Anticuerpos anti-CXCR4 humanizados para el tratamiento del cáncer.

Anticuerpo humanizado que puede unirse específicamente a CXCR4,

o un fragmento funcional del mismo, seleccionándose dicho fragmento funcional de entre los fragmentos Fv, Fab, (Fab')2, Fab', scFv, scFv-Fc y diacuerpos, caracterizado porque dicho anticuerpo humanizado, o compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, comprende cadenas pesadas y ligeras, presentando dicha cadena pesada las CDR que consisten en CDRH1, CDR-H2 y CDR-H3 y presentando dicha cadena ligera las CDR que consisten en CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3, en el que dichas CDR-H1, CDR-H2 y CDR-H3 comprenden respectivamente las secuencias SEC ID nº 4, 5 y 6 y dichas CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3 comprenden respectivamente las secuencias SEC ID nº 7, 8 y 9.

Anticuerpos anti-CXCR4 humanizados para el tratamiento del cïncer.

La presente invenciïn se refiere a un anticuerpo, en particular, un anticuerpo monoclonal humanizado, capaz de unirse especïficamente a los receptores de quimiocinas (CXCR) , asï como la secuencias de aminoïcidos y de ïcidos nucleicos que codifican un anticuerpo tal. Desde un aspecto, la invenciïn se refiere a un anticuerpo, compuestos derivados o fragmentos funcionales, que pueden unirse especïficamente al CXCR4 y que presentan fuertes actividades antitumorales. La invenciïn tambiïn comprende la utilizaciïn de dicho anticuerpo como un fïrmaco para el tratamiento preventivo y/o terapïutico del cïncer, asï como en los procedimientos o los kits relacionados con el diagnïstico del cïncer. Finalmente, la invenciïn comprende composiciones que comprenden dicho anticuerpo en combinaciïn o conjugaciïn con otro compuesto (s) contra el cïncer, tales como anticuerpos, toxinas, citotïxico/citostïtico, y su utilizaciïn para la prevenciïn y/o el tratamiento de determinados tipos de cïncer.

Las quimiocinas son pequeïos pïptidos segregados, que controlan la migraciïn de los leucocitos a lo largo de un gradiente quïmico de ligando, conocido como gradiente de quimiocinas, especialmente durante las reacciones inmunitarias (Zlotnick A. et al., 2000) . Se dividen en dos subfamilias principales, CC y CXC, en base a la posiciïn de sus restos de cisteïna del terminal NH2, y se unen a receptores acoplados a la proteïna G, cuyos dos principales subfamilias se denominan CCR y CXCR. Mïs de 50 quimiocinas humanas y 18 receptores de quimiocinas se han descubierto hasta el momento.

Muchos cïnceres tienen una red de quimiocinas compleja que influye en la infiltraciïn de inmunocitos del tumor, asï como en el crecimiento, la supervivencia, la migraciïn y la angiogenia de las cïlulas tumorales. Los inmunocitos, las cïlulas endoteliales y las propias cïlulas tumorales expresan receptores de quimiocinas y pueden responder a gradientes de quimiocinas. Los estudios de muestras de biopsias de cïncer humano y modelos de cïncer de ratïn demuestran que la expresiïn de receptor de quimiocina de las cïlulas cancerosas estï asociada al aumento de la capacidad metastïsica. Las cïlulas malignas de diferentes tipos de cïncer tienen diferentes perfiles de expresiïn de receptor de quimiocinas, pero el receptor 4 de quimiocinas (CXCR4) es el que se encuentra mïs frecuentemente. Cïlulas de por lo menos 23 tipos diferentes de cïnceres humanos de origen epitelial, mesenquimïtico y hematopoyïtico expresan el receptor CXCR4 (Balkwill F. et al., 2004) .

El receptor 4 de quimiocinas (tambiïn conocido como fusina, CD184, LESTR o HUMSTR) existe como dos isoformas que comprenden 352 o 360 aminoïcidos. El resto ASN11 estï glucosilado, el resto Tyr21 se modifica por adiciïn de un grupo sulfato y Cys 109 y 186 se unen con un puente disulfuro en la parte extracelular del receptor (Juarez J. et al., 2004) .

