Vacuna de péptido de survivina.

Una composición de vacuna que comprende,

i. uno o más péptidos de survivina restringidos para HLA-A2 seleccionados del grupo que consiste en LLLGEFLKL (SEQ ID NO.

4) y LMLGEFLKL (SEQ ID NO 5), y

ii. un coadyuvante formulado para una emulsión de agua en aceite que comprende un aceite mineral y un tensioactivo, en el que el coadyuvante comprende hasta un 14,5 % vol. de dicho tensioactivo para su uso como medicamento

Vacuna de péptido de survivina Campo de la invención La presente invención se refiere a una vacuna terapéutica que comprende uno o más fragmentos polipeptídicos de survivina. La vacuna se puede usar para el tratamiento profiláctico, de mejora y/o curativo de, por ejemplo 5 enfermedades de cáncer. La memoria descriptiva describe además procedimientos de combinación del tratamiento.

Antecedentes de la invención El sistema inmunitario de mamífero reconoce y reacciona a materiales exógenos o extraños. Una faceta importante del sistema es la respuesta a linfocitos T. Esta respuesta requiere que los linfocitos T reconozcan e interaccionen con los complejos de las moléculas de la superficie celular, denominadas antígenos leucocitarios humanos (HLA) que 10 constituyen el complejo principal de histocompatibilidad (MHC) humano, y péptidos. Los péptidos se derivan de moléculas más grandes, que se procesan por las células, que también presentan la molécula HLA/MHC. La interacción de los linfocitos T y los complejos de HLA/péptido es restringida, lo que requiere un linfocito T sea específico para una combinación particular de una molécula de HLA y un péptido. Si no está presente un linfocito T específico, no se produce una respuesta del linfocito T aún cuando su compañero de complejo esté presente. De forma similar, no se 15 produce una respuesta si el complejo específico está ausente, aunque el linfocito T esté presente.

Está bien establecido que los epítopos peptídicos derivados de antígenos asociados con tumores humanos (TAA) se pueden reconocer por los linfocitos T citotóxicos (CTL) en el contexto de moléculas MHC y que la mayoría, si no todos, los tumores expresan dichos antígenos. En consecuencia, se están llevando a cabo esfuerzos clínicos fascinantes para dirigir estos TAA en estrategias tales como la vacunación y el tratamiento con linfocitos T adoptivos con el fin de 20 generar respuestas de CTL antitumorales eficaces en pacientes.

Sin embargo, la inmunoselección de variantes con pérdida de antígeno puede ser un serio obstáculo para el potencial curativo de la mayoría de los epítopos de CTL conocidos en oncología clínica, y la selección de tumores mutantes deficientes en antígenos es una limitación bien reconocida en las estrategias terapéuticas cuando se dirigen antígenos que no tienen un papel en el crecimiento del cáncer. 25

El motivo es que los péptidos más caracterizados se derivan en polipéptidos, que no son esenciales para la supervivencia de la célula tumoral. Por tanto, si se inducen respuestas de CTL potentes frente a estos antígenos peptídicos por medidas terapéuticas tales como vacunaciones, es muy probable que las células tumorales que carecen de la expresión del antígeno dirigido eludan las respuestas inmunitarias elevadas.

Existe una necesidad de obtener vacunas terapéuticas más eficaces y procedimientos de tratamiento mejorados de 30 enfermedades de cáncer.

El mecanismo por el que los linfocitos T reconocen las anomalías celulares también ha estado implicado en el cáncer. En el documento W092/20356, se divulga una familia de genes que se procesan en péptidos que, a su vez, se expresan sobre superficies celulares, y pueden dar lugar a lisis de las células tumorales por CTL específicos. Estos genes se denominan familia MAGE y se dice que codifican "precursores de antígenos de rechazo de tumor" o 35 moléculas "TRAP", y los péptidos derivados de éstos se denominan "antígenos de rechazo de tumor" o "TRA".

Sin embargo, aunque en general se acepta que la mayoría, si no todos, los tumores son antigénicos, sólo unos pocos son, de hecho, antigénicos en el sentido de que la progresión tumoral se controla fácilmente por el sistema inmunitario.

Para superar esto, se han iniciado varios ensayos inmunoterápicos usando vacunaciones con péptidos derivados de TAA. Para el melanoma, el tumor para el que se ha caracterizado el mayor número de TAA definidos por CTL, se han 40 inducido respuestas de CTL potentes frente a antígenos por vacunación y algunos pacientes experimentaron una remisión completa de su enfermedad. Sin embargo, la mayoría de los epítopos peptídicos usados en estos ensayos de vacunación son específicos de melanocitos, y estos péptidos no se pueden aplicar para tumores de origen no melanocítico. Además, la expresión de estos TAA es heterogénea entre los tumores de diferentes pacientes e incluso puede variar entre las metástasis obtenidas a partir de un paciente. Sin embargo, durante los dos últimos años, se han 45 identificado varios antígenos peptídicos específicos de tumor, que se expresan en varios cánceres diferentes, es decir, HER-2, Muc-1 y telomerasa.

También se ha demostrado que mediante manipulación apropiada los antígenos presentes en tumores se pueden exponer al sistema inmunitario. Los estudios han demostrado que el grupo de CD8+ CTL se puede exponer al sistema inmunitario. Los estudios han demostrado que el grupo de CD8+ CTL de la respuesta inmunitaria, solo o en 50 combinación con linfocitos TH CD4+, constituye el grupo efector antitumoral primario de la respuesta inmunitaria adaptiva. Hasta ahora la atención se ha centrado principalmente en el grupo de CTL de la respuesta inmunitaria. Sin embargo, está siendo más evidente que la respuesta de linfocitos T CD4 desempeña un papel esencial en el rechazo tumoral, en especial en la fase de inducción o en la prolongación de una respuesta de CTL in vivo. En consecuencia, la incorporación de antígenos tumorales restringidos para clase 1 en protocolos de vacunación de tumor eficaces puede incrementar la eficacia de las vacunas.

