Anticuerpo dirigido contra el péptido liberador de gastrina y uso del mismo.

Un método para medir un precursor del péptido liberador de gastrina y/o un producto digerido del mismo,

utilizando dos o más anticuerpos diferentes que reconocen un epítopo representado por una secuencia de aminoácidos que consiste en el aminoácido 47 al aminoácido 68 de la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 1.

Anticuerpo dirigido contra el péptido liberador de gastrina y uso del mismo CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere a anticuerpos dirigidos contra el precursor del péptido liberador de gastrina (ProGRP) y al uso de los mismos, y se utiliza ampliamente en el descubrimiento temprano, el seguimiento del tratamiento, el seguimiento de la recurrencia, o similares, de diversas enfermedades, incluido carcinoma de pulmón de células pequeñas.

TÉCNICA DE ANTECEDENTES

La causa principal de muerte en Japón es la neoplasia maligna y, entre otros, la mortalidad por cáncer de pulmón supera a la del cáncer de estómago en el primer puesto en hombres, mientras que se encuentra en el tercer puesto en mujeres. La mortalidad por cáncer de pulmón tiende a aumentar cada año. El cáncer de pulmón se clasifica histo-patológicamente en los siguientes cuatro tipos de tejidos principales: carcinoma de pulmón de células escamosas y carcinoma de pulmón de células pequeñas (SCLC -siglas en inglés) que se desarrolla en la zona hilar del pulmón, y adenocarcinoma de pulmón y carcinoma de pulmón de células grandes que se desarrolla en el campo pulmonar.

En particular, el carcinoma de pulmón de células pequeñas prolifera rápidamente y causa la metástasis remota en la fase temprana y, por lo tanto, en muchos casos, se descubre que este carcinoma es un cáncer avanzado, que ya se metastatizado sistémicamente, incluso en el momento del diagnóstico inicial. En lo que respecta a la tasa de curación de este tipo de cáncer, la tasa de curación en pacientes con enfermedad limitada (LD -siglas en inglés) carcinoma de pulmón de células pequeñas en la que la lesión se limita sólo a un lado del campo pulmonar es de aproximadamente 20%; sin embargo, en pacientes con enfermedad extensa (ED -siglas en inglés) de carcinoma de pulmón de células pequeñas en las que la lesión se ha metastatizado a ambos pulmones o a otros órganos, se dice que la curación es difícil en la práctica.

Además, puesto que el carcinoma de pulmón de células pequeñas es muy sensible a fármacos contra el cáncer, la quimioterapia se considera como la primera opción de tratamiento. Por el contrario, el carcinoma de pulmón de células no pequeñas (no SCLC) muestra una baja tasa de respuesta a la quimioterapia y, por lo tanto, la terapia quirúrgica se considera como la primera elección de la terapia.

Por lo tanto, el carcinoma de pulmón de células pequeñas es un cáncer que particularmente requiere el descubrimiento y el tratamiento tempranos, incluso entre los diversos tipos de cánceres de pulmón, y por esa razón un diagnóstico diferencial de carcinoma de pulmón de células pequeñas y de carcinoma de pulmón de células no pequeñas es extremadamente importante para la toma de decisiones sobre la estrategia terapéutica.

Uno de los métodos para detectar el cáncer de pulmón es el examen de esputo. Sin embargo, aunque el examen de esputo es adecuado principalmente para el examen de carcinoma de pulmón de células escamosas, existe el problema de que la tasa positiva contra el carcinoma de pulmón de células pequeñas es baja. La radiografía también es un método ampliamente utilizado en el descubrimiento del cáncer de pulmón, pero en relación con el carcinoma de pulmón de células escamosas o el carcinoma de pulmón de células pequeñas que se desarrolla en la zona hilar del pulmón, existe el problema de que la sombra del corazón cae en el área hilar, de modo que es muy difícil captar imágenes de la sombra de los tejidos cancerosos. Además, con respecto al carcinoma de pulmón de células pequeñas, se considera que, incluso si los pacientes que muestran una sombra anormal del campo pulmonar son diagnosticados utilizando el citodiagnóstico del esputo, una simple radiografía del tórax, tomografía computarizada, broncoscopia y similares, no es fácil el descubrimiento temprano de este tipo de cáncer de pulmón.

Además, algunos de los métodos de ensayo para el diagnóstico de cáncer tales como, por ejemplo, la exposición a la radiación, la biopsia y la broncoscopia, provocan dolor en los pacientes, y también requieren de equipos muy caros, una tecnología experta, y similares.

Por lo tanto, se está llevando a cabo una investigación para encontrar un marcador tumoral que haga posible, a través de un análisis de sangre más conveniente, diagnosticar el cáncer con una alta eficacia mientras que el cáncer sea curable. Hoy en día, se están utilizando 30 o más marcadores tumorales en el descubrimiento y el

diagnóstico de enfermedades de cáncer, en la indicación para el seguimiento de la evolución de la enfermedad, en el diagnóstico de recurrencia, y similares.

Dado que el cáncer de pulmón se clasifica en una diversidad de tipos de tejido, no se ha reseñado aún un marcador tumoral que sea eficaz para el descubrimiento o el diagnóstico de todos los tipos de cáncer de pulmón. Por lo tanto, en la actualidad se seleccionan marcadores eficaces y se utilizan de acuerdo con cada uno de los tipos de tejido de cáncer de pulmón.

