Molécula biespecífica que se une a TLR9 y CD32 y que comprende un epítopo de célula T.

Una preparación farmacéutica que comprende una molécula o complejo molecular capaz de unirse a TLR9 y a CD32,

que comprende al menos un epítopo de al menos un antígeno, en la que la parte de unión a CD32 de la molécula o complejo molecular se selecciona del grupo que consiste en anticuerpos, fragmentos de anticuerpo, dominios de proteínas y péptidos, y la parte de unión a TLR9 es un ácido nucleico.

Molécula biespecífica que se une a TLR9 y CD32 y que comprende un epítopo de célula T

La presente invención se refiere a moléculas con especificidad de unión tanto a Receptor 9 semejante a Toll (TLR9) como a CD32 que contienen uno o más epítopos de antígeno de célula T.

La invención se refiere además a la producción de estas moléculas y a su uso para la preparación de medicamentos para el tratamiento de las alergias.

Introducción:

Se considera que la alergia es una reacción hipersensible a proteínas en el medioambiente (aire/agua/alimentos) . Los alergenos son antígenos frente a los que responden los pacientes atópicos con respuestas de anticuerpo IgE que posteriormente dan lugar a reacciones alérgicas. Los antígenos en los complejos o proteínas de fusión pueden ser alergenos medioambientales (por ejemplo, ácaro del polvo doméstico, polen de abedul, polen de hierba, antígenos de gato, antígenos de cucaracha) o alergenos alimentarios (por ejemplo, leche de vaca, cacahuete, gamba, soja) o una combinación de ambos. Las moléculas IgE son importantes debido a su papel en la activación de las células efectoras (mastocito, basófilos y eosinófilos) . Más recientemente, se ha admitido que IgE también juega un papel importante en la fase de inducción de las enfermedades alérgicas, mediante la regulación al alza del potencial de captura de antígeno de las células B y las células dendríticas (DC) , ambos a través de receptores de baja afinidad (CD23) y de alta afinidad (FcRI) [1]. Las funciones negativas de los anticuerpos IgE pueden contrarrestarse mediante anticuerpos IgG específicos de alergeno, por ejemplo, porque dirigen la respuesta inmune fuera de las células B a monocitos y DC [2]. Además, compiten con las moléculas IgE para los sitios de unión del alergeno. Por lo tanto, las alergias pueden tratarse, curarse y prevenirse mediante la inducción de moléculas IgG específicas de alergeno.

Las moléculas IgG tienen una vida media en suero de aproximadamente 3 semanas comparado con los 3 días aproximados para las moléculas IgE. Las moléculas IgE se inducen por la interacción entre células B (sin activar) y células Th2 que proporcionan la expresión de IL-4 e IL-13 junto con CD40L necesaria para inducir una cambio de clase a IgE en las células B de memoria y células plasmáticas [3]. Por el contrario, las células Th1, que producen IFN- e IL-2, inducen un cambio de clase hacia IgG. Por lo tanto, la inducción de las respuestas de células T auxiliares Th1, en lugar de Th2 frente a alergenos, es beneficiosa para la prevención, tratamiento y cura de las enfermedades alérgicas.

Hasta la fecha, se usan varias formas de vacunación activa usando alergenos. La más común es la denominada "inmunoterapia", que depende de inmunizaciones frecuentes con concentraciones relativamente altas de alergenos. Esta técnica sólo es moderadamente eficaz en una minoría de enfermedades alérgicas tales como alergia al veneno de las abejas y en algunos casos de rinitis y conjuntivitis, y recientemente algunas publicaciones han mostrado eficacia en asma y dermatitis atópica. Más recientemente, se ha propuesto la inmunoterapia rápida ("rush") , en la que cantidades crecientes de alergeno se inyectan en un marco de tiempo bastante corto, con resultados ligeramente mejores [4; 5]. Habitualmente, se usa la ruta subcutánea para la administración de alergenos, pero recientemente esta ruta se ha comparado con la aplicación oral o incluso la aplicación local, los resultados son generalmente positivos pero no siempre consistentes. Una técnica diferente para inmunoterapia es la descrita por Saint-Remy (EP 0 178 085 y 0 287 361) , que usa anticuerpos IgG autólogos que forman complejos in vitro con los alergenos relevantes. Esta técnica permite aplicar cantidades mucho menores de alergeno con menos efectos secundarios.

El mecanismo que está detrás de estas terapias no está claro. En la terapia clásica parece haber un efecto beneficioso si la terapia induce un incremento en anticuerpos IgG específicos, aunque no todos los incrementos significativos de IgG específicas se correlacionan con una inmunoterapia exitosa. Un argumento posible para que éste sea el caso es la afinidad relativamente baja de anticuerpos IgG para CD32 en células B, monocitos y mastocitos. La estrategia Saint-Remy selecciona los anticuerpos IgG específicos del paciente, que se mezclan posteriormente con alergenos relevantes in vitro. De esta manera se aseguran de que el alergeno no pueda reaccionar libremente con células u otros isotipos de anticuerpo en las células tales como IgE en mastocitos. Además, reivindican que se generan anticuerpos anti-idiotípicos frente a moléculas IgG específicas, que en el futuro prevendrán la alergia.