Este receptor es expresado por diferentes tipos de tejidos normales, naturales, linfocitos T sin memoria, linfocitos T reguladores, linfocitos B, neutrïfilos, cïlulas endoteliales, monocitos primarios, dendrocitos, linfocitos citolïticos naturales, cïlulas madre hematopoyïticas CD34+ y a un bajo nivel en el corazïn, colon, hïgado, riïones y cerebro. CXCR4 desempeïa una funciïn clave en el trïfico de leucocitos, linfopoyesis y mielopoyesis de linfocitos B.

El receptor CXCR4 se sobreexpresa en un gran nïmero de cïnceres como por ejemplo, pero sin limitarse al de colon (Ottaiano A. et al., 2004) , de mama (Kato M. et al., 2003) , de prïstata (Sun Y.X. et al., 2003 ) , pulmonar [carcinoma microcïtico y no microcïtico (Phillips R.J. et al., 2003) ], de ovario (Scotton C.J. et al., 2002) , de pïncreas (Koshiba T. et al., 2000) , de riïones, de cerebro (Barbero S. et al., 2002) , glioblastoma y linfomas.

El ligando ïnico del receptor CXCR4 descrito hasta el momento es el Factor-1 derivado de cïlulas del estroma (SDF-1) o CXCL2. SDF-1 se segrega en gran cantidad en los ganglios linfïticos, la mïdula ïsea, el hïgado, los pulmones y en menor medida por los riïones, el cerebro y la piel. CXCR4 tambiïn es reconocido por una quimiocina antagïnica, la proteïna II inflamatoria de macrïfagos vïricos (vMIP-II) codificada por el herpesvirus humano tipo III.

El eje CXCR4/SDF-1 desempeïa una funciïn clave en el cïncer y estï directamente implicado en la migraciïn, invasiïn que lleva a la metïstasis. De hecho, las cïlulas cancerosas expresan EL receptor CXCR4, migran y entran en la circulaciïn general. A continuaciïn las cïlulas cancerosas se detienen en los lechos vasculares en ïrganos que producen altas concentraciones de SDF-1 donde proliferan, inducen la angiogenia y forman tumores metastïsicos (Murphy P.M., 2001) . Este eje tambiïn estï implicado en la proliferaciïn celular mediante la activaciïn de la cinasa regulada por seïal extracelular (ERK) (Barbero S. et al., 2003) y la angiogenia (Romagnani P., 2004) . De hecho, receptor CXCR4 y su ligando SDF-1 activan claramente la angiogenia estimulando la expresiïn de VEGF-A que a su vez aumenta la expresiïn de CXCR4/SDF-1 (Bachelder R.E. et al., 2002) . Tambiïn se sabe que los macrïfagos asociados a tumores (MAT) acumulados en ïreas hipïxicas de los tumores y se estimulan para cooperar con las cïlulas tumorales y estimular la angiogenia. Se observï que la hipoxia aumentï selectivamente la expresiïn de CXCR4 en diversos tipos de cïlulas, como por ejemplo los MAT (Mantovani A. et al., 2004) . Se ha demostrado recientemente que el eje CXCR4/SDF-1 regula el trïfico/seguimiento de cïlulas madre/progenitoras hematopoyïticas CXCR4+ (HSC) y podrïa desempeïar una funciïn en la neovascularizaciïn. Las pruebas indican que ademïs de HSC, CXCR4 funcional tambiïn se expresa en las cïlulas madre a partir procedente de otros tejidos (cïlulas madre comprometidas con el tejido = TCSC) de modo que SDF-1 puede desempeïar una funciïn fundamental como factor quimiotïctico en CXCR4+ TCSC necesaria para la regeneraciïn de ïrganos/tejidos, pero estas TCSC puede tambiïn ser un origen celular del desarrollo del cïncer (teorïa de las cïlulas madre del cïncer) . Un origen de cïlulas madre de cïncer se demostrï para la leucemia humana y recientemente para varios tumores sïlidos tales como los de cerebro y de mama. Hay varios ejemplos de tumores CXCR4+ que pueden proceder de las cïlulas madre especïficas para tejidos/ïrganos CXCR4+ normales, tales como leucemias, tumores cerebrales, cïncer pulmonar microcïtico, cïncer de mama, hepatoblastoma, cïnceres de ovario y de cuello uterino (Kucia M. et al., 2005) .

