por el complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) . Ya que la survivina se sobreexpresa en la mayoría de los cánceres en seres humanos y la inhibición de su función da como resultado un aumento de la apoptosis, esta proteína puede servir como diana para respuestas de CTL terapéuticas. La proteína survivina y el uso diagnóstico y terapéutico potencial de la misma se dan a conocer en (1) y en el documento US 6.245.523. La survivina es una proteína citoplasmática de 16, 5 kDa que contiene un único BIR y una región de superhélice carboxilo terminal altamente cargada de un dedo RING, que inhibe la apoptosis inducida por la retirada del factor de crecimiento (IL-3) cuando se transfiere en precursores de células B. El gen que codifica para survivina es casi idéntico... [Seguir leyendo]

1. Péptido inmunogénicamente activo aislado que comprende como máximo 15 aminoácidos derivado de la proteína Bcl-XL, que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en: YLNDHLEPWI (SEQ ID NO: 42) , RIAAWMATYL (SEQ ID NO: 45) , VLVSRIAAWM (SEQ ID NO: 48) y VAFFSFGGAL (SEQ

ID NO: 49) para su uso como medicamento.

2. Péptido según la reivindicación 1, para su uso como medicamento, siendo dicho péptido un péptido restringido a CMH de clase I, que tiene al menos una de las siguientes características;

(i) puede unirse a la molécula de HLA de clase I a la que está restringido a una afinidad, tal como se mide mediante la cantidad del péptido que puede realizar la mitad de la recuperación máxima de la molécula de HLA de clase I (valor C50) , que es como máximo de 50 !M tal como se determina mediante el ensayo de unión-ensamblaje tal como se describe en el presente documento,

(ii) puede provocar células productoras de INF-∀ en una población de PBL de un paciente con cáncer a una frecuencia de al menos 1 por 104 PBL tal como se determina mediante un ensayo ELISPOT, y/o (iii) puede realizar la detección in situ en un tejido tumoral de CTL que son reactivos con el péptido de 15 epítopo.

3. Péptido según la reivindicación 2 para su uso como medicamento, que tiene un valor C50 que es como máximo de 30 !M.

4. Péptido según la reivindicación 3 para su uso como medicamento, que tiene un valor C50 que es como máximo de 20 !M.

5. Péptido según la reivindicación 4 para su uso como medicamento, que tiene un valor C50 que es como máximo de 10 !M.

6. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1-5 para su uso como medicamento, que puede provocar una respuesta inmunitaria celular en un paciente con cáncer.

7. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1-6 para su uso como medicamento, que está restringido 25 a una molécula HLA-A del CMH de clase I o una HLA-B del CMH de clase I.

8. Péptido según la reivindicación 7 para su uso como medicamento, que está restringido a una especie de HLA-A del CMH de clase I seleccionada del grupo que consiste en HLA-A1, HLA-A2, HLA-A3, HLA-A11 y HLA-A24.

9. Péptido según la reivindicación 8 para su uso como medicamento, que está restringido a HLA-A2.

10. Péptido según la reivindicación 7 para su uso como medicamento, que está restringido a una especie de HLA-B del CMH de clase I seleccionada del grupo que consiste en HLA-B7, HLA-B35, HLA-B44, HLA-B8, HLA-B15, HLA-B27 y HLA-B51.

11. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para su uso como medicamento, que es un nonapéptido o un decapéptido.

12. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 3-11 para su uso como medicamento, que puede provocar células productoras de INF-∀ en una población de PBL de un paciente con cáncer a una frecuencia de al menos 10 por 104 PBL.

13. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 3-11 para su uso como medicamento, que puede provocar

células productoras de INF-∀ en una población de PBL de un paciente que tiene una enfermedad de cáncer 40 en la que se expresa la proteína Bcl-XL.

14. Péptido según la reivindicación 13 para su uso como medicamento, en el que la enfermedad de cáncer se selecciona del grupo que consiste en un tumor maligno hematopoyético incluyendo leucemia linfática crónica y leucemia mieloide crónica, melanoma, cáncer de mama, cáncer de cérvix, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de páncreas y cáncer de próstata.

