Antígenos de Haemophilus influenzae y los correspondientes fragmentos de ADN.

Un polipéptido aislado seleccionado de:

(a) un polipéptido que tiene más de un 99% de identidad con la secuencia aminoacídica expuesta en laSEQ ID NO:

10;

(b) un polipéptido que comprende la secuencia aminoacídica expuesta en la SEQ ID NO: 10;

(c) el polipéptido de (a) o (b), en el que se elimina el residuo Met N-terminal; y

(d) el polipéptido de (a) o (b), en el que se elimina la secuencia aminoacídica secretora;

en el que el polipéptido aislado puede desencadenar una respuesta inmunitaria ante Haemophilus influenzae.

Antígenos de Haemophilus influenzae y los correspondientes fragmentos de ADN

Campo de la invención La presente invención se refiere a polipéptidos de Haemophilus influenzae y a los correspondientes fragmentos de ADN, que pueden ser útiles para prevenir, diagnosticar y/o tratar infecciones por Haemophilus influenzae en individuos tales como seres humanos.

Antecedentes de la invención Haemophilus influenzae es un bacilo gramnegativo que se encuentra en la naturaleza solo como patógeno humano. Los aislamientos de H. influenzae pueden subdividirse en formas encapsuladas y no encapsuladas. Las cepas encapsuladas expresan 1 de 6 polisacáridos capsulares estructural y antigénicamente distintos que se designan tipos “a” a “f”. Las cepas no encapsuladas se definen por su incapacidad de aglutinarse con antisueros contra polisacáridos capsulares reconocidos de H. influenzae y se hacen referencia como no tipables.

Las cepas de H. influenzae no tipables colonizan comúnmente el tracto respiratorio superior, incluyendo la nasofaringe y la orofaringe posterior. Una serie de exámenes de individuos sanos indican índices de colonización de entre 40 y 80% tanto entre niños como adultos (Spinola S.M., Peacock J., Denny F.W., Smith D.L. y Cannon J.G. (1986) “Epidemiology of colonisation by nontypeable Haemophilus influenzae in children : a longitudinal study”. J. Infect. Dis. 154: 100-109; Trottier S., Stenberg K. y Svanborg-Eden C. (1989) “Turn over of nontypeable Haemophilus influenzae in the nasophar y nges of healthy children”. J. Clin. Microbiol. 27: 2175-2179) . La colonización con una cepa particular puede persistir durante semanas o meses, permaneciendo asintomáticos la mayoría de individuos a lo largo de este periodo. La patogénesis de la enfermedad debida a H. influenzae no tipable implica la difusión contigua en el tracto respiratorio. La difusión a zonas adyacentes es habitualmente una consecuencia de anormalidades en las defensas del hospedador no específicas o específicas. Así, la H. influenzae no tipable causa una variedad de infecciones del tracto respiratorio en niños y adultos incluyendo otitis, sinusitis, bronquitis y neumonía. Estas infecciones pueden volverse crónicas o recurrentes en pacientes con bronquitis u otitis. De hecho, en lactantes y niños, la H. influenzae no tipable es una causa frecuente de otitis media aguda y está comúnmente implicada en otitis media recurrente (Harabuchi Y., Fadden H., Yamanaka N., Duffy L., Wolf J., Kr y stofik D. y Tonawanda/Williamsville Pediatrics. (1994) “Nasophar y ngeal colonisation with nontypeable Haemophilus influenzae and recurrent otitis media”. J. Infect. Dis. 170: 862-866) . En lactantes, la H. influenzae no tipable es responsable de entre un 27% y un 37% de los primeros episodios de otitis media a la edad de 1 año (Smith-Vaughan H.C., Sriprakash K.S., Mathews J.D. y Kemp D.J. (1997) “Nonencapsulated Haemophilus influenzae in aboriginal infants with otitis media: prolonged carriage of P2 porin variants and evidence for horizontal P2 gene transfer”. Infect. Immun. 65: 1468-1474; Teele D.W., Klein J.O., Rosner B. y Greater Boston Otitis Media study Group. (1989) “Epidemiology of otitis media during the first seven years of life in children in Greater Boston : a prospective, cohort study”. J. Infect. Dis. 160: 83-94) . La meningitis está causada a veces por H. influenzae no tipable y da cuenta de 13% de todos los casos. Pero la H. influenzae no tipable es particularmente prevalente en hospedadores con una enfermedad subyacente que afecta al sistema inmunitario mucoso innato, tal como enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y fibrosis quística (Murphy T.F. y Sethi S. (1992) “Bacterial infection in chronic obstructive pulmonar y disease”. Am. Rev. Respir. Dis. 146:1067-1083; St. Geme J.W. III. (1993) “Nontypeable Haemophilus influenzae disease: epidemiology, pathogenesis and prospects for prevention”. Inflect. Agents Dis. 2: 1-16) . Las cepas de H. influenzae no tipables se encuentran predominantemente durante agravamientos cuando el esputo se vuelve mucopurulento. Los agravamientos infecciosos agudos de la bronquitis crónica desempeñan un papel importante en la morbilidad y mortalidad de pacientes con enfermedades pulmonares crónicas.