La selecciïn del objetivo de las metïstasis de cïncer al interferir con el receptor CXCR4 se demostrï in vivo utilizando un anticuerpo monoclonal dirigido contra el receptor CXCR4 (Muller A. et al., 2001) . En resumen, se demostrï que un anticuerpo monoclonal dirigido contra el receptor CXCR4 (Mab 173 R&D Systems) disminuyï significativamente el nïmero de metïstasis en los ganglios linfïticos en un modelo de cïncer de mama ortotïpico (MDA-MB231) en ratones SCID. Se ha da a conocer tambiïn que ambas funciones de SDF-1 en las cïlulas HT-29, la proliferaciïn y la migraciïn de las cïlulas HT-29, pudo inhibirse por un anticuerpo monoclonal anti CXCR4 (Ding

Y.L. et al., Chinese Journal of Surger y , 2009) . Otro estudio (Phillips R.J. et al., 2003) tambiïn mostrï la funciïn crïtica del eje SDF-1/CXCR4 en las metïstasis en un modelo de carcinoma de pulmïn ortotïpico (A549) utilizando anticuerpos policlonales contra SDF-1, pero en este estudio no hubo ningïn efecto sobre el crecimiento tumoral ni sobre la angiogenia. Varios otros estudios describen tambiïn la inhibiciïn de la metïstasis ya sea in vivo utilizando siARN bicatenario de CXCR4 (Liang Z. et al., 2005) antagonistas peptïdicos de CXCR4 bioestables (Tamamura H. et al., 2003) o crecimiento tumoral in vivo utilizando antagonistas de molïculas pequeïas de CXCR4 como AMD 3100 (Rubin J.B. et al., 2003; De Falco V. et al., 2007) o Mab (patente WO2004/059285 A2) . Por lo tanto, CXCR4 es un objetivo terapïutico validado para cïnceres.

El receptor 2 de quimiocinas (CXCR2) , otro receptor de quimiocinas tambiïn se describe como un objetivo interesante en oncologïa. De hecho, CXCR2 transmite una seïal de crecimiento celular autocrino en varios tipos de cïlulas tumorales y tambiïn puede afectar al crecimiento tumoral indirectamente al activar la angiogenia (Tanaka T. et al. 2005) .

El receptor de quimiocinas CXCR2 abarca 360 aminoïcidos. Se expresa principalmente en las cïlulas endoteliales y especialmente durante la neovascularizaciïn. Varias quimiocinas se unen al receptor CXCR2:... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo humanizado que puede unirse especïficamente a CXCR4, o un fragmento funcional del mismo, seleccionïndose dicho fragmento funcional de entre los fragmentos Fv, Fab, (Fab') 2, Fab', scFv, scFv-Fc y diacuerpos, caracterizado porque dicho anticuerpo humanizado, o compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, comprende cadenas pesadas y ligeras, presentando dicha cadena pesada las CDR que consisten en CDR-H1, CDR-H2 y CDR-H3 y presentando dicha cadena ligera las CDR que consisten en CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3, en el que dichas CDR-H1, CDR-H2 y CDR-H3 comprenden respectivamente las secuencias SEC ID nï 4, 5 y 6 y dichas CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3 comprenden respectivamente las secuencias SEC ID nï 7, 8 y 9.

2. Anticuerpo humanizado, o un fragmento funcional del mismo, segïn la reivindicaciïn 1, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia seleccionada de entre el grupo que consiste en las SEC ID nï 10, nï 11, nï 12, nï 13, nï 83, nï 85 o nï 87 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia seleccionada de entre el grupo que consiste en las SEC ID nï 14, nï 15, nï 16, nï 17, nï 18, nï 19, nï 20, nï 84, nï 86

o nï 88.

