Un anticuerpo que se fija a un péptido que comprende una secuencia parcial de aminoácidos que consiste en los aminoácidos 40 hasta 60 de la secuencia de aminoácidos que se muestra en SEQ ID NO:

2, y no se fija a un péptido que comprende una secuencia contigua de cualesquiera 8 aminoácidos situados en la secuencia de aminoácidos que se muestra en SEQ ID NO: 2

Campo técnico

El presente invento se refiere a un anticuerpo dirigido contra un precursor de un péptido liberador de gastrina y a su uso y se usa ampliamente en diagnósticos precoces, en la vigilancia del tratamiento, en la vigilancia de la recurrencia, o similares, de diversas enfermedades, incluyendo un cáncer de pulmón de células pequeñas.

Técnica de antecedentes

La causa de muerte más frecuente en nuestro país es un neoplasma maligno y, en particular, la mortalidad del cáncer de pulmón en varones es la más elevada, superando a la del cáncer de estómago, mientras que esta mortalidad es la tercera más alta en mujeres y tiende a crecer cada año. El cáncer de pulmón es clasificado desde el punto de vista histopatológico en los siguientes cuatro subtipos principales, a saber, un carcinoma de pulmón de células escamosas y un carcinoma de pulmón de células pequeñas (SCLC = acrónimo de small-cell lung carcinoma) que aparece en la región hiliar, un adenocarcinoma y un carcinoma de pulmón de células grandes, que se presenta en la zona de los pulmones.

En particular, puesto que un carcinoma de pulmón de células pequeñas prolifera con rapidez y causa metástasis remotas en una etapa precoz, se ha descubierto frecuentemente, incluso en el diagnóstico inicial, que es un cáncer progresivo en el que una metástasis ya se ha producido sistémicamente. La tasa de curaciones de este tipo de cáncer es de aproximadamente un 20 % para los pacientes con el tipo de enfermedad limitada (LD = acrónimo de limited disease) de carcinoma de células pequeñas, en el que una lesión patológica está limitada solo por un lado del pulmón; sin embargo, para los pacientes con el tipo de enfermedad extensa (ED = acrónimo de extensive disease) en el que el cáncer se ha metastatizado tanto a los pulmones como a otros órganos, se afirma que una curación completa es prácticamente difícil.

Además, puesto que un carcinoma de pulmón de células pequeñas es altamente sensible a los fármacos anticancerosos, se considera que una quimioterapia es la mejor opción para el tratamiento de la enfermedad. Sin embargo, la tasa de éxito con una quimioterapia es baja con un carcinoma de pulmón de células no pequeñas (non-SCLC), y por lo tanto se sabe que un tratamiento quirúrgico es la mejor opción para el tratamiento.

Por lo tanto, un carcinoma de pulmón de células pequeñas es un cáncer que particularmente necesita un descubrimiento precoz y un tratamiento precoz entre los cánceres de pulmón, y por esta razón, un diagnóstico diferencial de un carcinoma de pulmón de células pequeñas y de un carcinoma de pulmón de células no pequeñas es extremadamente importante para tomar una decisión acerca del curso de tratamiento.

Uno de los métodos para descubrir un cáncer de pulmón es un examen de los esputos. Sin embargo, aunque un examen de los esputos es apropiado predominantemente para el examen de un carcinoma de células escamosas, existe un problema que consiste en que es baja la tasa de positivos para un carcinoma de pulmón de células pequeñas. También, la reproducción en imágenes con rayos X es otro método ampliamente usado en el descubrimiento de un cáncer de pulmón; sin embargo, con respecto a un carcinoma de células escamosas o a un carcinoma de pulmón de células pequeñas que se presenta en la región hiliar, existe el problema de que la reproducción en imágenes de la sombra de tejidos cancerosos es muy difícil, puesto que la sombra del corazón cae en la región hiliar. Además, con respecto a un carcinoma de pulmón de células pequeñas, se cree que incluso aunque los pacientes que muestran una sombra anómala de la zona de los pulmones se diagnostican usando un citodiagnóstico de los esputos, la simple reproducción en imágenes por rayos X del pecho, la exploración por CT (tomografía computerizada), la broncoscopia y similares, nunca es fácil un descubrimiento precoz de este tipo de cáncer de pulmón.

Además, varios exámenes destinados a diagnosticar un cáncer, tales como los de irradiación, biopsia y broncoscopia, causan dolor en los pacientes y requieren costosos instrumentos o un profesional experto.

Por lo tanto, se está realizando una investigación para encontrar un marcador de tumores que haga posible un diagnóstico altamente eficiente de un cáncer en un estadio curable por medio de un método más conveniente de examen de la sangre. Actualmente, se están usando 30 o más marcadores de tumores en el descubrimiento y el diagnóstico de pacientes de cáncer, en una indicación para vigilar el curso de una enfermedad, en el diagnóstico de la recurrencia o similares.

Puesto que los cánceres de pulmón tienen diversos subtipos, no hay ningún informe acerca de un marcador de tumores que sea eficaz en el descubrimiento o en el diagnóstico de todos los subtipos de cánceres de pulmón. Por lo tanto, actualmente unos efectivos marcadores de tumores se seleccionan y usan de acuerdo con cada subtipo de cáncer de pulmón.