La apoptosis es un programa genético de suicidio celular, y se ha sugerido que la inhibición de la apoptosis es un importante mecanismo implicado en la formación de cáncer prolongando la duración de las células que favorecen la acumulación de las mutaciones en transformación. La survivina es un miembro identificado recientemente de la familia 5 de inhibidores de las proteínas apoptóticas (lAP) . En un análisis de expresión génica global de aproximadamente 4 millones de transcritos, se identificó la survivina como uno de los genes principales que regulan por incremento de forma invariable en muchos tipos de cáncer pero no en tejido normal. Las neoplasias malignas sólidas que sobreexpresan la survivina incluyen cáncer de pulmón, colon, mama, páncreas y próstata, así como neoplasias malignas hematopoyéticas. Adicionalmente, se ha informado de una serie de cánceres cutáneos con melanoma y sin 10 melanoma son positivos en survivina de forma invariable. La sobreexpresión de survivina en la mayoría de los cánceres humanos sugiere un papel general de inhibición de la apoptosis en la progresión tumoral, un concepto corroborado por la observación de que en el caso de cáncer colorrectal y de vejiga, así como neuroblastoma, la expresión de survivina estaba asociada con un pronóstico desfavorable. La survivina, como otros inhibidores de la apoptosis, se expresa en las células endoteliales durante la angiogénesis tumoral, y la dirección antisentido de la 15 survivina durante la angiogénesis provoca la apoptosis de las células endoteliales, lo que promueve un rápido colapso de los vasos de tipo capilar in vitro. Por el contrario, la survivina es indetectable en tejidos adultos normales. Puesto que la survivina se sobreexpresa en la mayoría de los cánceres humanos y la inhibición de su función da como resultado un incremento en la apoptosis, esta proteína podría ser una diana para las respuestas de CTL terapéuticas. La proteína survivina y el uso diagnóstico y terapéutico potencial de la misma se divulgan en el documento US 20 6.245.523. La survivina es una proteína citoplásmica de 16, 5 kDa que contiene una única BIR y una región de hélice carboxiterminal altamente cargada en lugar de un dedo de RING, que inhibe la apoptosis inducida por la retirada del factor de crecimiento (IL-3) cuando se transfiere en precursores de linfocitos B. El gen que codifica la survivina es casi idéntico a la secuencia del receptor de proteasa de células efectoras 1 (EPR-1) , pero orientado en sentido opuesto, sugiriendo así la existencia de dos genes separados duplicados en una configuración de cabeza a cabeza. En 25 consecuencia, la survivina se puede describir como un producto de EPR-1 antisentido. Debido a la orientación opuesta de los dos genes, las secuencias de aminoácidos de las proteínas codificadas son diferentes.

De manera funcional, la inhibición de la expresión de survivina por regulación por incremento de su transcrito de EPR-1 antisentido natural da como resultado la apoptosis masiva y la disminución del crecimiento celular.

El documento US 6.245.523 divulga... [Seguir leyendo]

1. Una composición de vacuna que comprende, i. uno o más péptidos de survivina restringidos para HLA-A2 seleccionados del grupo que consiste en LLLGEFLKL (SEQ ID NO. 4) y LMLGEFLKL (SEQ ID NO 5) , y ii. un coadyuvante formulado para una emulsión de agua en aceite que comprende un aceite mineral y un 5 tensioactivo, en el que el coadyuvante comprende hasta un 14, 5 % vol. de dicho tensioactivo para su uso como medicamento.

2. La composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el tensioactivo es oleato de manida.

3. La composición de vacuna de acuerdo con la reivindicación 1-2, en la que una variante peptídica de survivina consiste en: LMLGEFLKL (SEQ ID NO: 5) . 10

4. La composición de vacuna de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende además uno o más péptidos o variantes peptídicas seleccionadas de los grupos de péptidos ML-IAP, BCL-2, BCL-X, MCL-1 o TRAG-3 o variantes peptídicas de los mismos que se pueden unir a una molécula HLA de clase I.

5. La composición de vacuna de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, que comprende además uno o más péptidos o variantes peptídicas seleccionados de los grupos de péptidos ML-IAP, BCL-X, MCL-1 o TRAG-3 15 o variantes peptídicas de los mismos que se pueden unir a una molécula HLA de clase I.

6. La composición de vacuna de acuerdo con las reivindicaciones 1-5, que comprende un ingrediente activo secundario, seleccionado del grupo que consiste en:

i. un medicamento antineoplásico ii. un agente quimioterápico y 20

iii. un inhibidor de la angiogénesis.

7. Uso de una composición de vacuna como se caracteriza por cualquiera de las reivindicaciones 1-6, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cáncer.

8. La composición de vacuna como se caracteriza por cualquiera de las reivindicaciones 1-6 para su uso en un procedimiento para el tratamiento de cáncer. 25

9. Uso de una composición de vacuna de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6, para la fabricación de un medicamento para la inhibición de la angiogénesis.

10. La composición de vacuna como se caracteriza por cualquiera de las reivindicaciones 1-6, para su uso en un procedimiento para la inhibición de la angiogénesis.

11. Un kit en partes que comprende; 30

iv. una composición de vacuna de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6 y v. un medicamento secundario, en el que dicho medicamento secundario es un agente quimioterápico o un inhibidor de la angiogénesis.