Homólogo del factor del crecimiento ZVEGF3.

Un antagonista de zvegf3 para su uso en la reducción de fibrosis en un sujeto,

en donde el antagonista de zvegf3 es un anticuerpo que se une específicamente a un epítopo de un polipéptido como se muestra en los restos 235-345 o 226-345 de SEC ID Nº: 2.

Homólogo del factor del crecimiento ZVEGF3

Antecedentes de la invención En animales pluricelulares, el crecimiento, la diferenciación y la migración celular están controlados por factores del crecimiento polipeptídicos. Estos factores del crecimiento desempeñan un papel tanto en el desarrollo normal como en la patogénesis, incluyendo el desarrollo de tumores sólidos.

Los factores del crecimiento polipeptídicos influyen sobre los acontecimientos celulares uniéndose a receptores de superficie celular, muchos de los cuales son tirosina quinasas. La unión inicia una cadena de acontecimientos de señalización dentro de la célula, que en última instancia da como resultado cambios fenotípicos, tales como división celular, producción de proteasa y migración celular.

Los factores del crecimiento se pueden clasificar en familias basándose en similitudes estructurales. Una de tales familias, la familia de PDGF (factor del crecimiento derivado de plaquetas) , se caracteriza por una estructura dimérica estabilizada mediante enlaces de disulfuro. Esta familia incluye PDGF, los factores del crecimiento placentarios (PIGF) y los factores del crecimiento endoteliales vasculares (VEGF) . Las cadenas polipeptídicas individuales de estas proteínas forman estructuras de orden más elevado características que tienen una configuración similar a corbata de lazo alrededor de un nudo de cistina, formado por enlaces de disulfuro entre pares de restos de cistina. Las interacciones hidrófobas entre bucles contribuyen a la dimerización de los dos monómeros. Véase Daopin y col., Science 257: 369, 1992; Lapthorn y col., Nature 369: 455, 1994. Los miembros de estas familias son activos tanto como dímeros como como heterodímeros. Véase, por ejemplo, Heldin y col., EMBO J. 7: 1387-1393, 1988; Cao y col., J. Biol. Chem. 271: 3154-3162, 1996. El motivo de nudo de cistina y el pliegue de corbata de lazo también son característicos de los factores del crecimiento factor del crecimiento transformante beta (TGF-!) y factor del crecimiento nervioso (NGF) , y las hormonas de glicoproteínas. Aunque sus secuencias de aminoácidos son bastante diferentes, todas estas proteínas contienen los seis restos de cisteína conservados del nudo de cistina.

Se han identificado cuatros factores del crecimiento endotelial vascular: VEGF, también conocido como factor de permeabilidad vascular (Dvorak y col., Am. J. Pathol. 146: 1029-1039, 1995) ; VEGF-B (Olofsson y col., Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos 93: 2567-2581, 1996; Hayward y col., Publicación OMPI WO 96/27007) ; VEGF-C (Joukov y col., EMBO J. 15: 290-298, 1996) ; y VEGF-D (Oliviero, documento WO 97/12972; Achen y col., documento WO 98/07832) . Cinco polipéptidos de VEGF (aminoácidos 121, 145, 165, 189 y 206) surgen a partir del corte y empalme alternativo de ARNm de VEGF.

Los VEGF estimulan el desarrollo de vasculatura a través de un proceso conocido como angiogénesis, en el que las células endoteliales vasculares reentran en el ciclo celular, degradan la membrana basal subyacente y migran para formar nuevos brotes capilares. Estas células después se diferencian y se forman vasos maduros. Este proceso de crecimiento y diferenciación está regulado por un equilibrio de factores proangiogénicos y antiangiogénicos. La angiogénesis es primordial para la formación normal y reparación de tejido, que ocurre en el desarrollo de embrión y curación de heridas. La angiogénesis también es un factor en el desarrollo de determinadas enfermedades, incluyendo tumores sólidos, artritis reumatoide, retinopatía diabética, degeneración macular y aterosclerosis.

Se han identificado varias proteínas de vertebrados e invertebrados que influyen sobre el desarrollo neuronal. Entre estas moléculas se encuentran miembros de la familia de neuropilina y la familia de semaforina/colapsina. Las extensiones de células neuronales, conocidas como procesos, crecen lejos del cuerpo de la célula para formar conexiones sinápticas. Los procesos largos y delgados que transportan información lejos del cuerpo celular se denominan axones y los procesos cortos y más gruesos que llevan información a y desde el cuerpo celular se denominan dendritas. Los axones y las dendritas se denominan de forma conjunta neuritas. Las neuritas se extienden por medio de conos de crecimiento, las puntas de crecimiento de las neuritas, que son altamente móviles y que son responsables en última instancia del aumento y ampliación de la red neuronal en el organismo.

Se han identificado tres receptores para VEGF: KDR/Flk-1 (Matthews y col., Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos 88: 9026-9030, 1991) , Flt-1 (de Vries y col., Science 255: 989-991, 1992) y neuropilina-1 (Soker y col., Cell 92: 735745, 1998) . La neuropilina-1 es una glicoproteína de superficie celular que se identificó inicialmente en tejidos nerviosos de renacuajo Xenopus, posteriormente en pollo, ratón y ser humano. La estructura principal de neuropilina-1 está altamente conservada entre estas especies de vertebrados. La neuropilina-1 ha demostrado ser un receptor de diversos miembros de la familia de semaforina incluyendo semaforina III (Kolodkin y col., Cell 90: 753-762, 1997) , Sema E y Sema IV (Chen y col., Neuron 19: 547-559, 1997) . Diversas actividades se ha asociado con la unión de neuropilina-1 a sus ligandos. Por ejemplo, la unión de semaforina III a neuropilina-1 puede inducir colapso del cono de crecimiento neuronal y la repulsión de neuritas in vitro (Kitsukawa y col., Neuron 19: 995-1005, 1997) .

