Anticuerpos neutralizantes con especificidad para IL-17 humana.

Un anticuerpo neutralizante que tiene especificidad para IL-17 humana,

con una cadena pesada que comprende la secuencia gH11 (SEC ID Nº: 11) y una cadena ligera que comprende la secuencia gL3 (SEC ID Nº: 13).

Anticuerpos neutralizantes con especificidad para IL-17 humana.

La presente invención se refiere a una molécula de anticuerpo que tiene especificidad para determinantes antigénicos de IL-17. La presente invención también se refiere a los usos terapéuticos de la molécula de anticuerpo y métodos para producir la molécula de anticuerpo.

La interleucina 17 (IL-17) , también conocida como CTLA-8 o IL-17A, es una citocina proinflamatoria que estimula la secreción de una amplia variedad de otras citocinas a partir de diversas células no inmunitarias. IL-17 puede inducir la secreción de IL-6, IL-8, PGE2, MCP-1 y G-CSF por células adherentes como fibroblastos, queratinocitos, células epiteliales y endoteliales y también puede inducir expresión superficial de ICAM-1, proliferación de células T y crecimiento y diferenciación de progenitores humanos CD34+ en neutrófilos cuando se cultivan de manera conjunta en presencia de fibroblastos irradiados (Fossiez et al., 1.998, Int. Rev. Immunol. 16, 541-551) . IL-17 se produce de manera predominante por células T de memoria activadas y actúa por unión a un receptor de superficie de células distribuidas de manera ubicua (IL-17R) (Yao et. al, 1.997, Cytokine, 9, 794-800) . Se ha identificado una serie de homólogos de IL-17 que tienen funciones tanto similares como distintas en la regulación de respuestas inflamatorias. Para una revisión de las familias de citocina IL-17/receptor véase Dumont, 2.003, Expert Opin. Ther. Patents, 13, 287-303.

IL-17 puede contribuir a una serie de enfermedades mediadas por respuestas inmunitarias anormales, tales como artritis reumatoide e inflamaciones de las vías respiratorias, así como rechazo de trasplante de órganos e inmunidad antitumoral. Los inhibidores de actividad de IL-17 son conocidos en la técnica, por ejemplo una IL-17R de murina: proteína de fusión Fc humana, se ha usado una IL-17R soluble de murina y un anticuerpo monoclonal anti-IL-17 para demostrar la función de IL-17 en diversos modelos de artritis reumatoide (Lubberts et. Al., J. Immunol. 2.001, 167, 1.004-1.013; Chabaud et al., Arthritis Res. 2.001, 3, 168-177) . Kotake et al desvelan IL-17 en fluidos sinoviales de pacientes con artritis reumatoide es un estimulador potencial de osteoclastogénesis (Journal of Clinical Investigations, American Society for Clinical Investigations vol. 103, nº 9, 1 de mayo de 1.999) . Además, se han usado anticuerpos policlonales neutralizantes para reducir la formación de adhesión peritoneal (Chung et al., 2.002,

J. Exp. Med., 195, 1.471-1.478) . Los sistemas R&D proporcionan uso para investigación de un anticuerpo monoclonal de IL-17 anti-humano de murina neutralizante (clon 41809 y número de catálogo#MAB317) . Hasta la fecha no se han desarrollado anticuerpos de IL-17 anti-humanos para uso en tratamiento y por lo tanto hay necesidad de un anticuerpo de anti-IL-17, de alta afinidad, adecuado para tratar pacientes.

Ahora se ha identificado un anticuerpo de anti-IL-17 neutralizante de alta afinidad que es eficaz en particular in vivo, por ejemplo en los modelos de inflamación in vivo descritos en la presente memoria.

Así se proporciona un anticuerpo neutralizante que tiene especificidad para IL-17 humana, con una cadena pesada que comprende la secuencia gH11 (SEC ID Nº: 11) y una cadena ligera que comprende la secuencia gL3 (SEC ID Nº: 13) .

En otra realización se proporciona un anticuerpo neutralizante que tiene especificidad para IL-17 humana, con una cadena pesada que comprende la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 2 y una cadena ligera que comprende la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 4.

