Uso de al menos un inmunógeno de la proteína G del virus respiratorio sincicial (VRS) que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:

2 o fragmento de la misma, en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una infección por VRS, en el que dicho al menos un inmunógeno de la proteína G tiene un epítope en la región que abarca desde el aminoácido 165 hasta el aminoácido 195 de SEQ ID NO:2 que provoca una respuesta inmunitaria protectora sin provocar una respuesta inmunopatológica o provocando una respuesta inmunopatológica reducida

Vacuna de subunidad contra infección por el virus respiratorio sincicial.

Campo técnico

La presente invención se refiere generalmente a la prevención de una enfermedad infecciosa y, más específicamente, a composiciones y al uso de las mismas que comprenden uno o más inmunógenos de la proteína G del virus respiratorio sincicial y fragmentos o variantes de los mismos que pueden provocar inmunidad protectora sin provocar una respuesta inmunopatológica o con una respuesta inmunopatológica reducida (por ejemplo, reduciendo la patología pulmonar asociada).

Antecedentes

El virus respiratorio sincicial (VRS) es la causa más importante de infección del tracto respiratorio inferior (bronquiolitis aguda y neumonía) en la infancia (Glezen y col., Amer. J. Dis. Child. 140:543, 1986; Holberg y col., Am. J. Epidemiol. 133:1135, 1991; "Fields Virology", Fields, B. N. y col. Raven Press, N. Y. (1996), particularmente, capítulo 44, páginas 1313-1351 "Respiratory Syncytial Virus" de Collins, P., McIntosh, K., y Chanock, R. M.). Prácticamente todos los niños son infectados por el VRS a la edad de dos años y el 1-2% de todos los niños infectados requieren hospitalización (Holberg y col.; Parrott y col., Am. J. Epidemiol. 98:289, 1973). Los brotes de muertes por infección por VRS y del tracto respiratorio inferior en bebés y niños pequeños muestran una fuerte correlación (Anderson y col., J. Infect. Dis. 161:640, 1990) y las tasas de mortalidad entre los niños hospitalizados oscilan entre el 0,1-1% en EE.UU. y Canadá (Holberg y col.; Parrott y col.; Navas y col., J. Pediatr. 121:348, 1992; Law y col., Pediatr. Infect. Dis. J. 12:659, 1993; Ruuskanen y Ogra, Curr. Prob. Pediatr. 23:50,1993). Las consecuencias de la infección por VRS durante la infancia varían de bronquiolitis o neumonía hasta un riesgo elevado de asma infantil.

A pesar de los intensos esfuerzos que abarcan las cuatro últimas décadas, la búsqueda de una vacuna segura y eficaz contra el VRS sigue difícil de alcanzar. Las vacunas contra el VRS iniciales, que incluían virus inactivados con formalina y vivos atenuados (revisado en Murphy y col., Virus Res. 32:13, 1994), demostraron ser decepcionantemente no protectoras y en realidad condujeron a una enfermedad pulmonar más grave en los niños vacunados que posteriormente adquirieron infección por VRS natural. Las respuestas inmunopatológicas que especialmente implican la infiltración de células inflamatorias pueden subyacer probablemente a la lesión mediada por el VRS al tejido pulmonar. Los niños que recibieron la vacuna contra el VRS inactivado con formalina desarrollaron altos niveles de anticuerpos específicos de virus, pero los anticuerpos tenían bajos niveles de actividad neutralizante (Murphy y col., J. Clin. Microbiol. 24:197, 1986) y dejaron de protegerse contra la infección por VRS (Kim y col., Am. J. Epidemiol. 89:422, 1969; Kapikian y col., Am. J. Epidemiol. 89:405, 1969; Fulginiti y col., Am. J. Epidemiol. 89:435, 1969; Chin y col., Virol. 1:1, 1969).

Esfuerzos más recientes para el desarrollo de una vacuna contra el VRS se han centrado en procedimientos de subunidades y recombinantes. El VRS tiene dos glucoproteínas de superficie principales (designadas F y G) que se han examinado para uso en posibles vacunas. La proteína F participa en la fusión de membranas entre el virus y la célula diana (Walsh y Hruska, J. Virol. 47:171, 1983), mientras que se cree que la proteína G media en la unión del virus a un receptor celular (Levine y col., J. Gen. Virol. 68:2521, 1987). Tantos la proteína F como la G del VRS induce una fuerte inmunidad sérica y mucosa que son importantes para la protección contra infección por VRS (Glezen y col., 1986; Holberg y col.; Glezen y col., J. Pediatr. 98:708, 1981; Lamprecht y col., J. Infect. Dis. 134:211, 1976; Hemming y col., Clin. Microbiol. Rev. 8:22, 1995). Los estudios con ratones han demostrado que el VRS inactivado con formalina y algunos recombinantes de vacunas que codifican la proteína G indican una respuesta inflamatoria pulmonar perjudicial en la que los eosinófilos son un participante destacado (Connors y col., J Virol. 68:5321, 1994; Doherty, Trends Microbiol. 2:148, 1994; Waris y col., J. Virol. 70:2852, 1996; Graham y col., J. Immunol. 151:2032, 1993; Beasley y col., Thorax 43:679, 1988; Openshaw y col., Int. Immunol. 4:493, 1992).