3. Anticuerpo humanizado, o un fragmento funcional del mismo, segïn la reivindicaciïn 1, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia seleccionada de entre el grupo que consiste en las SEC ID nï 21, nï 22, nï 23, nï 24, nï 89 o nï 91 y una cadena ligera de secuencia seleccionada de entre el grupo que consiste en las SEC ID nï 25, nï 26, nï 27, nï 28, nï 29, nï 30, nï 31, nï 90 onï 92.

4. Anticuerpo humanizado, o un fragmento funcional del mismo, segïn la reivindicaciïn 1, seleccionado de entre el grupo que consiste en:

-anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 11 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 16;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 22 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 27;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 11 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 17;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 22 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 28;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 11 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 18;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 22 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 29;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 11 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 19;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 22 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 30;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 12 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 14;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 23 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 25;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 12 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 15;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 23 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 26;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 10 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 14;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 21 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 25;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia nï SEC ID 10 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 88;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 21 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 92;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 11 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 88;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEQ ID nï 22 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 92;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 12 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 88;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 23 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 92;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 13 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 88;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 24 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 92;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 87 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 14;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 91 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 25;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 87 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 15;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 91 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 26;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 87 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 16;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 91 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 27;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 87 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 17;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 91 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 28;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 87 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 18;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 91 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 29;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 87 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 19;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 91 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 30;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una regiïn variable de la cadena pesada de secuencia SEC ID nï 87 y una regiïn variable de la cadena ligera de secuencia SEC ID nï 20;

-un anticuerpo humanizado, o un compuesto derivado o fragmento funcional del mismo, caracterizado porque comprende una cadena pesada de secuencia SEC ID nï 91 y una cadena ligera de secuencia SEC ID nï 31.

5. Molïcula de ïcido nucleico aislado caracterizada porque se selecciona de entre los ïcidos nucleicos siguientes:

a) un ïcido nucleico, ADN o ARN, que codifica un anticuerpo humanizado o un fragmento funcional del mismo, segïn cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4;

b) un ïcido nucleico complementario a un ïcido nucleico como se define en a) ;

c) un ïcido nucleico de por lo menos 18 nucleïtidos que pueden hibridar en condiciones muy estrictas con por lo menos una de las 3 CDR de una cadena pesada que comprende las secuencias de ïcido nucleico SEC ID nï 38 a nï 41, nï 49 a nï 52, nï 93 o nï 95; y

d) un ïcido nucleico de por lo menos 18 nucleïtidos que pueden hibridar bajo condiciones muy estrictas con por lo menos una de las 3 CDR de una cadena ligera que comprende las secuencias de ïcido nucleico SEC ID nï 42 a nï 48, nï 53 a nï 59, nï 94 o nï 96.

6. Molïcula de ïcido nucleico aislado segïn la reivindicaciïn 5 que comprende una secuencia de ïcido nucleico seleccionada de entre el grupo que consiste en:

-una secuencia de ïcido nucleico que codifica una regiïn variable de la cadena pesada de un anticuerpo humanizado, comprendiendo dicha secuencia nucleotïdica de la regiïn variable de la cadena pesada una secuencia nucleotïdica CDR-H1 de SEC ID nï 32, una secuencia nucleotïdica CDR-H2 de SEC ID nï 33 y una secuencia nucleotïdica CDR-H3 de SEC ID nï 34;

-una secuencia de ïcido nucleico que codifica una regiïn variable de la cadena ligera de un anticuerpo humanizado, comprendiendo dicha secuencia nucleotïdica de regiïn variable de la cadena ligera una secuencia nucleotïdica CDR-L1 de SEC ID nï 35 o nï 60, una secuencia nucleotïdica CDR-L2 de SEC ID nï 36 o nï 61 y una secuencia nucleotïdica CDR-L3 de SEC ID nï 37 o nï 62; y