En una realización más, se proporciona un anticuerpo neutralizante que tiene especificidad para IL-17 humana, con una cadena pesada que comprende la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 16 y una cadena ligera que comprende la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 18.

Los restos en dominios variables de anticuerpos se numeran de manera convencional según un sistema ideado por Kabat et al. Este sistema se explica en Kabat et al., 1.987, in Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Department of Health and Human Services, NIH, USA (a partir de ahora "Kabat et al. (supra) ") . Este sistema de numeración se usa en la presente memoria descriptiva excepto en el caso de que se indique de otro modo.

Las denominaciones de los restos Kabat no siempre se corresponden directamente con la numeración lineal de los restos aminoácido. La secuencia de aminoácidos lineal real puede contener menos aminoácidos o adicionales que en la numeración Kabat estricta que corresponde a un acortamiento de, o inserción a, un componente estructural, entramado o región determinante de complementariedad (CDR, por sus siglas en inglés) , de la estructura básica del dominio variable. La correcta numeración Kabat de restos se puede determinar para un anticuerpo determinado por alineación de restos de homología en la secuencia del anticuerpo con una secuencia numerada Kabat "clásica".

Las CDR del domino variable de cadena pesada se sitúan en los restos 31-35 (CDR-H1) , los restos 50-65 (CDR-H2) y los restos 95-102 (CDR-H3) según el sistema de numeración Kabat. Sin embargo, según Chothia (Chothia, C. y Lesk, A. M. J. Mol. Biol., 196, 901-917 (1.987) ) , el bucle equivalente a CDR-H1 se extiende del resto 26 al resto 32. Así 'CDR-H1', como se usa en la presente memoria, comprende los restos 26 a 35, como se describe por una combinación del sistema de numeración Kabat y la definición de bucle topológica de Chothia.

Las CDR del dominio variable de cadena ligera se sitúan en los restos 24-34 (CDR-L1) , los restos 50-56 (CDR-L2) y los restos 89-97 (CDR-L3) según el sistema de numeración Kabat.

Como se usa en la presente memoria, el término ‘anticuerpo neutralizante' describe un anticuerpo que puede neutralizar la actividad de señalización biológica de IL-17, por ejemplo por unión de bloqueo de IL-17 a la IL-17R.

En un primer aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo neutralizante que tiene especificidad para IL

17 humana, que comprende una cadena pesada, en la que el dominio variable de la cadena pesada comprende al menos una de una CDR con la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 5 para CDR-H1, una CDR con la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 6 para CDR-H2 y una CDR con la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 7 para CDR-H3.

Preferiblemente, un anticuerpo del primer aspecto de la presente invención comprende una cadena pesada en la que se seleccionan al menos dos de CDR-H1, CDR-H2 y CDR-H3 del dominio variable de la cadena pesada de lo siguiente: la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 5 para CDR-H1, la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 6 para CDR-H2 y la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 7 para CDR-H3. Por ejemplo, el anticuerpo puede comprender una cadena pesada en la que CDR-H1 tiene la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 5 y CDR-H2 tiene la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 6. Alternativamente, el anticuerpo puede comprender una cadena pesada en la que CDR-H1 tiene la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 5 y CDR-H3 tiene la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 7 o el anticuerpo puede comprender una cadena pesada en la que CDR-H2 tiene la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 6 y CDR-H3 tiene la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 7. Para evitar la duda, se entiende que se incluyen todas las modificaciones.

Más preferiblemente, el anticuerpo del primer aspecto de la presente invención comprende una cadena pesada, en la que el dominio variable comprende la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 5 para CDR-H1, la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 6 para CDR-H2 y la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 7 para CDR-H3.

En una realización, el anticuerpo del primer aspecto de la presente invención comprende una cadena pesada, en la que el dominio variable de la cadena pesada comprende la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 2.

"Identidad", como se usa en la presente memoria, indica que en cualquier posición particular en las secuencias alineadas, el resto aminoácido es idéntico entre las secuencias. "Similitud", como se usa en la presente memoria, indica que, en cualquier posición particular en las secuencias alineadas, el resto aminoácido es de un tipo similar entre las secuencias. Por ejemplo, la leucina puede sustituir isoleucina o valina. Otros aminoácidos que con frecuencia se pueden sustituir mutuamente incluyen pero no se limitan a:

- fenilalanina, tirosina y triptófano (aminoácidos con cadenas laterales aromáticas) ;

-lisina, arginina e histidina (aminoácidos que tienen cadenas laterales... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo neutralizante que tiene especificidad para IL-17 humana, con una cadena pesada que comprende la secuencia gH11 (SEC ID Nº: 11) y una cadena ligera que comprende la secuencia gL3 (SEC ID Nº: 13) .