Los eosinófilos y la citocina IL-5 atrayente de eosinófilos se consideran que son una característica de la denominada respuesta inmunitaria de tipo 2 que ha fomentado la idea que la inmunización con el antígeno del VRS tiene el potencial de desencadenar respuestas de tipo 2 dependientes de factores tales como la naturaleza de inmunógenos virales específicos y su ruta de presentación (Openshaw y col., 1992; Kakuk y col., J. Inject. Dis. 167:553, 1993; Openshaw y O'Donnell, Thorax 49:101, 1994). Un trabajo reciente indica que una parte de la región conservada de la proteína G del VRS participa en la inmunidad protectora contra el VRS y en la generación de respuestas inflamatorias, incluyendo la inducción de eosinofilia (Sparer y col., J. Expt'l. Med 187:1921, 1998; Tebbey y col., J. Expl'l. Med. 188:1967, 1998; Srikiatchachom y col., J. Virol. 73:6590, 1999; Varga y col., J. Immunol. 165:6487, 2000; Huang y Anderson, Vaccine 21:2500, 2003).

Por tanto, existe la necesidad de identificar y desarrollar composiciones terapéuticamente eficaces contra infecciones por el VRS, particularmente aquellas composiciones que puedan hacer de vacuna provocando inmunidad protectora sin inflamación pulmonar perjudicial asociada o con inflamación pulmonar perjudicial asociada reducida. Además, existe la necesidad de formulaciones de vacunas que puedan variarse para proteger contra o tratar la infección mediante diferentes subtipos y subgrupos inmunogénicos del VRS. La presente invención cumple tales necesidades y proporciona además otras ventajas relacionadas.

Breve resumen de la divulgación

La presente invención proporciona el descubrimiento de formulaciones terapéuticas de inmunógenos del virus respiratorio sincicial (VRS), particularmente inmunógenos de la proteína G útiles para provocar una respuesta inmunitaria protectora sin provocar una respuesta inmunopatológica, o provocando una reducida.

En un aspecto, la invención proporciona un procedimiento para tratar o prevenir una infección por VRS que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una composición que comprende al menos un inmunógeno de la proteína G del virus respiratorio sincicial o fragmento del mismo que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO: 2 o fragmento de la misma, en la que dicho inmunógeno de la proteína G tiene un epítope en la región que abarca desde el aminoácido 165 hasta el aminoácido 195 de SEQ ID NO: 2 que provoca una respuesta inmunitaria protectora sin provocar una respuesta inmunopatológica, o provocando una reducida, y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable a una dosis suficiente para provocar una respuesta inmunitaria específica para uno o más inmunógenos de la proteína G o fragmentos y variantes de los mismos. En una realización específica, el inmunógeno de la proteína G comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NOS:6. En todavía más realizaciones, la invención proporciona un procedimiento en el que la composición comprende además al menos un inmunógeno de la proteína F o inmunógeno de la proteína M del virus respiratorio sincicial, en el que los inmunógenos de la proteína F y la proteína M tienen un epítope que provoca una respuesta inmunitaria protectora sin provocar una respuesta inmunopatológica, o provocando una reducida, o tiene al menos dos inmunógenos de la proteína G.

En otra realización, cualquiera de los inmunógenos de la proteína G anteriormente mencionados y fragmentos o variantes de los mismos comprenden además una parte o resto hidrófobo (por ejemplo, para hacer de ancla o pie en un entorno lipídico tal como una membrana o proteosoma o liposoma), particularmente cuando se formulan con un vehículo de administración de adyuvante de proteosoma. En otras realizaciones, el resto hidrófobo comprende una secuencia de aminoácidos o un lípido. En ciertas realizaciones, el vehículo es un liposoma, y en otras realizaciones el liposoma contiene lípidos de Deinococcus radiodurans o a-galactosilfosfotidilglicerolalquilamina. En otra realización, cualquiera de las composiciones anteriormente mencionadas comprende además un adyuvante, tal como alumbre, adyuvante de Freund o una formulación basada en proteosomas (por ejemplo, un sistema de liberación de adyuvante de proteosoma). Preferentemente,...

1. Uso de al menos un inmunógeno de la proteína G del virus respiratorio sincicial (VRS) que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:2 o fragmento de la misma, en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una infección por VRS, en el que dicho al menos un inmunógeno de la proteína G tiene un epítope en la región que abarca desde el aminoácido 165 hasta el aminoácido 195 de SEQ ID NO:2 que provoca una respuesta inmunitaria protectora sin provocar una respuesta inmunopatológica o provocando una respuesta inmunopatológica reducida.

2. El uso según la reivindicación 1, en el que dicho inmunógeno de la proteína G comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:6.

3. El uso según la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho inmunógeno de la proteína G comprende además un resto hidrófobo.

4. El uso según la reivindicación 3, en el que dicho resto hidrófobo comprende una secuencia de aminoácidos.

5. El uso según la reivindicación 3, en el que dicha parte hidrófoba es un lípido.

6. El uso según la reivindicación 3, en el que dicho resto hidrófobo está en el extremo amino o en el extremo carboxi del inmunógeno de la proteína G.