Las etiologías de la neumonía intrahospitalaria parecen haber cambiado en la última década. Aunque Streptococcus pneumoniae sigue siendo el patógeno predominante, ha aumentado la proporción de casos que implican otros organismos. H. influenzae se reseña ahora a menudo por ser la segunda causa más común de neumonía. Un 10% de los casos de neumonía por H. influenzae evolucionan a bacteremia. En los países desarrollados, la neumonía causada por H. influenzae no tipable es aparentemente una causa importante de morbilidad y mortalidad en niños.

El documento WO 96/33276 da a conocer el genoma completo de Haemophilus influenzae Rd y los posibles usos clínicos del mismo y de los polipéptidos codificados por el mismo.

Aunque se han desarrollado varias vacunas conjugadas polisacáridas de tipo H. influenzae, estas vacunas son ineficaces contra la enfermedad causada por otras cepas de H. influenzae (Scheifele D.W., Jadavji T.P., Law B.J., Gold R., Macdonald N.E., Lebel M.H., Mills E.L., Der y P., Halperin S.A., Morris R.F., Marchessault V. y Duclos P.J. (1996) “Recent trends in pediatric Haemophilus influenzae type b infections in Canada”. Can. Med. Assoc. J. 154: 1041-1047; Schulte E.E., Birkhead G.S., Kondracki S.F. y Morse D.L. (1994) “Patterns of Haemophilus influenzae type b invasive disease in New York State, 1987-1991 : the role of vaccination requirements for day-care attendance”. Pediatrics 94: 1014-1016) . La identificación de los antígenos protectores cruzados conservados es crítica para el desarrollo de una vacuna universal contra la infección y enfermedad por H. influenzae. Se han identificado proteínas de la membrana externa tales como P1, P2, P4, P6, PCP, OMP26 y D-15 o se están explorando actualmente como antígenos de vacuna potenciales (Foxwell A.R., Kyd J.M. y Cripps A.W. (1998) “Nontypeable Haemophilus influenzae: Pathogenesis and Prevention”. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 62: 294-308) . La proteína D-15 es el único inmunógeno conservado que se ha descrito en la bibliografía científica por ser capaz de conferir protección contra múltiples serotipos y cepas no tipables.

Por lo tanto, continúa habiendo una necesidad insatisfecha de polipéptidos de H. influenzae que puedan ser útiles para prevenir, diagnosticar y/o tratar infecciones por Haemophilus influenzae en individuos tales como seres humanos.

Sumario de la invención Según un aspecto, la presente invención proporciona un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido que tiene al menos un 70% de identidad con un segundo polipéptido que comprende una secuencia elegida de las SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 y 24 o fragmentos o análogos del mismo.

Según un aspecto, la presente invención se refiere a polipéptidos que comprenden una secuencia aminoacídica seleccionada de las SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22 y 24 o fragmentos o análogos de los mismos.

En otros aspectos, se proporcionan polipéptidos codificados por polinucleótidos de la invención, composiciones farmacéuticas y vectores que comprenden polinucleótidos de la invención ligados operativamente con una región de control de la expresión, así como células hospedadoras transfectadas con dichos vectores y procesos de producción de polipéptidos que comprenden cultivar dichas células hospedadoras en condiciones adecuadas para la expresión.

Breve descripción de los dibujos La Figura 1 representa la secuencia de ADN del gen BVH-NTHI1 de la cepa 12085 de H. influenzae no tipable; SEQ ID NO: 1.

La Figura 2 representa la secuencia aminoacídica deducida de BVH-NTHI1 completo de la cepa 12085 de H. influenzae no tipable; SEQ ID NO: 2.