En ratones, la neuropilina-1 se expresa en el sistema cardiovascular, sistema nervioso y extremidades en fases del desarrollo particulares. Se observó que los ratones quiméricos que sobreexpresan neuropilina-1 eran letales para los embriones (Kitsukawa y col., Development 121: 4309-4318, 1995) . Los embriones quiméricos mostraron varias anormalidades morfológicas, incluyendo exceso de capilares y vasos sanguíneos, dilatación de vasos sanguíneos, corazones con malformaciones, brotación ectópica y defasciculación de fibras nerviosas y dedos adicionales. Todas estas anormalidades se produjeron en los órganos en los cuales se expresa la neuropilina-1 en el desarrollo normal. Los ratones que carecen del gen de neuropilina-1 tienen anormalidades cardiovasculares graves, incluyendo deficiencia de formación de red vascular en los sistemas nerviosos central y periférico (Takashima y col., American Heart Association 1998 Meeting, Resumen Nº 3178) .

La neuropilina-1 se ha identificado como un receptor de superficie celular de VEGF (Soker y col., ibid.) y presenta actividad de unión selectiva por VEGF185 sobre VEGF121. Se ha demostrado que se expresa en células endoteliales vasculares y células tumorales in vitro. Cuando la neuropilina-1 se coexpresa en células con KDR, la neuropilina-1 potencia la unión de VEGF165 a KDR y quimiotaxis mediada por VEGF165. Por el contrario, la inhibición de unión de VEGF165 a neuropilina-1 inhibe su unión a KDR y su actividad mitógena por células endoteliales (Soker, y col., ibid.) . La neuropilina-1 también es un receptor de PIGF-2 (Migdal y col., J. Biol. Chem. 273: 22272-22278, 1998) . Un segundo receptor de Semaforina, la neuropilina-2, muestra homología con neuropilina-1 pero difiere en la especifidad de unión (Chen y col. Neuron 19: 547-559, 1997) .

Las semaforinas son una familia grande de moléculas que comparten el dominio de semaforina de definición de aproximadamente 500 aminoácidos. Esta familia se puede subdividir en múltiples subfamilias que contienen proteínas tanto secretadas como unidas a membrana. Los miembros selectos de estas subfamilias, clase III (SemD) y clase IV (SemD) , forman homodímeros enlazados mediante puentes de disulfuro. En el caso de SemD, existe un procesamiento proteolítico adicional que crea una isoforma de 65-kDa que carece de la secuencia carboxilo terminal de 33-kDa. La dimerización se cree que es importante para la actividad funcional (Klostermann y col., J. Biol. Chem.

273: 7326-7331, 1998) . La colapsina-1, el primer miembro identificado en vertebrados de la familia de semaforina de proteínas para la guía del axón, también ha demostrado formar dímeros covalentes, siendo la dimerización necesaria para la actividad de colapso (Koppel y col., J. Biol. Chem. 273: 15708-15713, 1998) .

La semaforina III se ha asociado in vitro con la regulación del colapso de clon de crecimiento y quimiorepulsión de neuritas. In vivo también se ha demostrado que es necesaria para la inervación aferente sensorial correcta y otros aspectos del desarrollo, incluyendo defectos esqueléticos y cardiacos (Fehar y col., Nature 383: 525-528, 1996) . Otros miembros de la familia de semaforina han demostrado estar asociados con otras formas de biología. El... [Seguir leyendo]

1. Un antagonista de zvegf3 para su uso en la reducción de fibrosis en un sujeto, en donde el antagonista de zvegf3 es un anticuerpo que se une específicamente a un epítopo de un polipéptido como se muestra en los resto.

23. 345

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22. 345 de SEC ID Nº: 2.

2. El antagonista de zvegf3 de la reivindicación 1 para el uso de la reivindicación 1, en el que la fibrosis es fibrosis hepática.

3. El antagonista de zvegf3 de la reivindicación 1 o 2 para el uso de la reivindicación 1 o 2, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

4. El antagonista de zvegf3 de la reivindicación 1 o 2 para el uso de la reivindicación 1 o 2, en el que el anticuerpo es 10 un anticuerpo de cadena sencilla.

5. Un antagonista de zvegf3 para su uso en la supresión de la activación de células estrelladas en un sujeto, en donde el antagonista de zvegf3 es un anticuerpo que se une específicamente a un epítopo de un polipéptido como se muestra en los resto.

23. 345 .

22. 345 de SEC ID Nº: 2.

6. El antagonista de zvegf3 de la reivindicación 5 para el uso de la reivindicación 5, en el que el anticuerpo es un 15 anticuerpo monoclonal.

7. El antagonista de zvegf3 de la reivindicación 5 para el uso de la reivindicación 5, en el que el anticuerpo es un anticuerpo de cadena sencilla.