7. El uso según la reivindicación 1, en el que el medicamento comprende un liposoma.

8. El uso según la reivindicación 1, en el que el medicamento comprende además un adyuvante.

9. El uso según la reivindicación 8, en el que dicho adyuvante comprende un adyuvante seleccionado de alumbre, fosfato de aluminio, proteosoma con o sin LPS, liposomas o un adyuvante de tipo emulsión de aceite y agua.

10. El uso según la reivindicación 1, en el que dicho medicamento comprende además al menos un inmunógeno de la proteína F o inmunógeno de la proteína M del virus respiratorio sincicial, en el que dicho inmunógeno de la proteína F y dicho inmunógeno de la proteína M tiene cada uno un epítope que provoca una respuesta inmunitaria protectora sin provocar una respuesta inmunopatológica o provocando una respuesta inmunopatológica reducida.

11. El uso según la reivindicación 1, en el que dicho medicamento tiene al menos dos inmunógenos de la proteína G.

12. El uso según la reivindicación, 1 ó 2, en el que dicho inmunógeno de la proteína G o fragmento del mismo comprende además una segunda secuencia de aminoácidos para formar una proteína de fusión.

13. El uso según la reivindicación 12, en el que dicha segunda secuencia de aminoácidos es una marca o una enzima.

14. El uso según la reivindicación 12, en el que dicha segunda secuencia de aminoácidos es tiorredoxina, polihistidina, o una combinación de las mismas.

15. El uso según la reivindicación 12, en el que dicha proteína de fusión comprende además un resto hidrófobo.

16. El uso según la reivindicación 15, en el que dicho resto hidrófobo está en el extremo amino o en el extremo carboxi de la proteína de fusión.

17. El uso según la reivindicación 14, en el que dicha proteína de fusión comprende además un resto hidrófobo.

18. El uso según la reivindicación 1, en el que dicha respuesta inmunopatológica es eosinofilia o asma.

19. El uso según la reivindicación 18, en el que dicha eosinofilia es eosinofilia pulmonar.

20. El uso según la reivindicación 1, en el que la infección se debe a un virus respiratorio sincicial del subgrupo A o subgrupo B o es debida a un virus respiratorio sincicial tanto del subgrupo A como del subgrupo B.

21. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 8 ó 9, en el que la administración del medicamento es adecuada para una administración mediante una vía seleccionada del grupo que está constituido por administración enteral, parenteral, transdérmica, transmucosa o nasal, o inhalación.

22. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 8 ó 9, en el que la administración del medicamento es adecuada para administración nasal.

23. Una composición que comprende al menos un inmunógeno de la proteína G del virus respiratorio sincicial (VRS) que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SEQ ID NO:2 o fragmento de la misma para uso en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de una infección por VRS en la que dicho al menos un inmunógeno de la proteína G o fragmento del mismo tiene un epítope en la región que abarca desde el aminoácido 165 hasta el aminoácido 195 de SEQ ID NO:2 que provoca una respuesta inmunitaria protectora sin provocar una respuesta inmunopatológica o provocando una respuesta inmunopatológica reducida.

24. La composición según la reivindicación 23, en la que dicho inmunógeno de la proteína G comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:6.

25. La composición según la reivindicación 23, en la que dicho inmunógeno de la proteína G comprende además un resto hidrófobo.

26. La composición según la reivindicación 25, en la que dicho resto hidrófobo comprende una secuencia de aminoácidos.

27. La composición según la reivindicación 25, en la que dicho resto hidrófobo es un lípido.

28. La composición según la reivindicación 25, en la que dicho resto está en el extremo amino o en el extremo carboxi del inmunógeno de la proteína G.

29. La composición según una cualquiera de la reivindicación 23 a 25, en la que dicho inmunógeno de la proteína G o fragmento del mismo comprende además una segunda secuencia de aminoácidos para formar una proteína de fusión.

30. La composición según la reivindicación 29, en la que dicha segunda secuencia de aminoácidos es una marca o una enzima.

31. La composición según la reivindicación 30, en la que dicha segunda secuencia de aminoácidos es tiorredoxina, polihistidina, o una combinación de las mismas.

32. La composición según la reivindicación 29, en la que dicha proteína de fusión comprende además un resto hidrófobo.

33. La composición según la reivindicación 32, en la que dicho resto hidrófobo está en el extremo amino o en el extremo carboxi de la proteína de fusión.

34. Una preparación farmacéutica que comprende una composición según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 33.

35. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones 23-33, que comprende además un adyuvante.

36. La composición según la reivindicación 35, en la que el adyuvante comprende un adyuvante seleccionado de alumbre, fosfato de aluminio, proteosoma con o sin LPS, liposomas o un adyuvante de tipo emulsión de aceite y agua.

37. El uso según la reivindicación 10, en el que el adyuvante comprende un liposoma con lípido A.

38. La composición según la reivindicación 37, en la que el adyuvante comprende un liposoma con lípido A.