15. Composición de vacuna que comprende un péptido inmunogénicamente activo aislado derivado de Bcl-XL según la reivindicación 1-15, o un ácido nucleico que codifica para dicho péptido, en la que dicho péptido es un péptido restringido a CMH de clase I que tiene al menos una de las siguientes características;

(i) puede unirse a la molécula de HLA de clase I a la que está restringido a una afinidad tal como se mide mediante la cantidad del péptido que puede realizar la mitad de la recuperación máxima de la molécula de 50 HLA de clase I (valor C50) que es como máximo de 50 !M tal como se determina mediante el ensayo de unión-ensamblaje tal como se describe en el presente documento,

(ii) puede provocar células productoras de INF-∀ en una población de PBL de un paciente con cáncer a una frecuencia de al menos 1 por 104 PBL tal como se determina mediante un ensayo ELISPOT, y/o (iii) puede realizar la detección in situ en un tejido tumoral de CTL que son reactivos con el péptido de 5 epítopo,

para su uso como medicamento.

16. Composición de vacuna según la reivindicación 15 para su uso como medicamento, en la que la vacuna provoca la producción en un paciente vacunado de células T efectoras que tienen un efecto citotóxico frente a las células cancerosas.

17. Composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 15-16 para su uso como medicamento, comprendiendo la composición un adyuvante.

18. Composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 15-17 para su uso como medicamento, que comprende un péptido que está restringido a una molécula HLA-A del CMH de clase I en combinación con un péptido que está restringido a una molécula HLA-B del CMH de clase I.

19. Composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 15-18 para su uso como medicamento, en la que el adyuvante se selecciona del grupo que consiste en adyuvantes a base de ADN bacteriano, adyuvantes a base de aceite/tensioactivo, adyuvantes a base de ARN bicatenario viral e imidazoquinilinas.

20. Kit de partes que comprende la composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 15-19 y un agente anticancerígeno adicional.

21. Kit de partes según la reivindicación 20, en el que el agente anticancerígeno es un anticuerpo.

22. Kit de partes según la reivindicación 20, en el que el agente anticancerígeno es una citocina.

23. Uso del péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1-14 en una composición para el diagnóstico ex vivo de la presencia en un paciente con cáncer de células T en PBL o en tejido tumoral que son reactivas con Bcl-XL.

24. Uso del péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1-14 o la composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 15-19 en la fabricación de un medicamento para su uso en el tratamiento o la prevención de una enfermedad de cáncer.

25. Uso según 24, en el que la enfermedad que va a tratarse es una enfermedad de cáncer en la que se expresa un miembro de la familia de proteínas Bcl-XL.

26. Uso según la reivindicación 25, en el que la enfermedad de cáncer se selecciona del grupo que consiste en un tumor maligno hematopoyético incluyendo leucemia linfática crónica y leucemia mieloide crónica, melanoma, cáncer de mama, cáncer de cérvix, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de páncreas y cáncer de próstata.

27. Uso según cualquiera de las reivindicacione.

2. 26, que se combina con un tratamiento contra el cáncer 35 adicional.

28. Uso según 27, en el que el tratamiento adicional se selecciona del grupo que consiste en quimioterapia, radioterapia, tratamiento con sustancias inmunoestimulantes, terapia génica, tratamiento con anticuerpos y tratamiento usando células dendríticas.

29. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1-14 o composición de vacuna según cualquiera de las

reivindicaciones 15-19, para su uso como medicamento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad de cáncer.

30. Péptido o composición de vacuna según la reivindicación 29 para su uso como medicamento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad de cáncer, seleccionándose la enfermedad de cáncer del grupo que consiste en un tumor maligno hematopoyético incluyendo leucemia linfática crónica y leucemia 45 mieloide crónica, melanoma, cáncer de mama, cáncer de cérvix, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de páncreas y cáncer de próstata.

31. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1-14, para su uso en un método para el diagnóstico in situ de la presencia en un paciente con cáncer de células T en PBL o en tejido tumoral que son reactivas con Bcl-XL.

32. Péptidos o composiciones de vacuna según la reivindicación 29 para su uso como medicamento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad de cáncer, combinándose en el tratamiento con un tratamiento contra el cáncer adicional.

33. Péptidos o composiciones de vacuna según la reivindicación 32 para su uso como medicamento para el tratamiento o la prevención de una enfermedad de cáncer, seleccionándose el tratamiento adicional del grupo que consiste en quimioterapia, radioterapia, tratamiento con sustancias inmunoestimulantes, terapia génica, tratamiento con anticuerpos y tratamiento usando células dendríticas.