2. Un anticuerpo neutralizante que tiene especificidad para IL-17 humana, con una cadena pesada que comprende la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 2 y una cadena ligera que comprende la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 4.

3. Un anticuerpo neutralizante que tiene especificidad para IL-17 humana, con una cadena pesada que comprende la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 16 y una cadena ligera que comprende la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 18.

4. Un anticuerpo neutralizante según una cualquiera de las reivindicaciones 1 -3 a que se une una o más moléculas efectoras o informadoras.

5. Un anticuerpo neutralizante que tiene especificidad para IL-17 humana, con una cadena pesada que comprende la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 16 y una cadena ligera que comprende la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº: 18 y a que se unen dos moléculas efectoras.

6. Un anticuerpo neutralizante según la reivindicación 5, en el que una molécula efectora se une a la cisteína intercadena de CL y una molécula efectora se une a la cisteína intercadena de CH1.

7. El anticuerpo según la reivindicación 6, donde la cisteína intercadena de CL está en la posición 214 de la cadena ligera (por numeración Kabat) y la cisteína intercadena de CH1 está en la posición 233 de la cadena pesada (por numeración Kabat) .

8. El anticuerpo según la reivindicación 6 o la reivindicación 7, donde la cisteína intercadena de CL está en la posición 218 de la cadena ligera (por numeración secuencial) y la cisteína intercadena de CH1 está en la posición 222 de la cadena pesada (por numeración secuencial) .

9. Un anticuerpo neutralizante según una cualquiera de las reivindicaciones 4-8, en el que la molécula efectora comprende uno o más polímeros.

10. Un anticuerpo neutralizante según la reivindicación 9, en el que uno o más polímeros es/son un metoxipoli (etilenglicol) o poli (etilenglicol) .

11. Un anticuerpo neutralizante según la reivindicación 10, que tiene la estructura:

donde n está entre 400 y 520.

12. Una secuencia de ADN aislada que codifica la cadena o las cadenas pesadas y/o ligeras de un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11.

13. Un vector de clonación o expresión que comprende una o más secuencias de ADN según la reivindicación 12.

14. Un vector según la reivindicación 13, en el que el vector comprende la secuencia proporcionada en la SEC ID Nº:

19.

15. Una célula huésped que comprende uno o más vectores de clonación o expresión según la reivindicación 13 o la

reivindicación 14.

16. Un procedimiento para la producción del anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, que comprende cultivar la célula huésped según la reivindicación 15 y aislar el anticuerpo.

17. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 11, junto con uno o más de un excipiente, diluyente o portador farmacéuticamente aceptable.

18. Una composición farmacéutica según la reivindicación 17, que comprende adicionalmente otros ingredientes activos.

19. Un anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 o una composición farmacéutica según la reivindicación 17 o la reivindicación 18, para uso en el tratamiento o la profilaxis de un trastorno patológico 10 seleccionado del grupo que consiste en infecciones (víricas, bacterianas, fúngicas y parasitarias) , choque endotóxico asociado a infección, artritis, artritis reumatoide, asma, enfermedad inflamatoria pélvica, Enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Crohn, Enfermedad de Peyronie, enfermedad celíaca, colecistopatía, Enfermedad pilonidal, peritonitis, soriasis, vasculitis, adhesiones quirúrgicas, apoplejía, Diabetes Tipo I, artritis de lyme, meningoencefalitis, trastornos inflamatorios mediados inmunitarios del sistema nervioso central y periférico, otros trastornos

autoinmunitarios, pancreatitis, trauma (cirugía) , enfermedad del injerto contra el hospedador, rechazo de trasplantes, cáncer, enfermedad cardíaca, coagulación intravascular, resorción ósea, osteoporosis, periodontitis, hipoclorhidia y dolor.