En WO 97/07218 se describen proteínas de fusión alergeno-anti-CD32. En esta publicación, los problemas con el aislamiento de moléculas IgG específicas y la baja afinidad de estos anticuerpos IgG para CD32 se evitan y los factores de riesgo de la inmunoterapia clásica, que usa alergenos completos de "unión a IgE", se reducen. Sin embargo, la inducción reivindicada de respuestas de memoria Th1 debidas al direccionamiento único de la vacuna que contiene anti-CD32 a las células dendríticas no puede sostenerse.

Means Terr y et al. (The Journal of Clinican Investigation 2005, vol 115 (2) : 407-417) describen que complejos inmunes que contienen ADN con suero de lupus estimulan DC plasmacitoides para producir citoquinas mediante una interacción cooperativa entre el receptor 9 semejante a Toll y FcgammaRIIa (CD32) .

Incluso a la vista de la investigación intensiva para estrategias terapéuticas para tratar enfermedades alérgicas, todavía existe una gran demanda para proporcionar medicamentos para el tratamiento exitoso de las alergias.

El objeto de la invención es por lo tanto proporcionar moléculas nuevas con propiedades mejoradas para el tratamiento de enfermedades alérgicas.

Según la invención, este objeto se consigue por el subject matter de las reivindicaciones.

Descripción breve de la invención:

Antecedentes:

CD32 se expresa fuertemente en monocitos/células dendríticas y células B y así la molécula de la presente invención se diseña para dirigir la respuesta inmune a estas importantes células inmunológicas, con la intención de prevenir la presentación del alergeno por las células B, a la vez que se estimula la presentación del alergeno por células dendríticas (DC) especialmente, dando lugar lo último a la inducción de respuestas Th1 frente a los alergenos en la molécula o complejo molecular que puede formularse como vacuna. El conocimiento más reciente muestra que existen dos tipos de células dendríticas (DC) : células dendríticas mieloides (mDC) y plasmacitoides (pDC) [6], lo que ha dado lugar al nuevo concepto de células Dc1 y DC2 [7]. En este concepto, las células DC1 estimulan la inducción del desarrollo de las células Th1 después de la estimulación específica de antígeno y las células DC2 apoyan el desarrollo de las células Th2. Se considera generalmente que las DC derivadas de monocitos (o mDC) son del tipo DC1, mientras se considera que las pDC son del tipo DC2 [6]. Ambos tipos de DC expresan CD32a e inducirán una respuesta de célula T específica de alergeno; sin embargo, no se garantiza que el resultado será del tipo Th1. De hecho, en donantes alérgicos las respuestas Th2 son más probables [8]. De forma importante, las pDC expresan el receptor TLR9, que se une a CpG-ODN (oligodesoxinucleótidos [ODN] que contienen restos CpG no metilados) . La activación de este receptor en pDC da lugar a una producción muy fuerte de IFN-α e IL-12 [9], lo que estimula la inducción de Th1 y transforma así las DC2 potenciales en células DC1.

Por lo tanto, la molécula de la invención puede combinar la activación del receptor TLR9 en pDC con la estimulación e inducción específicas de células Th1 específicas de alergeno y comprende, por lo tanto, una mejora significativa de los conceptos anteriores.

La invención comprende una preparación farmacéutica que comprende una molécula o un complejo molecular que tiene especificidad de unión para el receptor 9 semejante a Toll y CD32, en la que la molécula o complejo molecular incluye al menos un epítopo, preferiblemente al menos un epítopo de célula T, de al menos un antígeno y en la que la parte de unión a CD32 se selecciona del grupo que consiste en anticuerpos, fragmentos de anticuerpo, dominios proteicos y péptidos y la parte de unión a TLR9 es un ácido nucleico.

La molécula o complejo molecular de la invención también evitará la función efectora de los mastocitos, que portan IgE,... [Seguir leyendo]

1. Una preparación farmacéutica que comprende una molécula o complejo molecular capaz de unirse a TLR9 y a CD32, que comprende al menos un epítopo de al menos un antígeno, en la que la parte de unión a CD32 de la molécula o complejo molecular se selecciona del grupo que consiste en anticuerpos, fragmentos de anticuerpo, dominios de proteínas y péptidos, y la parte de unión a TLR9 es un ácido nucleico.

2. La preparación farmacéutica según la reivindicación 1, caracterizada por que el epítopo es un epítopo de célula T.

3. La preparación farmacéutica según la reivindicación 1 ó 2, caracterizada por que el epítopo se obtiene o produce a partir de al menos una cadena de ADN que contiene un epítopo de célula T de un antígeno o un péptido sintético.

4. La preparación farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada por que el epítopo se

selecciona del grupo que consiste en alergenos, específicamente alergenos en dermatitis atópica, asma alérgico, rinitis alérgica o conjuntivitis alérgica.

5. La preparación farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada por que el epítopo se aísla de antígenos completos, antígenos desnaturalizados o antígenos modificados para prevenir la unión a IgE.

6. La preparación farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada por que comprende al 15 menos un anticuerpo o derivado o fragmento de éste.

7. La preparación farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada por que la parte de unión a CD32 es al menos parte de un anticuerpo anti-CD32 o derivado o fragmento de éste.

8. La composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para uso en inmunoterapia activa.

9. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 8, para el tratamiento o profilaxis de las alergias.

10. Proceso para producir una molécula o complejo molecular según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, usando técnica recombinante, en el que los genes que codifican las estructuras de unión para TLR9, CD32 y el epítopo se construyen en un vector y se expresan en una célula huésped.

11. Proceso para producir una molécula o complejo molecular según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, usando entrecruzamiento químico.