Por ejemplo, el antígeno carcinoembrionario (CEA -siglas en inglés) o el antígeno sialil Lex-i se selecciona principalmente y se utiliza para el adenocarcinoma de pulmón, mientras que el antígeno relacionado con el carcinoma de células escamosas (SCC -siglas en inglés) se selecciona y se utiliza principalmente para el carcinoma de pulmón de células escamosas, y así la enolasa específica neuronal (NSE -siglas en inglés) o similar para el carcinoma de pulmón de células pequeñas.

Sin embargo, la NSE es desventajosa debido a que: (1) la tasa positiva contra el cáncer temprano curable es baja;

(2) se reconoce un aumento transitorio en los valores medidos debido al tratamiento; (3) los valores medidos se incrementan debido a la hemólisis tras la recogida de sangre; y (4) la diferencia entre los valores medidos obtenidos de pacientes de carcinoma de pulmón de células pequeñas y los valores medidos obtenidos de personas normales es pequeño. Por lo tanto, podría decirse que la NSE no es necesariamente un marcador tumoral eficaz para el carcinoma de pulmón de células pequeñas.

El péptido liberador de gastrina (GRP -siglas en inglés) es un péptido cerebro-intestinal compuesto por 27 aminoácidos, que fue aislado de tejidos de estómago porcino por McDonald et al. en 1978, y tiene una acción promotora de la secreción de gastrina. También se ha confirmado la existencia de GRP en seres humanos, y también fue clonado en 1984 un gen que codifica GRP humano.

Yamaguchi et al. en el Centro Nacional del Cáncer en Japón ha llevado a cabo una investigación sobre las características biológicas del carcinoma de pulmón de células pequeñas, que se cree que se deriva de células neuroendocrinas, y en el curso de la investigación examinaron 15 o más clases de hormonas cerebro-intestinales, incluida la hormona adrenocorticotrópica (ACTH -siglas en inglés) , calcitonina y similares, y se encontró que el GRP es secretado activamente por parte de líneas de células de carcinoma de pulmón de células pequeñas cultivadas en la frecuencia más alta y en la más alta concentración (Documento No Patente 1) . También establecieron un radioinmunoensayo (RIA) en combinación con un método para concentrar el GRP en la sangre, y reveló que pacientes con carcinoma de pulmón de células pequeñas exhibirían una mayor concentración de GRP arterial en comparación con personas sanas. Sin embargo, dado que el GRP se digiere rápidamente en la sangre, la concentración del mismo en la sangre es baja, y puesto que el ensayo mencionado anteriormente requiere un complicado proceso de concentración, la aplicación clínica del ensayo es difícil.

Se reveló por investigaciones llevadas a cabo a partir de entonces que tres especies de precursores de GRP (ProGRP) se producen en diversas células mediante corte y empalme alternativo de ARN (Documento No Patente 2) . Estas tres especies de ProGRP tienen en común desde el aminoácido 1 hasta el aminoácido 98 de la secuencia de aminoácidos, mientras que la secuencia de aminoácidos varía entre unas y otras, desde el aminoácido 99 y el resto, a causa del corte y empalme de ARN alternativo. Esta parte común de la secuencia de aminoácidos que consiste en el aminoácido 1 al aminoácido 98 se muestra en SEQ ID NO: 1. En lo que sigue, en la invención, a menos que se indique lo contrario, en particular la indicación del número de residuos aminoácidos en el ProGRP, secuencias parciales de los mismos, digestiones y similares, se basa en la indicación de número de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.

La secuencia de aminoácidos que consiste en el aminoácido... [Seguir leyendo]

1. Un método para medir un precursor del péptido liberador de gastrina y/o un producto digerido del mismo,

utilizando dos o más anticuerpos diferentes que reconocen un epítopo representado por una secuencia de aminoácidos que consiste en el aminoácido 47 al aminoácido 68 de la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 1.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, que es un método de inmunoensayo sándwich.

1.

3. El método de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que dichos dos o más anticuerpos diferentes incluyen al menos un anticuerpo monoclonal que reconoce un epítopo representado por una secuencia de aminoácidos que consiste en los aminoácidos 47 a 57 de la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 1, y un anticuerpo monoclonal que reconoce un epítopo representado por una secuencia de aminoácidos que consiste en los aminoácidos 55 a 68 de la secuencia de aminoácidos recogida en SEQ ID NO: 1

4. Un anticuerpo monoclonal que reconoce un epítopo representado por una secuencia de aminoácidos que consiste en los aminoácidos 47 a 57 de la secuencia de aminoácidos recogida en la SEQ ID NO: 1.

5. Un anticuerpo monoclonal que reconoce un epítopo representado por una secuencia de aminoácidos que consiste en los aminoácidos 55 a 68 de la secuencia de aminoácidos recogida en la SEQ ID NO: 1.

6. El anticuerpo monoclonal de acuerdo con la reivindicación 5, que es producido por el hibridoma GCY9 depositado bajo el Nº de Acceso FERM BP-10991.

2.

7. El anticuerpo monoclonal de acuerdo con la reivindicación 4, que es producido por el hibridoma GCY17 depositado bajo el Nº de Acceso FERM BP-10992.

8. Hibridoma GCY9 depositado bajo el Nº de Acceso FERM BP-10991. 3.

9. Hibridoma GCY17 depositado bajo el Nº de Acceso FERM BP-10992.

10. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que los dos o más anticuerpos diferentes comprenden anticuerpos de acuerdo con las reivindicaciones 6 y 7.

3.

11. Un kit para medir un precursor del péptido liberador de gastrina o un producto digerido del mismo, que comprende el anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7.

12. Uso del kit de acuerdo con la reivindicación 11, para realizar un diagnóstico de cáncer o vigilar los efectos del 40 tratamiento del cáncer.