-una secuencia de ïcido nucleico que codifica una regiïn variable de la cadena pesada y una regiïn variable de la cadena ligera de un anticuerpo humanizado,

i) comprendiendo dicha secuencia nucleotïdica de la regiïn variable de la cadena pesada una secuencia nucleotïdica CDR-H1 de SEC ID nï 32, una secuencia nucleotïdica CDR-H2 de SEC ID nï 33 y una secuencia nucleotïdica CDR-H3 de SEC ID nï 34; y

ii) comprendiendo dicha secuencia nucleotïdica de la regiïn variable de la cadena ligera una secuencia nucleotïdica CDR-L1 de SEC ID nï 35 o nï 60, una secuencia nucleotïdica CDR-L2 de SEC ID nï 36 o nï 61 y una secuencia nucleotïdica CDR-L3 de SEC ID nï 37 o nï 62.

7. Vector compuesto de un ïcido nucleico segïn cualquiera de las reivindicaciones 5 y 6.

8. Cïlula anfitriona que comprende un vector segïn la reivindicaciïn 7.

9. Animal transgïnico, excepto el hombre, que comprende una cïlula transformada por un vector segïn la reivindicaciïn 8.

10. Procedimiento para producir un anticuerpo humanizado, o un fragmento funcional del mismo, caracterizado porque dicho procedimiento comprende las etapas siguientes:

-el cultivo en un medio de y en las condiciones adecuadas de cultivo para una cïlula anfitriona segïn la reivindicaciïn 8; y

-recuperar dicho anticuerpo, o uno de sus fragmentos funcionales, producido asï a partir del medio de cultivo o a partir de dichas cïlulas cultivadas.

11. Anticuerpo humanizado, o un fragmento funcional del mismo, segïn una de las reivindicaciones 1 a 4, para su utilizaciïn como fïrmaco.

12. Composiciïn que comprende como principio activo un compuesto que consiste en un anticuerpo humanizado, o un fragmento funcional del mismo, segïn una de las reivindicaciones 1 a 4 y 11.

13. Composiciïn segïn la reivindicaciïn 12, caracterizada porque comprende, ademïs, como un producto de combinaciïn para su utilizaciïn de una manera simultïnea, separada o prolongada, un anticuerpo antitumoral aparte de un anticuerpo dirigido contra CXCR4.

14. Composiciïn segïn una de las reivindicaciones 12 o 13, caracterizada porque comprende, ademïs, como producto de combinaciïn o conjugaciïn para su utilizaciïn de una manera simultïnea, separada o prolongada, un agente citotïxico/citostïtico, una toxina celular o un radioisïtopo.

15. Composiciïn segïn una de las reivindicaciones 12 a 13, para su utilizaciïn como fïrmaco.

16. Anticuerpo humanizado, o fragmento funcional del mismo, segïn cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 u 11, y/o composiciïn segïn cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15, para la prevenciïn o el tratamiento del cïncer.

17. Anticuerpo humanizado, o un fragmento funcional del mismo, y/o una composiciïn segïn la reivindicaciïn 16, caracterizado porque dicho cïncer es un cïncer seleccionado de entre cïncer de prïstata, osteosarcoma, cïncer de pulmïn, cïncer de mama, cïncer de endometrio, mieloma mïltiple, cïncer de ovario, cïncer de pïncreas y cïncer de colon.

18. Procedimiento para la detecciïn in vitro de la presencia y/o la ubicaciïn de un tumor que expresa CXCR4 en un paciente, en el que dicho procedimiento comprende las etapas siguientes:

(a) poner en contacto una muestra del paciente con un anticuerpo humanizado, o un fragmento funcional del mismo, segïn una de las reivindicaciones 1 a 4 u 11; y

(b) detectar la uniïn de dicho anticuerpo con la muestra.

19. Kit que comprende por lo menos un anticuerpo humanizado, o un fragmento funcional del mismo, segïn una de las reivindicaciones 1 a 4 u 11, estando dicho anticuerpo preferentemente marcado.