La Figura 3 representa la secuencia de ADN del gen BVH-NTHI2 de la cepa 12085 de H. influenzae no tipable; SEQ ID NO: 3.

La Figura 4 representa la secuencia aminoacídica deducida de BVH-NTHI2 completo de la cepa 12085 de H. influenzae no tipable; SEQ ID NO: 4.

La Figura 5 representa la secuencia de ADN del gen BVH-NTHI3 de la cepa 12085 de H. influenzae no tipable; SEQ ID NO: 5.

La Figura 6 representa la secuencia aminoacídica deducida de BVH-NTHI3 completo de la cepa 12085 de H. influenzae no tipable; SEQ ID NO: 6.

La Figura 7 representa la secuencia de ADN del gen BVH-NTHI4 de la cepa 12085 de H. influenzae no tipable; SEQ ID NO: 7.

La Figura 8 representa la secuencia aminoacídica... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido aislado seleccionado de:

(a) un polipéptido que tiene más de un 99% de identidad con la secuencia aminoacídica expuesta en la SEQ ID NO: 10;

(b) un polipéptido que comprende la secuencia aminoacídica expuesta en la SEQ ID NO: 10;

(c) el polipéptido de (a) o (b) , en el que se elimina el residuo Met N-terminal; y

(d) el polipéptido de (a) o (b) , en el que se elimina la secuencia aminoacídica secretora; en el que el polipéptido aislado puede desencadenar una respuesta inmunitaria ante Haemophilus influenzae.

2. Una composición farmacéutica inmunogénica que comprende un polipéptido aislado seleccionado de:

(a) un polipéptido que tiene al menos un 70% de identidad con la secuencia aminoacídica expuesta en la SEQ ID NO:10;

(b) un polipéptido que tiene al menos un 80% de identidad con la secuencia aminoacídica expuesta en la SEQ ID NO:10;

(c) un polipéptido que tiene al menos un 85% de identidad con la secuencia aminoacídica expuesta en la 15 SEQ ID NO:10;

(d) un polipéptido que tiene al menos un 90% de identidad con la secuencia aminoacídica expuesta en la SEQ ID NO:10;

(e) un polipéptido que tiene al menos un 95% de identidad con la secuencia aminoacídica expuesta en la SEQ ID NO:10;

(f) un polipéptido que comprende la secuencia aminoacídica expuesta en la SEQ ID NO: 10;

(g) un polipéptido que comprende un fragmento inmunogénico consistente en al menos 15 aminoácidos contiguos de la secuencia aminoacídica expuesta en la SEQ ID NO: 10, en el que el fragmento inmunogénico puede desencadenar una respuesta inmunitaria ante Haemophilus influenzae;

(h) el polipéptido de (a) , (b) , (c) , (d) , (e) , (f) o (g) , en el que se elimina el residuo Met N-terminal; y

(i) el polipéptido de (a) , (b) , (c) , (d) , (e) , (f) o (g) , en el que se elimina la secuencia aminoacídica secretora; en la que el polipéptido aislado puede desencadenar una respuesta inmunitaria ante Haemophilus influenzae; y un portador, diluyente o coadyuvante farmacéuticamente aceptable.

3. Una composición farmacéutica según la reivindicación 2, en la que el polipéptido es como se define en la reivindicación 1.

4. Una composición farmacéutica según la reivindicación 2 o 3 para uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico de otitis media, sinusitis, bronquitis, neumonía y meningitis o bacteremia mediada por infección bacteriana por Haemophilus influenzae.

5. Una composición farmacéutica según la reivindicación 2 o 3 para su uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico de infección bacteriana por Haemophilus influenzae en un individuo susceptible de infección por 35 Haemophilus influenzae.

6. Una composición farmacéutica según la reivindicación 2 o 3 para su uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico de infección por Haemophilus influenzae.

7. Una composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, en la que (a)

Haemophilus influenzae es Haemophilus influenzae no tipable o (b) Haemophilus influenzae es Haemophilus 40 influenzae tipable.

Figura 1

Figura 2 Figura 3

Figura 4 Figura 5

Figura 6 Figura 7 Figura 8

Figura 9

Figura 10

Figura 11 Figura 12

Figura 13 Figura 14

Figura 15

Figura 16

Figura 17 Figura 18

Figura 19 Figura 20 Figura 21

Figura 22

Figura 23 Figura 24

Figura 25