Por ejemplo, un antígeno carcinoembriónico (CEA) o un antígeno sialil Lex-i se escoge y se usa principalmente para un adenocarcinoma pulmonar, un antígeno relacionado con un carcinoma de células escamosas (SCC) se usa para un carcinoma de células escamosas, y una enolasa específica de neuronas (NSE) se usa para un carcinoma de pulmón de células pequeñas.

Sin embargo, una NSE es ventajosa por el hecho de que la tasa de positivos es baja en una etapa temprana curable en un SCLC; (2) un aumento transitorio en los valores medidos es reconocido después de un tratamiento; (3) los valores medidos aumentan debido a una hemólisis durante una recogida de sangre; (4) es pequeña la diferencia en los valores medidos entre pacientes de carcinoma de pulmón de células pequeñas y personas normales; y hechos similares. Por lo tanto, no se podría afirmar necesariamente que la NSE sea un marcador efectivo de tumores para un carcinoma de pulmón de células pequeñas.

Un péptido liberador de gastrina (GRP) es un péptido de intestino y cerebro que comprende 27 aminoácidos, que fue aislado a partir de tejidos de estómago de animal porcino por McDonald y colaboradores en 1978 y que tiene un efecto favorecedor de la secreción de gastrina. La presencia de un GRP en seres humanos ha sido confirmada también y el gen que codifica el GRP humano ha sido clonado también en 1984.

Yamaguchi y colaboradores en el Centro Nacional del Cáncer en Japón midieron 15 o más tipos de hormonas de intestino y cerebro, que incluyen la hormona adenocorticotrópica (ACTH), calcitonina y similares, en el curso de la investigación de las características biológicas de un carcinoma de pulmón de células pequeñas, que se concibe que se deriva de células endocrinas, y explicaron que un GRP es secretado activamente a partir de linajes de células cultivadas de carcinoma de pulmón de células pequeñas, con la más alta frecuencia y la más alta concentración (documento 1 que no es de patente). Además, ellos establecieron también un inmunoensayo radiológico (RIA) combinado con un método para concentrar un GRP en sangre, y encontraron que los pacientes con un carcinoma de pulmón de células pequeñas podrían mostrar una concentración en sangre del GRP más alta en comparación con personas normales. Sin embargo, puesto que un GRP es digerido rápidamente en la sangre, su concentración en sangre es baja, y puesto que el ensayo antes mencionado requiere complicados procesos de concentración, su aplicación clínica es difícil.

A partir de las investigaciones realizadas después de esto, se encontró que tres especies de precursores de GRP (ProGRP) se producen empalmando ARN alternativos en diversas células (documento 2 que no es de patente). Estas tres especies de ProGRP muestran que los aminoácidos desde1º hasta 98º en la secuencia de aminoácidos son comunes, mientras que las secuencias de aminoácidos en y después del 99º aminoácido son diferentes unas de otras, debido a un empalme alternativo de ARN. Esta parte común en la secuencia de aminoácidos desde los aminoácidos 1º hasta 98º se muestra en SEQ ID NO:1. Aquí seguidamente, a menos que se señale otra cosa distinta en particular, la numeración de los residuos de aminoácidos en los ProGRP de acuerdo con el presente invento, las secuencias parciales de aminoácidos de los mismos, los materiales digeridos y similares, se basan en la numeración de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:2.

La secuencia de aminoácidos de los aminoácidos desde 1º hasta 27º en las... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo que se fija a un péptido que comprende una secuencia parcial de aminoácidos que consiste en los aminoácidos 40 hasta 60 de la secuencia de aminoácidos que se muestra en SEQ ID NO: 2, y no se fija a un péptido que comprende una secuencia contigua de cualesquiera 8 aminoácidos situados en la secuencia de aminoácidos que

5 se muestra en SEQ ID NO: 2.

2. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 2, que es producido por el hibridoma 3D6-2 depositado bajo el número de acceso FERM BP-08669.

3. Hibridoma 3D6-2 depositado bajo el número de acceso nº FERM BP-08669.

4. Un método para determinar un precursor de un péptido liberador de gastrina y/o un material digerido del mismo,

10 usando dos o más anticuerpos diferentes que reconocen a un péptido que comprende una secuencia parcial de aminoácidos que consiste en los aminoácidos 40 hasta 75 de la secuencia de aminoácidos que se muestra en SEQ ID NO: 2, en que por lo menos uno de los dos o más diferentes anticuerpos es el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 o 2.

5. El método de acuerdo con la reivindicación 4, que comprende además usar un anticuerpo que reconoce a un péptido que comprende la secuencia parcial de aminoácidos que consiste en los aminoácidos 71 hasta 75 de la secuencia de aminoácidos que se muestra en SEQ ID NO: 2.

6. El método de acuerdo con la reivindicación 4 o 5, en el que el método para la determinación es un método de análisis inmunológico de emparedado.

7. Un estuche para la determinación de un precursor de un péptido liberador de gastrina o un material digerido del 20 mismo, comprendiendo el estuche el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2.